荧光分光光度法测定水产品中的石油烃

马瑞欣　苏欢欢　梁艳红　孙伟彬　安志业　张勇

石油是一种成份复杂的混合物，主要包括饱和烃、芳香烃类化合物、沥青、树脂类等。随着石油工业的发展，石油烃已成为造成海洋污染的主要物质之一，特别是其中的芳香烃类化合物是对水生生物构成危害的主要部分。水中的石油烃能被吸附于水体中的悬浮颗粒和胶体颗粒，鱼类通过体肤渗透、呼吸代谢蓄积在体内，造成鱼类体型弯曲畸形，影响鱼类的生长繁殖。双壳贝类由于从水中摄食悬浮颗粒和胶体颗粒，对石油烃的富集能力很强，石油烃可抑制双壳类的免疫力，增强疾病的易感性；水中的石油烃被鱼贝富集后，通过食物链危害人体健康。目前生物体内的石油烃测定方法主要有紫外法[1]、荧光分光光度法[2-5]。GB17378.6-2007中石油烃的测定采用荧光分光光度法，但该方法检测批量样品时，可操作性差。因此本文对实验条件进行了研究和改进，以适用于批量样品的检测，并对实验应注意的问题进行了总结。

1材料与方法

1.1仪器与设备

荧光分光光度计（日本日立，F-7000）、 涡旋混合振荡器（Ms3，广州仪科）、数显恒温振荡器（上海梅香，SHY-2）、千分之一电子天平（赛多利斯CP323S）、 万分之一电子天平（赛多利斯，BT224S）、超纯水仪（millipore）、离心机（湖南湘仪，TDZ5-WS）。

1.2主要试剂与材料

脱芳石油醚（色谱纯或分光纯，沸点60～90 ℃）；无水乙醇（色谱纯）；氢氧化钠（优级纯），氯化钠（优级纯），二氯甲烷（色谱纯）；

标准贮备溶液：购自国家海洋环境监测中心，浓度1 000 μg/mL，采用20号重柴油和润滑油为原料配制而成。

实验所用水为超纯水。

2实验方法

2.1样品预处理

贝类：用蒸馏水洗净贝壳外部附着物，取软体组织和体液匀浆后放入磨口玻璃瓶中，-20 ℃保存备用。

4讨论

4.1碱解条件

实验比较了两种条件下的碱解结果，（1）35 ℃恒温水浴振荡11 h；（2）35 ℃烘箱中放置11 h，每隔1 h 涡旋振荡60 min。实验发现，两种情况下的标准工作曲线的线性、回收率和相对标准偏差相差无几，但由于烘箱水解每隔1 h涡旋振荡一次，比较浪费人力，因此选用35 ℃恒温水浴振荡碱解条件。

4.2本方法相对于GB17378.6-2007中的石油烃测定做了以下改进

碱解温度由室温、每隔1 h振荡一次，改为35 ℃恒温水浴振荡，避免了温度变化的影响，同时节省了人力。

由50 ℃旋转蒸发浓缩萃取液后再氮吹至干改为40 ℃旋转蒸发至干，缩短了操作时间，增强了方法的可操作性。

由于定容后的溶液不一定澄清，定容后增加了离心过程。

4.3实验中应注意的问题

样品的制备过程中避免接触塑料器具，尤其是对于定容后的浑浊溶液，应离心而不能用过滤膜。

样品称量时注意不要沾到皂化瓶口，否则会造成碱解不完全。

样品的均匀性对数据的影响非常大，由于鱼贝的不同部位富集石油烃的能力不同[6]，因此样品预处理和称样时均要注意保证样品的均匀性。

石油醚、无水乙醇、二氯甲烷的荧光强度：本实验选用了色谱纯或分光纯的试剂，其荧光强度在360 nm处无吸收，对检测结果不会造成影响。

所用分液漏斗为聚四氟乙烯活塞，不能使用涂抹了凡士林的磨口塞分液漏斗。

5结论

应用该法检测贝类中的石油烃含量，有的样品最终得到的上机液中会出现凝胶状物质，造成测定结果不准确；鱼虾检测的最终上机溶液澄清，回收率好。因此该法不完全适用于贝类等物质中石油烃的测定，但能很好地应用于鱼虾中石油烃的检测。

