红芪替代补中益气汤中的黄芪对老龄小鼠脾T淋巴细胞的影响

邢文婷， 张李峰， 卫东锋， 程卫东，4*， 杜 娟

（1.兰州大学中西医结合研究所， 甘肃 兰州 730000； 2.兰州大学基础医学院免疫学研究所， 甘肃 兰州730000； 3.中国中医科学院中医临床基础医学研究所， 北京 100700； 4.南方医科大学中医药学院， 广东 广州 510515； 5.甘肃中医学院护理学院， 甘肃 兰州 730000）

红芪替代补中益气汤中的黄芪对老龄小鼠脾T淋巴细胞的影响

邢文婷1， 张李峰2， 卫东锋3， 程卫东1，4*， 杜 娟5

（1.兰州大学中西医结合研究所， 甘肃 兰州 730000； 2.兰州大学基础医学院免疫学研究所， 甘肃 兰州730000； 3.中国中医科学院中医临床基础医学研究所， 北京 100700； 4.南方医科大学中医药学院， 广东 广州 510515； 5.甘肃中医学院护理学院， 甘肃 兰州 730000）

目的 比较含红芪与含黄芪的补中益气汤含药血清对老龄小鼠脾 T淋巴细胞作用的影响。 方法 通过 MTT法检测含红芪和含黄芪的补中益气汤含药血清对老龄鼠脾淋巴细胞的刺激增殖作用，确定最佳稀释浓度和作用时间；比较含红芪和含黄芪的补中益气汤含药血清对脾 T淋巴细胞的增殖能力、 T淋巴细胞亚群百分比及细胞培养上清中 IL-2 的水平。 结果 当含药血清质量分数为 40%， 时间为 48 h 时， 补中益气汤含药血清对老龄小鼠脾淋巴的促增殖作用最佳。含红芪与含黄芪的补中益气汤含药血清均可改善老龄鼠脾 T淋巴细胞的增殖、 T细胞亚群中 CD28+T淋巴细胞数及细胞培养上清中 IL-2 的水平。 含红芪的补中益气汤在提高老龄小鼠 T淋巴细胞的增殖能力和 IL-2 的分泌方面优于含黄芪补中益气汤 （P＜0.01）。 结论 含红芪与含黄芪的补中益气汤均可通过调节 T淋巴细胞起到一定的抗免疫老化的作用， 且含红芪的补中益气汤在促进脾细胞增殖和分泌 IL-2 方面优于含黄芪的补中益气汤， 具有统计学意义。

红芪；黄芪；补中益气汤；老龄小鼠脾T淋巴细胞；抗免疫老化

红芪与黄芪同科异属，是甘肃优质道地药材［1］。红芪和黄芪的性味、 功效与主治基本相同，自古二者不分，在我国西北地区尤甚［2］。 但目前黄芪野生资源几近枯竭，引种黄芪形态变异，混杂现象严重［3］， 无法满足中药材市场对中药黄芪的需求量。因此合理开发中药红芪资源以弥补黄芪资源的紧缺，具有一定的科学和实际意义。研究表明红芪和黄芪虽在成 分上有一定差异［4-5］， 但 均具有免疫调节 作 用［6-7］， 而 且 作 用 十 分 相 似［8-9］， 说 明红芪在免疫功能方面替换黄芪具有可行性。

中医防治疾病的主要临床应用形式是以君、臣、佐、使组方为特征的中药复方，并不是单味药的累加［10］， 因此有必要研究作用于复方中的红芪和黄芪可否替换。以黄芪为君药的补中益气汤提高免疫力的 功 效 也 已 得 到 验 证［11-13］， 且 红 芪补 中 益气汤与原方一样具有免疫调节功能，用红芪对T淋巴细胞的调节作用优于用黄芪［14］。 随着人口老龄化的日趋加重，对衰老的研究也相应增多。研究表明衰老过程中， 机体免疫系统最早最易受损［15］，且衰老和T淋巴细胞的关系已成为免疫老化学说研究的核心内容［16］。

