牛奶中三聚氰胺残留量的高效液相色谱检测分析

黄儒添 廖少平 叶小玲

（广东省博罗县疾病预防控制中心检验科，广东 惠州 516100）

牛奶中三聚氰胺残留量的高效液相色谱检测分析

黄儒添 廖少平 叶小玲

（广东省博罗县疾病预防控制中心检验科，广东 惠州 516100）

目的 利用高效液相色谱法对牛奶样品中三聚氰胺残留量进行测定。方法 抽取本县牛奶批发或零售点的50份牛奶样品，均采用高效液相色谱法测定样品中三聚氰胺含量，对结果进行分析探讨。结果 三聚氰胺在1.0～100 mg/mL浓度范围内线性关系良好，回归方程：y=39500x-1920（y为样品峰面积，x为样品浓度），相关系数r=0.9997；检测方法准确度与精密度均符合残留分析的要求；50份牛奶样品中48份未检出三聚氰胺，1份残留量0.7 mg/kg（未超标），1份6.2 mg/kg（超标），本次抽检牛奶样品三聚氰胺残留量超标率2.0%。结论 高效液相色谱检测分析牛奶中三聚氰胺残留量的操作简便，重现性好，可满足我科对液态牛奶中三聚氰胺残留量的分析检测要求。

三聚氰胺；牛奶；高效液相色谱法；检测

此前，在婴儿乳制品中发现了三聚氰胺而引发了史上最大规模的全球食品召回事件。一些不法商人将三聚氰胺加入劣质牛奶中用以提高劣质牛奶的表观蛋白质含量，人服用后会导致肾结石，婴幼儿的脏器功能发育未完全，摄入三聚氰胺可能死亡。因此，检测原料乳与乳制品中三聚氰胺的残留量，对保护消费者的经济权益及人身安全有着重要意义。三聚氰胺检测方法包括重量法、苦味酸法、电位滴定法等[1,2]。本文对50份牛奶样品采用高效液相色谱法检测三聚氰胺含量，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

为本县每一个牛奶批发站、零售站编上号码，用随机数字表法从中抽取50个作为调查对象，取新鲜牛奶样品进行三聚氰胺残留量测定。

1.2 仪器及试剂

1.2.1 仪器：Waters 2695高效液相色谱仪；Waters 2487紫外检测器；Waters SCX阳离子交换固相萃取柱（60 mg/3 mL）；固相萃取装置；分析天平（感量0.00001 g）；离心机（＞10000 r/min）；振荡器；涡旋混合器；超声波水浴；50 mL带塞离心管；0.22 μm滤膜；有机相。

1.2.2 试剂：三聚氰胺标准品（含量99.6%，国家饲料中心提供）；柠檬酸（分析纯）；水（超纯水）；甲醇（色谱纯）；乙腈（色谱纯）；氨水（浓度25%～28%）；三氯乙酸（分析纯）；辛烷磺酸钠（色谱纯）；盐酸溶液（浓度0.1 mol/L）；乙腈水溶液（浓度75%）；氨水甲醇溶液（含氨水5%）；三氯乙酸溶液（浓度1%）。

1.3 溶液配制

1.3.1 流动相B：称取柠檬酸2.10 g、辛烷磺酸钠2.16 g于1000 mL容量瓶中，用超纯水溶解、定容到1000 mL。

1.3.2 三聚氰胺标准液：精密称取三聚氰胺标准品50 mg于100 mL量瓶中，用乙腈溶解、定容，置于4 ℃冰箱中保存备用。分别精密吸取三聚氰胺标准中间液用流动相B稀释、定容至10 mL容量瓶中，得到1.0、2.0、20.0、40.0、80、100 μg/mL标准液。

1.3.3 待测样品溶液：准确称取牛奶样品5 g于50 mL带塞离心管中，加乙腈5 mL、三氯乙酸溶液15.0 mL，剧烈振荡25 min，离心5 min，取上清液待测。

