金山、金焰绣线菊组织培养技术体系的建立1)

杜明广，孙海滨

(1.黑龙江省林业科学院江山娇实验林场，黑龙江宁安157432；2.黑龙江省林业科学院，哈尔滨150081)

金山绣线菊(Spiraea×bumalda‘Goalden Mound’)落叶小灌木，高达30～60cm，冠幅可达60～90cm。老枝褐色，新枝黄色，枝条呈折线状，不通直，柔软。花期长，彩叶期5个月。喜光，稍耐阴，极耐寒，耐旱，易成型。

金焰绣线菊(Spiraea×bumaldacv.coldfiame)，落叶灌木。株高0.4～0.6m，冠幅0.7～0.8m。新梢顶端幼叶红色，下部叶片黄绿色，花期长达4个月。喜光照及温暖湿润的气候，耐寒，耐修剪，可作地被。

金焰绣线菊叶色有丰富的季相变化，橙红色新叶，黄色叶片和冬季红叶颇具感染力。花期长，花量多，是花叶俱佳的新优小灌木。可单株修剪成球型，或群植作色块，或作花镜、花坛植物。植株大小控制在30cm 左右。一片橙红色新叶，似朵朵红花开放，园林景观观赏效果很好。

1 实验材料与方法

1.1 实验材料采集

试材采自黑龙江省森林植物园珍贵树种园，母株选取生长无病虫害、冠型饱满、健壮、生长状况基本一致的绣线菊。外植体选取金山绣线菊、金焰绣线菊的幼嫩茎段为试验材材。

1.2 实验设计与试验方法

外植体的处理选取健壮植株的幼嫩茎段，将叶子除去，在清水下冲洗2h左右。在超净工作台内进行材料灭菌消毒。首先用70%酒精浸30s，之后采用0.1% HgCl2进行7min消毒处理，然后用无菌水冲洗3次。将灭菌的金山、金焰绣线菊嫩枝放在无菌纸上，用无菌刀将其切成2.0cm左右的带2～3个腋芽的茎段，接种于初代培养基上，实验采用正交实验设计。

2 结果与分析

2.1 初代培养基选择

以MS和WPM为初代基本培养基。在MS培养基中共设置5组进行对比，分别为6-BA1.0 mg/L+NAA0.1 mg/L；6-BA1.5mg/L+NAA0.1 mg/L；6-BA2.0 mg/L+NAA0.1 mg/L；6-BA2.0mg/L+NAA0.15mg/L；6-BA2.0mg/L+NAA0.2mg/L；在WPM培养基中只设置一种培养，以6-BA2.0mg/L+NAA0.1mg/L进行初代培养。每种培养基设置5个重复，每个培养基内接种2～3个外植体，30d后进行统计见表1。

表1 初代培养基筛选

在初代培养基上进行带芽茎段的诱导培养，30d后观测结果见表1。从表1中可以看出，6号培养基WPM+6-BA2.0mg/L+NAA0.1mg/L对金山、金焰绣线菊嫩茎的组织培养有良好的效果，所用时间最少且效果最佳。1号、2号、3号、4号、5号培养基对金山绣线菊、金焰绣线菊嫩茎的组织培养有一定的促进作用，其中3号培养基的促进效果稍微明显，并有展叶的趋向，表明在以MS为基本培养基，在6-BA浓度一定的情况下，NAA的浓度以0.1mg/L为最佳；另外1号培养基中的外植体萌动最晚，组培苗长势最差，表明在以MS为基本培养基，NAA浓度一定的情况下，6-BA的浓度以1.0 mg/L为最差。

由此可见，以WPM为基本培养基，芽的诱导和分化情况远远好于以MS作为基本培养基，这表明WPM培养基比MS培养基培养效果好。WPM培养基在接种4d后达到萌动并展叶，大大提高了培养的速率，是金山、金焰绣线菊最适的初代培养基。

2.2 继代增殖培养基选择

金山、金焰绣线菊以WPM为继代增殖培养的基本培养基，附加不同浓度的激素后，设计出以下培养基：6-BA0.25mg/L+NAA0.1mg/L，培养基6-BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L和培养基6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L。在上述3种培养基中筛选增殖培养基，添加2%蔗糖，每种培养基设置4个重复，接种30d后分别进行统计结果。

将2～3cm长的无菌苗从茎段上切下，再分别将其切成1～2cm的带1～2个腋芽的茎段，转入继代增殖培养基中进行培养，30d后统计结果见表2。从表2可以看出，1号培养基几乎没有增殖迹象表现，2、3号培养基表现出增殖迹象，并在3号培养基上绣线菊长势最好，2号培养基虽然长势良好，但有些只能形成愈伤组织并不生长，不能达到增殖的目的。分析比较得出，3号培养WPM+6-BA1.0 mg/L+NAA0.1mg/L为金山、金焰绣线菊的最适增殖培养基。

表2 增殖培养基筛选

2.3 壮苗与生根

以WPM为基本培养基，配方采用不同的激素配比(IBA0.3mg/L+NAA0.2mg/L)培养基、(IBA0.3mg/L+NAA0.5mg/L)培养基、(IBA0.3mg/L+NAA1.0mg/L)培养基。在3种培养基中进行壮苗生根培养，每种培养基设置4个重复，接种12d后统计生根情况，对生根的长度、生的条数以及培养苗的高度进行统计。

表3 生根培养基筛选

将生长健壮、高2～3cm的无根苗转入生根培养基中，培养12d后调查统计试验结果。从表3可以看出，3种培养基培育12d后茎均有生长，且3种培养基中外植体均能生根，经观察比较，其中培养基WPM+IBA0.3mg/L+NAA0.2mg/L在壮苗的同时可以达到较好的生根效果。

3 结论

3.1 选择健壮的母树，以带腋芽的茎段为外植体，建立无菌苗繁育体系。

3.2 以WPM为基本培养基，增殖培养基为WPM+BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L+2%蔗糖。

3.3 生根培养WPM+IBA0.3mg/L+NAA0.2mg/L。

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