在前期工作中，实验组已证实复方玉屏风散用黄芪在免疫调节作用和抗免疫老化方面与用红芪具有相似性［17］。 为探讨在其他复方中红、 黄芪的可替换性，本实验进一步以相同剂量的红芪代替黄芪，比较含红芪与含黄芪补中益气汤含药血清对自然衰老小鼠脾T淋巴细胞的影响，研究其抗免疫老化作用。为开发红芪的药用价值提供可靠的理论依据，并为研究红芪补中益气汤和黄芪补中益气汤抗免疫老化作用提供实验室依据。

1 材料

1.1 实验药物 经典补中益气汤由炙黄芪、 党参、炙甘草、 白术 （炒）、 当归、 升麻、 柴胡、 陈皮组成，以同剂量红芪代替黄芪，配伍成含红芪的补中益气汤。上述所用药材均购自兰州市药材市场，由兰州大学基础医学院程卫东教授鉴定合格，所用药物剂量参照 《中国药典》 2010 年版［18］， 并根据体表面积［19］换算得出小鼠的灌胃剂量为 4 g生药 /（kg·d）。 将两组药材各加适量水浸泡0.5 ～1 h，煎两次 （1.5 h， 1 h）， 混合滤液， 浓缩至 1 g生药/mL， 4 ℃保存备用。

1.2 动物 青龄健康昆明种小鼠 120 只， 体质量18 ～22 g， 雌雄各半； 18 月龄健康昆明种老龄小鼠40 只， 体质量 45 ～50 g， 雌雄各半， 上述小鼠均由兰州大学实验动物中心提供，合格号：SKXK（甘） 201106-0014。

1.3 试剂 胎牛灭活血清 （杭州四季青生物工程材料有限公司）； 改良 RPMI-1640 培养基 （赛默飞世尔生物化学制品有限公司）； EZ-SepTMMOUSE IX淋巴细胞分离液 （深圳达科为生物技术有限公司）； MTT（美国 Sigma公司）； ConA （ 美国 Sigma公司）； SDS （ 天津化学试剂一厂）； FITC-抗小鼠CD3、 PE-抗小鼠 CD28 单克隆抗体 （ Biolegend 公司）； IL-2 酶联免疫吸附 （ ELISA） 试剂盒 （ 深圳达科为生物技术有限公司）。

1.4 仪器 A06061422 超净台 （苏州安泰空气技术有限公司）； CO2培养箱 （日本 SANYO公司）；低温冰箱 （日本 SANYO公司）；倒置显微镜 （德国 OLYMPUS 公司）； TDL-40B型和 TGL-16G型离心机 （上海安亭科学仪器厂）； 全自动酶标仪 （美国 BIO-RAD 公 司）；流 式 细 胞 仪 （美 国 贝 克 曼COULTER公司）。

2 方法

2.1 含药血清的制备 取 120 只健康昆明种小鼠随机分为3组：红芪补中益气汤 （含红芪的补中益气汤水提物）、 黄芪补中益气汤 （含黄芪的补中益气汤水提物） 和空白血清组 （生理盐水组）， 每组 40 只。 中药组分别给予 4 g生药/（kg·d）， 空白血清组给予 0.9%生理盐水， 3 组灌胃量均为0.4mL/（20 g·d）， 每日 1 次，连续 15 d； 末次给药后 1 h （灌胃前禁食， 自由饮水 12 h）［20］， 摘眼球取血， 待全血凝固后， 3 500 r/min 离心 15 min，收集血清，同组混合， 56 ℃、 30 min 水浴灭活后，用孔径为 0.22 μm的滤器除菌分装， -80 ℃保存备用。

2.2 小鼠脾淋巴细胞悬液的制备 老龄和青龄小鼠颈脱臼处死，超净台下无菌取其脾脏。严格按照EZ—SepTM小鼠淋巴细胞分离液的说明书提取脾淋巴细胞，制备老龄鼠和青龄鼠脾淋巴细胞悬液备用。

