多囊卵巢综合征大鼠模型建立及其血清25羟基维生素D3水平关联性分析

谢博超 陈忠东

（湖南省衡阳市南华大学附属第一医院，湖南 衡阳 421001）

多囊卵巢综合征大鼠模型建立及其血清25羟基维生素D3水平关联性分析

谢博超 陈忠东

（湖南省衡阳市南华大学附属第一医院，湖南 衡阳 421001）

目的 运用来曲唑诱导建立多囊卵巢综合征（PCOS）大鼠模型，并分析维生素D干预对PCOS大鼠相关血清指标的关联性。方法 运用来曲唑诱导SD大鼠建立PCOS大鼠模型30只，与相同SD常规饲养大鼠15只比较分析两组大鼠血清LH、FSH、E2、P、T以及LH/FSH比值，并观察卵巢组织学变化。剩余15只实验组大鼠模型进行维生素D干预饲养，比较分析上述血清指标，并进行相关性分析。结果 实验组与对照组比较，血清E2无差异（P＞0.05）；实验组LH升高、FSH升高、LH/FSH比值增大、P降低，两组比较有统计学意义（P＜0.05）；实验组大鼠血清T显著升高，与对照组比较有显著统计学意义（P＜0.01）；维生素D干预后血清激素水平与干预前比较，血清LH、FSH、T以及LH/FSH均减低，差异均有统计学意义（P＜0.05或P＜0.01）；血清E2轻微升高，干预前后差异无统计学意义（P＞0.05）；血清P升高，干预前后差异有统计学意义（P＜0.05）。维生素D干预后大鼠BMI、HOMA-IR、T以及FPG呈负相关关系（P＜0.05）；与E2呈正相关关系（P＜0.05）；此外，大鼠血清PRL、FSH、LH、TC与血清25-（OH）D3无相关性。结论 来曲唑诱导建立的PCOS大鼠血清激素水平和卵巢形态改变于人体接近，符合要求。维生素D缺乏与PCOS发生有密切关系，其预防和治疗PCOS有潜在价值。

来曲唑；多囊卵巢综合征；25羟基维生素D3；相关性

目前，多囊卵巢综合征在妇科生殖疾病中越来月常见，据统计，该病占育龄妇女的5%～10%[1]。PCOS的主要临床特征为患者雄激素水平过高以及持续性不排卵状态。目前该病的具体发病机制尚无统一的定论。为有效的研究PCOS发病后机体相关激素的变化情况以及治疗方案，本研究以来曲唑诱导大鼠建立PCOS模型，并进行维生素D干预研究，分析其相关性。

1 材料与方法

1.1 材料

来曲唑片为江苏瑞恒医药股份有限公司生产，批号20130811；放射免疫试剂盒为武汉博士德生物工程公司生产，批号SA1020；所用45只6周龄清洁级雌性SD大鼠购于湖南斯莱克景达实验动物有限公司，产品型号：12910371116。

1.2 方法

将45只6周龄清洁级雌性SD大鼠随机分为实验组30只与对照组15只。实验组大鼠运用来曲唑1 mg/（kg·d）溶于1%羧甲基纤维素10 mL，连续灌服21 d。在最后一次灌服药物后12 h，随机选取15只实验组大鼠麻醉后心脏采血，以2000 r/min离心20 min后抽取血清进行检测，然后取出大鼠卵巢和子宫，随后进行称重，并将卵巢石蜡包埋HE然后后显微镜下观察。对照组15只大鼠进行灌服1%羧甲基纤维素，其余饲养与实验组相同，共计21天。用相同的方法采取大鼠血液进行检测，并称重卵巢与子宫，并用相同方法对卵巢进行制片观察。实验组剩余15只大鼠在运用来曲唑1 mg/（kg·d）溶于1%羧甲基纤维素10 mL，连续灌服21 d后接受维生素D灌服，连续3周。然后进行心脏采血，离心后取血清分析，并称重卵巢与子宫，也相同方法对卵巢进行制片观察。多有大鼠实验前按照实验动物3R原则进行关怀。

表1 来曲唑造模对大鼠血清激素水平的影响分析（）

表1 来曲唑造模对大鼠血清激素水平的影响分析（）

组别 LH(IU/L) FSH(IU/L) E2(pmol/L) P(nmol/L) T(nmol/L) LH/FSH实验组 15.89±5.13 5.25±2.31 23.18±9.73 57.38±20.72 10.38±2.67 3.13±0.67对照组 8.31±3.76 3.92±1.89 25.07±8.31 97.32±21.38 2.03±1.82 2.07±0.54 P值 ＜0.05 ＜0.05 ＞0.05 ＜0.05 ＜0.01 ＜0.05

表2 维生素D干预后大鼠血清激素水平影响分析（）

表2 维生素D干预后大鼠血清激素水平影响分析（）

项目 LH(IU/L) FSH(IU/L) E2(pmol/L) P(nmol/L) T(nmol/L) LH/FSH干预前 15.89±5.13 5.25±2.31 23.18±9.73 57.38±20.72 10.38±2.67 3.13±0.67干预后 10.72±4.16 3.98±2.11 24.12±9.18 73.14±19.26 4.36±2.27 2.23±0.59 P值 ＜0.05 ＜0.05 ＞0.05 ＜0.05 ＜0.01 ＜0.05

1.3 观察指标

主要观察指标包括：促黄体生成素（LH），促卵泡生成素（FSH），雌二醇（E2），孕激素（P），睾酮（T），催乳素（PRL），体制指数（BMI），胰岛素抵抗（HOMA-IR），空腹胰岛素（FPG），总胆固醇（TC）。