参考文献：

[1] 尚龙生，孙茜，徐恒振，等.紫外分光光度法测定贻贝体内石油烃的方法研究[J].海洋环境科学，1998，17（1）：62-65

[2] 贾小平，林钦，吕晓瑜，等.荧光分光光度法测定海洋贝类总石油烃的方法研究[J].湛江海洋大学学报，1999，119（4）： 30-35

[3] 尚龙生，许乙烈，马永安，等.荧光分光光度法测定海藻中的石油烃[J].分析化学研究简报，1997，25： 205-207

[4] GB17378.6-2007，海洋生物监测[s] 第6部分：生物体分析.北京：中国标准出版社，2008

[5] 张海燕，周德庆.荧光分光光度法测定水产品中石油烃的方法研究[J].海洋水产研究，2008，29（4）：106-111

[6] 杨广杏，万军明，麦志勤.鱼类石油烃污染剖析[J].环境与开发，1995，10（3）：25-26

石油是一种成份复杂的混合物，主要包括饱和烃、芳香烃类化合物、沥青、树脂类等。随着石油工业的发展，石油烃已成为造成海洋污染的主要物质之一，特别是其中的芳香烃类化合物是对水生生物构成危害的主要部分。水中的石油烃能被吸附于水体中的悬浮颗粒和胶体颗粒，鱼类通过体肤渗透、呼吸代谢蓄积在体内，造成鱼类体型弯曲畸形，影响鱼类的生长繁殖。双壳贝类由于从水中摄食悬浮颗粒和胶体颗粒，对石油烃的富集能力很强，石油烃可抑制双壳类的免疫力，增强疾病的易感性；水中的石油烃被鱼贝富集后，通过食物链危害人体健康。目前生物体内的石油烃测定方法主要有紫外法[1]、荧光分光光度法[2-5]。GB17378.6-2007中石油烃的测定采用荧光分光光度法，但该方法检测批量样品时，可操作性差。因此本文对实验条件进行了研究和改进，以适用于批量样品的检测，并对实验应注意的问题进行了总结。

1材料与方法

1.1仪器与设备

荧光分光光度计（日本日立，F-7000）、 涡旋混合振荡器（Ms3，广州仪科）、数显恒温振荡器（上海梅香，SHY-2）、千分之一电子天平（赛多利斯CP323S）、 万分之一电子天平（赛多利斯，BT224S）、超纯水仪（millipore）、离心机（湖南湘仪，TDZ5-WS）。

1.2主要试剂与材料

脱芳石油醚（色谱纯或分光纯，沸点60～90 ℃）；无水乙醇（色谱纯）；氢氧化钠（优级纯），氯化钠（优级纯），二氯甲烷（色谱纯）；

标准贮备溶液：购自国家海洋环境监测中心，浓度1 000 μg/mL，采用20号重柴油和润滑油为原料配制而成。

实验所用水为超纯水。

2实验方法

2.1样品预处理

贝类：用蒸馏水洗净贝壳外部附着物，取软体组织和体液匀浆后放入磨口玻璃瓶中，-20 ℃保存备用。

4讨论

4.1碱解条件

实验比较了两种条件下的碱解结果，（1）35 ℃恒温水浴振荡11 h；（2）35 ℃烘箱中放置11 h，每隔1 h 涡旋振荡60 min。实验发现，两种情况下的标准工作曲线的线性、回收率和相对标准偏差相差无几，但由于烘箱水解每隔1 h涡旋振荡一次，比较浪费人力，因此选用35 ℃恒温水浴振荡碱解条件。

4.2本方法相对于GB17378.6-2007中的石油烃测定做了以下改进

碱解温度由室温、每隔1 h振荡一次，改为35 ℃恒温水浴振荡，避免了温度变化的影响，同时节省了人力。

由50 ℃旋转蒸发浓缩萃取液后再氮吹至干改为40 ℃旋转蒸发至干，缩短了操作时间，增强了方法的可操作性。

由于定容后的溶液不一定澄清，定容后增加了离心过程。

4.3实验中应注意的问题

样品的制备过程中避免接触塑料器具，尤其是对于定容后的浑浊溶液，应离心而不能用过滤膜。

样品称量时注意不要沾到皂化瓶口，否则会造成碱解不完全。

样品的均匀性对数据的影响非常大，由于鱼贝的不同部位富集石油烃的能力不同[6]，因此样品预处理和称样时均要注意保证样品的均匀性。

石油醚、无水乙醇、二氯甲烷的荧光强度：本实验选用了色谱纯或分光纯的试剂，其荧光强度在360 nm处无吸收，对检测结果不会造成影响。

所用分液漏斗为聚四氟乙烯活塞，不能使用涂抹了凡士林的磨口塞分液漏斗。

5结论

应用该法检测贝类中的石油烃含量，有的样品最终得到的上机液中会出现凝胶状物质，造成测定结果不准确；鱼虾检测的最终上机溶液澄清，回收率好。因此该法不完全适用于贝类等物质中石油烃的测定，但能很好地应用于鱼虾中石油烃的检测。