2.3 脾淋巴细胞增殖活性的测定［21］用完全 RPMI-1640 培养液稀释上述 “2.1” 项制备好的红芪补中益气汤、黄芪补中益气汤和空白血清组含药血清， 使 含 药 血 清 的 质 量 分 数 分 别 为 1.25%、2.5%、 5%、10%、 20%、 40%、 80%。 调整上述“2.2”项制备的老龄鼠脾淋巴细胞悬液的细胞密度为 1 ×105个/mL， 加入 96 孔细胞培养板， 每孔100 μL， 再加入 3 组不同质量分数的含药血清各100 μL， 每个质量分数设 12 个复孔。同时设老龄组 （不加含药血清老龄鼠脾淋巴细胞） 和青龄组（青龄鼠脾淋巴细胞）。 另设不同质量分数含药血清和只加完全 RPMI-1640 培养液的空白孔。 分别培养24 h、48 h 和 72 h 后， 加入终质量浓度为 5 mg/mL的 MTT 20 μL， 孵育 4 h， 加入 100 μL 10%的 SDS， 吹打混匀， 37 ℃过夜， 于酶标仪 570 nm处测 OD值， 空白孔校正调零， 结果以 OD值表示。 根据 MTT的结果选择含药血清的最佳稀释质量分数和培养时间，与老龄小鼠脾淋巴细胞共培养用于下述实验。

2.4 对 ConA诱导的老龄小鼠脾 T淋巴细胞体外增殖的测定［22］取 “2.2”项制备出的老龄鼠脾淋巴细胞悬液， 细胞密度调整为 2 ×105个/mL， 加入 96 孔细胞培养板， 每孔 50 μL； 并分别加入“2.3” 项所确定的红芪补中益气汤、 黄芪补中益气汤和空白血清组最佳质量分数含药血清，每孔50 μL。老龄组和青龄组脾细胞悬液每孔 50 μL。每组样本 8 个复孔， 其中 4 孔加 ConA 100 μL， 4孔不加 ConA。 设每组最佳质量分数含药血清和只加 完 全 RPMI-1640 培 养 液 的 空 白 孔。 按 上 述“2.3”项所确定的最佳培养时间培养 48 h 后， 各孔加 MTT 20 μL（终质量浓度为 5 mg/mL）， 孵育4 h， 加 100 μL 10%的 SDS， 吹打混匀， 37 ℃过夜， 于酶联免疫检测仪 570 nm处测 OD值， 空白孔校正调零，实验结果用 OD值表示。最后按以下公式计算剌激指数： 刺激指数 =ConA诱导孔 OD均值/无 ConA孔 OD均值。

2.5 对老龄小鼠脾淋巴细胞 CD3 和 CD28 分子表达的测定 取上述 “2.2”项制备的老龄鼠脾淋巴细胞悬液， 调整细胞密度为 2 ×107个/mL， 加入24 孔细胞培养板， 每孔 500 μL， 并 分别加入“2.3”项确定的红芪补中益气汤、 黄芪补中益气汤和空白血清组最佳质量分数含药血清， 每孔 500 μL， 老龄组和青龄组脾细胞悬液每孔 500 μL， 五组样本均设3个复孔。 培养48 h后， 收集细胞至2 mL离心管， 离心，将培养上清保留， -20 ℃保存备用。 0.01 mol/L PBS 洗涤细胞沉淀， 1 mol/L PBS 重悬， 调整细胞数约为 1 ×107个/mL。 取各组细胞悬液 100 μL， 分别加 FITC-抗小鼠 CD3 1 μL，PE-抗小鼠 CD28 2.5 μL，轻轻混合，4 ℃避光孵育30 min，PBS 洗 1 次细胞， 2 500 r/min 离心 5 min，弃上清， 细胞沉淀中加 500 μL PBS， 混匀， 上流式细胞仪检测。

