如何准确测定饲料中的粗蛋白质含量

粗蛋白质是饲料最重要的常规营养指标之一，目前主要测定方法是凯氏定氮法。该方法操作简单，但过程比较复杂，如果不注意细节，往往会导致结果准确度不高。

1 采样及制备

试样采集必须具有代表性，这是准确测定饲料粗蛋白质的基础。样品制备也很关键，粉碎后要能全部通过40目分样筛并立即放入密封容器。

2 称样

国家标准规定称取试样0.5～1 g，浓缩饲料可称取0.5±0.05 g，配合饲料可称取0.7±0.05 g，这样能保证滴定时消耗盐酸标准溶液的体积较为一致，有利于提高测定的准确度。

3 消煮

国家标准规定用消煮炉或电炉，建议选择带程序升温的凯氏专用消煮炉，能保证升温均匀，重复性好，准确度高。国家标准规定使用五水硫酸铜和无水硫酸钾，消煮液容易结晶，建议使用商品化硫酸钾和硒粉，产品为片状，使用方便，没有干扰、负反应发生，消煮时间短，反应彻底，能提高测定准确度。最好用程序升温，开始时低温（200～300℃）消煮，防止试样起泡向上溢时碳化后的颗粒附于消化管壁上，消煮不完全；泡沫消失后使温度上升到420℃，保持1 h。

4 空白测定

因为空白测定消耗盐酸标准溶液的体积值直接带入计算公式，所以空白测定这一步骤对于提高测定结果的准确度至关重要。测定时的步骤要完全和试样测定步骤一致，所用硫酸、蒸馏水、盐酸标准滴定溶液、氢氧化钠溶液、硼酸吸收液等要为同一批次产品并配制足够一批试验使用，否则要重新测定空白值。

5 标准滴定溶液

盐酸标准滴定溶液的浓度直接影响结果的准确度，配制和标定一定要严格按照GB/T 601的规定。配制时使用分析纯或优级纯盐酸，标定时做到双人八平行，工作基准试剂无水碳酸钠按规定温度灼烧至恒重，同时做空白试验。

6 质控实验

凯氏定氮的质控实验是测定分析纯硫酸铵的含氮量。国标要求精确称取硫酸铵0.2 g代替试样，按氨的蒸馏步骤进行操作，没有提到加硫酸，为了更准确测定硫酸铵含氮量、更好和试样测定时的酸碱度保持一致，可添加和试样同样量的硫酸。为了提高测定准确度，在试剂批次改变时都做质控实验。质控实验测得硫酸铵的含氮量应为21.19±0.2%，否则应检查加减、蒸馏和滴定各步骤是否正确。

7 滴 定

滴定是提高测定准确度的关键所在。用移液器加入硼酸吸收液的混合指示剂0.1mL，能保证滴定终点时颜色变化一致，便于把握滴定终点；吸收液的体积以达到100mL为宜，这也是为了把握滴定终点的颜色；滴定速度保持6～8mL·min-1，和标定时的滴定速度保持一致，滴定近终点时要缓慢加入，待颜色变化和空白测定颜色一致时停止；读数时要从滴定台上取下滴定管，让滴定管自然垂直，双眼平视凹液面，记录滴定消耗体积。