1.4 统计学方法

将实验所得数据录入统计学分析软件SPSS19.0进行统计学处理、分析。计量资料采用均数±标准差（）表示，运用t检验进行统计学分析，检验水准为α=0.05，P＞0.05为差异无统计学意义，P＜0.05为差异具有统计学意义，P＜0.01为差异具有显著统计学意义。并采用SPSS19.0进行相关性分析。

2 结 果

2.1 卵巢切片观察发现实验组大鼠卵巢质量增加，镜下见早期发育的卵泡，其囊状扩张卵泡也明显增加，但泡内卵母细胞消失，黄体也消失或隐见。对照组无明显变化。

2.2 实验组与对照组大鼠血清激素水平分析：实验组大鼠经过来曲唑用药后，与对照组比较，血清E2无差异（P＞0.05）；此外，两组大鼠血清比较，实验组LH升高、FSH升高、LH/FSH比值增大、P降低，两组比较差异均有统计学意义（P＜0.05）；并且实验组大鼠血清T显著升高，与对照组比较差异具有显著统计学意义（P＜0.01）。具体结果见表1。

2.3 实验组大鼠维生素D干预后血清激素水平分析：实验组POCS模型大鼠进行维生素D干预后血清激素水平分析结果显示，干预后与干预前比较，大鼠血清LH、FSH、T以及LH/FSH均减低，差异均有统计学意义（P＜0.05或P＜0.01）；血清E2轻微升高，干预前后差异无统计学意义（P＞0.05）；血清P升高，干预前后差异有统计学意义（P＜0.05）。具体结果见表2。

2.4 血清25-（OH）D3水平与血清指标相关性分析 维生素D干预后血清相关指标相关性分析结果显示，大鼠BMI、HOMA-IR、T以及FPG呈负相关关系（P＜0.05）；与E2呈正相关关系（P＜0.05）；此外，大鼠血清PRL、FSH、LH、TC与血清25-（OH）D3无相关性。

3 讨 论

表3 血清25-（OH）D3水平与血清指标相关性分析

3.1 来曲唑建立PCOS大鼠模型的理论依据和评价

芳香化酶是雌激素形成的限速酶，存在于人体的各组织中，卵巢内该酶的活性下降或水平过低便可导致雄激素水平升高，从而可引发多囊卵巢综合征[2]。Kafali等[3,4]以来曲唑诱导雌性大鼠建立PCOS 动物模型，取得满意效果。本研究运用来曲唑诱导后发现，实验组LH升高、FSH升高、P降低，实验组大鼠血清T显著升高，LH/FSH比值也增大。结果提示来曲唑诱导PCOS大鼠模型的建立有效。但是，单纯雄激素造模使得大鼠卵巢无明显白膜增厚，重量也只有一般的1/2，这就与人POCS有较大不同[5]。但本研究通过来曲唑诱导建立PCOS大鼠模型基本符合人体的特性，有研究基础和价值。

3.2 维生素D对PCOS的干预

目前，对PCOS的确切发病机制尚不明确，但能肯定的是其发病与机体过量雄激素有关，而雌性个体雄激素过高是一系列内分泌功能紊乱造成的，目前认为主要与肥胖和糖尿病有关。本研究显示，实验组大鼠进行维生素D干预后，大鼠血清LH、FSH、T以及LH/FSH均减低，血清P升高。相关性分析发现，25-（OH）D3水平与大鼠BMI、HOMA-IR、T以及FPG呈负相关关系；与E2呈正相关关系。表明血清25-（OH）D3水平对PCOS有明显相关性，对PCOS病情有治疗性缓解作用。Panidis等[6]研究也显示，调节维生素D有利减轻PCOS相关代谢和生殖问题。

总之，来曲唑诱导大鼠建立PCOS与人体情况基本符合，有较佳的实验价值。研究结果显示，体内25-（OH）D3水平能反应机体内分泌情况，PCOS大鼠体内25-（OH）D3水平较低，通过维生素D干预后，PCOS大鼠体内激素有较大改变，趋向对照组大鼠的激素水平。从而可以推测人体25-（OH）D3水平检测可作为PCOS患者的检测指标，并对人体进行维生素D干预可能具有治疗作用。因目前缺乏较多的临床治疗病例和体会的报道，也缺乏较多的研究，故本研究只能提供一定的研究基础，具体机制尚待进一步研究，临床治疗也需更多实验和研究。

[1] 杨正望,周芳,谈珍瑜,等.不同造模方法对大鼠多囊卵巢综合征模型的影响[J].中国实验动物学报,2010,18(1):13-17.

[2] Auvray P,Nativelle C,Bureau R,et al.Study of substrate specificity of human aromatase by site directed mutagenesis[J].Eur J Biochem, 2002,269(5):1393-1405.

[3] Kafali H,Iriadam M,Ozardl I,et al.Letrozole-Induced Polycystic Ovaries in the Rat: A New Model for Cystic Ovarian Disease[J]. Arch Med Res,2004,35(10):103.

[4] Li XD,Strauss L,Makela S,et al.Multiple Structural and Functionaol Abnormalities in the P450 A rom atase Expressing Transgenic Male Mice Are Ameliorated by a P450 A rom atase Inhibitor[J]. Am J Pathol,2004,164(12):1039.

[5] Archer JS,Chang IL.Hirsutism and acne in polycystic ovary syndrome[J].Best Pract Res Clin Obstet Gynaecol,2004,18(5):737-754.

[6] Panidis D,Balaris C,Farmakiotis D,et al.Serum parathyroid hormone concentrations are increased in women with polycystic ovary syndrome[J].Clin Chem,2005,51(9):1691.

R711.75

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：1671-8194（2014）05-0056-03