2.6 培养上清 IL-2 的测定 取 “2.5”项所得培养上清， 酶联免疫吸附方法检测培养上清 IL-2 的水平，操作步骤严格按说明书进行，结果经酶标仪450 nm波长测定 OD值，并根据对照品绘制标准曲线， 计算其质量浓度， 单位为 pg/mL。

3 结果

3.1 含药血清对脾淋巴细胞增殖活性的影响 结果如表1所示，随着含药血清质量分数的升高和细胞培养时间的延长，脾细胞的增殖活性先增加后减少。 在相同的培养时间下， 40%的含药血清脾淋巴细胞增殖活性均高于其他质量分数组，与相同质量分数空白血清组比较，脾淋巴细胞增殖活性均显著增高 （P＜0.01）， 且红芪补中益气汤优于黄芪补中益气汤 （P＜0.05）。 同时， 培养 48 h 的增殖活性优于 24 h 和 72 h。 因此将含药血清定为 40%，培养时间定为48 h作为后续实验的研究条件。

表1 含黄芪和含红芪补中益气汤含药血清与脾细胞增殖的时效量效关系 （， n=10）Tab.1 Time-effect and concentration-response relationship of Buzhong Yiqi Decoction containing Astragali Radix and con taining Hedysari Radix on sp leen cells（， n=10）

表1 含黄芪和含红芪补中益气汤含药血清与脾细胞增殖的时效量效关系 （， n=10）Tab.1 Time-effect and concentration-response relationship of Buzhong Yiqi Decoction containing Astragali Radix and con taining Hedysari Radix on sp leen cells（， n=10）

注： 与青龄组比较，**P＜0.01； 与相同质量分数的空白血清组比较，△△P＜0.01； 与相同血清质量分数黄芪补中益气汤比较，▲P＜0.05

不同培养时间脾细胞增殖活性24 h 48 h 72 h青龄组分 组 质量分数/% 1.062 ±0.108 1.312 ±0.145 1.100 ±0.085老龄组 0.596 ±0.033** 0.682 ±0.075** 0.555 ±0.047**空白血清组 1.25 0.585 ±0.100 0.649 ±0.103 0.569 ±0.079空白血清组 2.5 0.580 ±0.057 0.684 ±0.119 0.611 ±0.073空白血清组 5 0.583 ±0.064 0.669 ±0.095 0.589 ±0.103空白血清组 10 0.609 ±0.070 0.681 ±0.092 0.623 ±0.111空白血清组 20 0.646 ±0.082 0.682 ±0.109 0.630 ±0.075空白血清组 40 0.651 ±0.074 0.737 ±0.040 0.646 ±0.045空白血清组 80 0.695 ±0.096 0.806 ±0.053 0.680 ±0.086黄芪补中益气汤 1.25 0.584 ±0.078 0.647 ±0.103 0.587 ±0.065黄芪补中益气汤 2.5 0.573 ±0.085 0.645 ±0.108 0.600 ±0.055黄芪补中益气汤 5 0.583 ±0.076 0.707 ±0.125 0.589 ±0.068黄芪补中益气汤 10 0.671 ±0.072 0.727 ±0.116 0.636 ±0.086黄芪补中益气汤 20 0.754 ±0.071 0.822 ±0.118 0.797 ±0.125黄芪补中益气汤 40 0.910 ±0.121△△ 0.984 ±0.029△△ 0.903 ±0.061△△黄芪补中益气汤 80 0.750 ±0.109 0.793 ±0.149 0.786 ±0.130红芪补中益气汤 1.25 0.594 ±0.060 0.675 ±0.119 0.666 ±0.068红芪补中益气汤 2.5 0.696 ±0.057 0.657 ±0.077 0.651 ±0.071红芪补中益气汤 5 0.682 ±0.083 0.727 ±0.144 0.695 ±0.033红芪补中益气汤 10 0.741 ±0.129 0.720 ±0.145 0.698 ±0.108红芪补中益气汤 20 0.786 ±0.108 0.829 ±0.155 0.757 ±0.081红芪补中益气汤 40 0.949 ±0.107△△ 1.071 ±0.102△△▲ 0.946 ±0.045△△红芪补中益气汤80 0.770 ±0.077 0.875 ±0.079 0.777 ±0.084