1.4 测定方法

阳离子交换固相萃取柱依次用3.0 mL甲醇、3.0 mL超纯水活化，加入5.0 mL待测样品溶液，依次用3.0 mL盐酸（0.1 mol/L）、3.0 mL甲醇洗柱，用3.0 mL氨水甲醇溶液洗脱收集，用50 ℃氮气吹干。1.0 mL流动相B溶解残渣，有机相滤膜过滤后供高效液相色谱分析。称取空白牛奶5 g按以上方法处理后进行空白试验，取空白牛奶5 g加入适量三聚氰胺标准液处理后按以上方法处理后进行色谱分析。

1.5 含量计算

待测样品溶液中三聚氰胺残留量以质量分数x表示，单位mg/kg，x=[A×Cs×V×1000）/(As×m×1000)]×f。A：待测样品溶液中三聚氰胺的峰面积，Cs：三聚氰胺标准液中三聚氰胺的浓度（μg/mL），V：溶解样品最终定容的体积，As：三聚氰胺标准液中三聚氰胺的峰面积，m：样品的称取量（g），f：分取倍数（20/5）。

2 结果分析

2.1 标准曲线

三聚氰胺在1.0～100mg/mL浓度范围内线性关系良好，回归方程：y=39500x-1920（y为样品峰面积，x为样品浓度），相关系数r=0.9997。

2.2 方法的准确度及精密度分析

称取空白牛奶5g进行空白试验，色谱分析结果显示样品中的杂质峰对三聚氰胺出峰无影响。取空白牛奶5g加入3个不同浓度的三聚氰胺标准液处理后进行色谱分析，每个样品重复分析3次，回收率范围为89.0%～105.0%，相对标准偏差3.14%～4.97%，其准确度与精密度均符合残留分析的要求。样品添加回收率见表1。

表1 牛奶样品添加回收率分析

2.3 样品分析

50份牛奶样品中，48份未检出三聚氰胺，1份检出三聚氰胺残留量0.7 mg/kg，1份检出三聚氰胺残留量6.2 mg/kg。按照我国卫生部门的规定，液态奶（包括原料乳）、奶粉、其他配方乳粉中三聚氰胺的限量值2.5 mg/kg，本次抽检的牛奶样品中三聚氰胺残留量超标率为2.0%（1/50）。

3 讨 论

三聚氰胺简称三胺，学名三氨三嗪，分子式C3N6H6，本品可溶于乙腈、甲醇、甲醛、乙酸等，在乙二醇、乙醇、甘油中微溶，难溶于水，可于硫酸、盐酸、草酸等成盐，是一种重要的氮杂环有机化工原料[3]。三聚氰胺的动物实验表明，本品虽无遗传毒性也无致癌作用，但摄入量大、时间长可在泌尿系统形成结石，引起肾功能衰竭，甚至死亡。

三鹿牌婴幼儿奶粉时间发生后，食品安全问题再次引起人们的关注，得到国家高度重视。国家标准（GB/T22388-2008）中规定了原料奶、乳制品、含乳制品中三聚氰胺的三种检测方法为HPLC法、HPLC-MS/MS法、GC-MS/MS法。高效液相色谱检测分析牛奶中三聚氰胺残留量的操作简便、重现性好，可满足我科对液态牛奶中三聚氰胺残留量的分析检测要求。为了让企业确实履行社会责任，此次专项检查抽查了我县市场上50批次液态牛奶，残留量未超标的可正常销售，对于检测不合格的产品要实行产品下架，同时对生产企业进行整改，切实保障消费者的健康安全。

[1] 国家技术监督局.GB/T 9567-1997.工业三聚氰胺[S].北京:中国标准出版社,1997.

[2] 戚冬伟.电位滴定-联机测试法对饲料中的三聚氰胺残留量分析[J].畜牧与饲料科学,2009,30(1):77-78.

[3] 蔡勤仁,欧阳颖瑜,钱振杰,等.超高效液相色谱-电喷雾串联质谱法测定饲料中残留的三聚氰胺[J].色谱,2008,26(3):339-342.

R155.57

：B

：1671-8194（2014）05-0058-02