3.2 对 ConA诱导的老龄小鼠脾 T淋巴细胞体外增殖的影响 结果如表2所示，与青龄组比较，老龄组脾淋巴细胞体外自身增殖、 ConA诱导增殖能力和刺激指数明显降低 （P＜0.01）。 含红芪和含黄芪的补中益气汤含药血清分别作用于老龄小鼠脾淋巴细胞，与空白血清组比较，增殖能力和刺激指数均升高 （P＜0.05）。且含红芪补中益气汤效果优于含黄芪补中益气汤 （P＜0.05）。

3.3 对老龄小鼠脾淋巴细胞 CD3 和 CD28 分子表达的影响 结果如表3所示，与青龄组比较，老龄组 CD3+CD28+T淋巴细胞亚群减少， CD3+CD28-T淋巴细胞亚群增多 （P＜0.01）。 含红芪和含黄芪的补中益气汤含药血清作用于老龄小鼠脾淋巴细胞后， 与空白血清组比较， 脾淋巴细胞 CD28 分子的表达发生改变， CD3+CD28+T淋巴细胞亚群增多 （P＜0.05）。

3.4 对培养上清 IL-2 的影响 结果如表 4 所示，与青龄组比较， 老龄组体外分泌 IL-2 的水平明显减少 （P＜0.01）。 含红芪和含黄芪的补中益气汤含药血清分别与老龄小鼠脾淋巴细胞共培养后，与空白血清组比较， 培养上清 IL-2 的水平增多 （ P＜0.01）。 含红芪补中益气汤优于含黄芪补中益气汤（P＜0.05）。

表 2 含黄芪和含红芪补中益气汤含药血清对 T淋巴细胞增殖的影响 （¯， n=10）Tab.2 Effect of Buzhong Yiqi Decoction containing Astragali Radix and containing Hedysari Radix on proliferative capacity of T lym phocytes（ ¯， n=10 ）

表 2 含黄芪和含红芪补中益气汤含药血清对 T淋巴细胞增殖的影响 （¯， n=10）Tab.2 Effect of Buzhong Yiqi Decoction containing Astragali Radix and containing Hedysari Radix on proliferative capacity of T lym phocytes（ ¯， n=10 ）

注：与青龄组比较，**P＜0.01； 与空白血清组比较，△P＜0.05，△△P＜0.01； 与黄芪补中益气汤比较，▲P＜0.05，▲▲P＜0.01

组 别 剂量/（g·kg-1） 自身增殖 ConA诱导增殖 刺激指数青龄组 —1.180 ±0.177 1.976 ±0.135 1.702 ±0.199老龄组 — 0.669 ±0.114** 0.687 ±0.110** 1.029 ±0.026**空白血清组 4 0.671 ±0.091 0.702 ±0.086 1.049 ±0.067黄芪补中益气汤 4 0.795 ±0.020△ 1.010 ±0.040△△ 1.270 ±0.036△红芪补中益气汤 4 0.902 ±0.008△△▲ 1.245 ±0.070△△▲▲ 1.380 ±0.075△△▲

表 3 含黄芪和含红芪补中益气汤含药血清对 CD3+、 CD28+脾淋巴细胞亚群的影响 （， n=10）Tab.3 Effect of Buzhong Yiqi Decoction containing Astragali Radix and containing Hedysari Radix on CD3+and CD28+in sp leen T lym phocyte subgroups（， n=10）

表 3 含黄芪和含红芪补中益气汤含药血清对 CD3+、 CD28+脾淋巴细胞亚群的影响 （， n=10）Tab.3 Effect of Buzhong Yiqi Decoction containing Astragali Radix and containing Hedysari Radix on CD3+and CD28+in sp leen T lym phocyte subgroups（， n=10）

注： 与青龄组比较，**P＜0.01； 与空白血清组比较，△P＜0.05

组 别 剂量/（g·kg-1） CD3+CD28-/% CD3+CD28+/%青龄组 —3.03 ±0.65 35.07 ±3.58老龄组 — 6.23 ±0.80** 26.12 ±2.03**空白血清组 4 5.97 ±1.11 26.33 ±2.17黄芪补中益气汤 4 5.36 ±0.40 28.83 ±1.56△红芪补中益气汤 4 5.42 ±0.60 29.27 ±2.21△

表4 含黄芪和含红芪补中益气汤含药血清对脾淋巴细胞培养上清 IL-2 水平的影响 （， n=10）Tab.4 Effect of Buzhong Yiqi Decoction containing Astragali Radix and containing Hedysari Radix on IL-2 leve1 of sp leen T lym phocytes（， n=10）

表4 含黄芪和含红芪补中益气汤含药血清对脾淋巴细胞培养上清 IL-2 水平的影响 （， n=10）Tab.4 Effect of Buzhong Yiqi Decoction containing Astragali Radix and containing Hedysari Radix on IL-2 leve1 of sp leen T lym phocytes（， n=10）

注：与青龄组比较，**P＜0.01； 与空白血清组比较，△△P＜0.01； 与黄芪补中益气汤比较，▲P＜0.05

组 别 剂量/（g·kg-1）IL-2/（pg·m L-1）青龄组 —112.64 ±10.02老龄组 — 15.73 ±3.64**空白血清组 4 16.65 ±5.36黄芪补中益气汤 4 63.78 ±4.66△△红芪补中益气汤 4 71.00 ±6.87△△▲

4 结论

基于目前在免疫调节方面，对红、黄芪单味药和在复方中应用的研究以及T淋巴细胞在抗免疫老化中所起的关键作用，实验组前期研究表明红芪替换黄芪应用于复方补中益气汤在细胞免疫调节方面具有相似性［14］，本实验进一步选择了以黄芪为君药的补中益气汤，用红芪代替原方中黄芪配伍成含红芪的补中益气汤，对抗免疫老化作用进行了体外对比研究。 实验选择中药血清药 理学方 法［23］，用中药复方水提物给小鼠灌胃制备含药血清对细胞进行体外培养。 通过 MTT法观察含药血清作用于老龄鼠脾淋巴细胞刺激增殖作用，实验结果表明以血清质量分数为 40%的含药血清培养 48 h 增殖效果最佳，且含红芪补中益气汤效果优于含黄芪补中益气汤。

T淋巴细胞功能变化对衰老有一定影响，是免疫老化 的突 出 表 现［24-25］。 随着 年 龄 增长， 体 外 有丝分裂原刺激后细胞增殖能力降低［26］， 且 IL-2 的生成减少［27］。 刺激 T淋巴细胞体外增殖的丝裂原应首选 ConA［28］。 本实验再次用 MTT法观察含药血清作用于老龄鼠脾细胞对T淋巴细胞增殖的反应， 结果表明， 两方 40%的含药血清对老龄小鼠脾细胞作用48 h， 均能不同程度地提高老龄鼠 T淋巴细胞自身增殖和 ConA诱导的增殖能力， 刺激指数也相应增加，且红芪补中益气汤的作用更好。

伴随年龄的增长，T淋巴细胞功能相关的许多分子发生改变， CD28-T细胞频率是老年个体免疫功能不全的关键预 报因子［29-30］。 CD28 分子 的减少已作为免疫老化的重要标志之一［30］， 在细胞复制性衰老的进程中起关键作用［31］。 本实验将含红芪与含黄芪补中益气汤含药血清与老龄小鼠脾淋巴细胞共培养后， 发现加药老龄鼠脾细胞 CD3+CD28+T淋巴细胞数量较不加药老龄组增加， CD3+CD28-T淋巴细胞数减少， 红芪补中益气汤与黄芪补中益气汤作用相似。

IL-2 主要由活化的 CD4 和 CD8 T细胞产生，是参与免疫应答的重要细胞因子［32］。 随着年龄的增长， 机体 T淋巴 细 胞 分泌 IL-2 的 能 力明 显 减弱［33］。本实验结果也证实老龄组脾淋巴细胞的培养上清中 IL-2 的水平减少， 分别与红芪和黄芪补中益气汤含药血清作用后，老龄小鼠T淋巴细胞分泌的 IL-2 的能力增强， 且红芪补中益气汤作用效果优于黄芪补中益气汤。

综上所述，红芪补中益气汤与黄芪补中益气汤均可通过调节T淋巴细胞在抗免疫老化方面起到一定作用，二者作用相似，且红芪补中益气汤在促进脾细胞增殖和分泌 IL-2 方面优于黄芪补中益气汤，因此红芪代替补中益气汤中黄芪在抗免疫老化方面具有可行性。本研究为开发甘肃道地药材红芪的药用价值及深入研究红芪与黄芪在复方中的抗免疫老化机制提供了实验依据。

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Substitution of Hedyseri Radix for Astragali Radix in Buzhong Yiqi Decoction results in change of sp leen T lym phocytes of aging m ice

XINGWen-ting1， ZHANG Li-feng2， WEIDong-feng3， CHENGWei-dong1，4*， DU Juan5
（1.Instituteof Integrated Chineseand Western Medicine， Lanzhou University， Lanzhou 730000， China； 2.Immunologic Institute， Schoolof Basic Medical Science， Lanzhou University， Lanzhou 730000， China； 3.Institute of Basic Research in Clinical Medicine， China Academy of Chinese Medical Sciences，Beijing 100700， China； 4.Institute of Traditional Chinese Medicine， Southern Medical University， Guangzhou 510515， China； 5.College of Nursing，Gansu College of Traditional Chinese Medicine， Lanzhou 730000， China）

AIM To study the effect of the substitution of Hedysari Radix for Astragali Radix in Buzhong Yiqi Decoction on spleen T lymphocytes of agingmice.M ETHODS MTTmethod was used to detect the proliferation of the serum from both Hedyseri Radix and AstragaliRadix of Buzhong YiqiDecoction acting on spleen lymphocyte in aged mice， and to determine the optimum incubation time and serum concentrations.The comparison wasmade with the proliferative capacity of T lymphocytes， the percentage of T-lymphocyte subsets and the level of IL-2 in the culture supernatant.RESULTS MTT results showed that 40%of drug concentration with serum training 48 h stimulated proliferation bestby acting on spleen lymphocyte in agedmice.While both could significantly increased T lymphocyte proliferation， the T lymphocyte count of CD28+in T lymphocyte subgroup， and the level of IL-2. Hedysari Radix was superior to Astragali Radix in Buzhong Yiqi Decoction in raising T lymphocyte proliferation and IL-2 leve1.CONCLUSION Buzhong Yiqi Decoction containing Hedysari Radix has a similar role in anti-immunosenescence as Astragali Radix， and Hedysari Radix is statistically better in terms of T cell proliferation and IL-2 leve1.

Hedyseri Radix； Astragali Radix； Buzhong Yiqi Decoction； spleen T lymphocytes of aging mice；anti-immunosenescence

R285.5

： A

： 1001-1528（2014）03-0450-07

10.3969/j.issn.1001-1528.2014.03.003

2013-06-17

国家自然科学基金面上项目 （81373806） ； 2012 年省卫生厅中医药科研立项课题 （ GZK-2012-43） ； 兰州大学中央高校基本科研业务费专项资金资助 （ lzujbky-2013-172）

邢文婷 （1988—） ， 女， 硕士生， 从事中西医结合临床研究。 TeL： 18298331246， E-mail： xingwentinghaha@126.com

*通信作者： 程 卫东 （ 1963—） ， 男， 教 授， 博 士， 博士 生 导 师， 从事中 西 医 结合治 疗 常 见 病 研 究。 Tel： （ 0931 ） 8915184， E-mail：chengweidong888@sina.com