参考文献：

[1] 尚龙生，孙茜，徐恒振，等.紫外分光光度法测定贻贝体内石油烃的方法研究[J].海洋环境科学，1998，17（1）：62-65

[2] 贾小平，林钦，吕晓瑜，等.荧光分光光度法测定海洋贝类总石油烃的方法研究[J].湛江海洋大学学报，1999，119（4）： 30-35

[3] 尚龙生，许乙烈，马永安，等.荧光分光光度法测定海藻中的石油烃[J].分析化学研究简报，1997，25： 205-207

[4] GB17378.6-2007，海洋生物监测[s] 第6部分：生物体分析.北京：中国标准出版社，2008

[5] 张海燕，周德庆.荧光分光光度法测定水产品中石油烃的方法研究[J].海洋水产研究，2008，29（4）：106-111

[6] 杨广杏，万军明，麦志勤.鱼类石油烃污染剖析[J].环境与开发，1995，10（3）：25-26

石油是一种成份复杂的混合物，主要包括饱和烃、芳香烃类化合物、沥青、树脂类等。随着石油工业的发展，石油烃已成为造成海洋污染的主要物质之一，特别是其中的芳香烃类化合物是对水生生物构成危害的主要部分。水中的石油烃能被吸附于水体中的悬浮颗粒和胶体颗粒，鱼类通过体肤渗透、呼吸代谢蓄积在体内，造成鱼类体型弯曲畸形，影响鱼类的生长繁殖。双壳贝类由于从水中摄食悬浮颗粒和胶体颗粒，对石油烃的富集能力很强，石油烃可抑制双壳类的免疫力，增强疾病的易感性；水中的石油烃被鱼贝富集后，通过食物链危害人体健康。目前生物体内的石油烃测定方法主要有紫外法[1]、荧光分光光度法[2-5]。GB17378.6-2007中石油烃的测定采用荧光分光光度法，但该方法检测批量样品时，可操作性差。因此本文对实验条件进行了研究和改进，以适用于批量样品的检测，并对实验应注意的问题进行了总结。

1材料与方法

1.1仪器与设备

荧光分光光度计（日本日立，F-7000）、 涡旋混合振荡器（Ms3，广州仪科）、数显恒温振荡器（上海梅香，SHY-2）、千分之一电子天平（赛多利斯CP323S）、 万分之一电子天平（赛多利斯，BT224S）、超纯水仪（millipore）、离心机（湖南湘仪，TDZ5-WS）。

1.2主要试剂与材料

脱芳石油醚（色谱纯或分光纯，沸点60～90 ℃）；无水乙醇（色谱纯）；氢氧化钠（优级纯），氯化钠（优级纯），二氯甲烷（色谱纯）；

标准贮备溶液：购自国家海洋环境监测中心，浓度1 000 μg/mL，采用20号重柴油和润滑油为原料配制而成。

实验所用水为超纯水。

2实验方法

2.1样品预处理

贝类：用蒸馏水洗净贝壳外部附着物，取软体组织和体液匀浆后放入磨口玻璃瓶中，-20 ℃保存备用。

4讨论

4.1碱解条件

实验比较了两种条件下的碱解结果，（1）35 ℃恒温水浴振荡11 h；（2）35 ℃烘箱中放置11 h，每隔1 h 涡旋振荡60 min。实验发现，两种情况下的标准工作曲线的线性、回收率和相对标准偏差相差无几，但由于烘箱水解每隔1 h涡旋振荡一次，比较浪费人力，因此选用35 ℃恒温水浴振荡碱解条件。

4.2本方法相对于GB17378.6-2007中的石油烃测定做了以下改进

碱解温度由室温、每隔1 h振荡一次，改为35 ℃恒温水浴振荡，避免了温度变化的影响，同时节省了人力。

由50 ℃旋转蒸发浓缩萃取液后再氮吹至干改为40 ℃旋转蒸发至干，缩短了操作时间，增强了方法的可操作性。

由于定容后的溶液不一定澄清，定容后增加了离心过程。

4.3实验中应注意的问题

样品的制备过程中避免接触塑料器具，尤其是对于定容后的浑浊溶液，应离心而不能用过滤膜。

样品称量时注意不要沾到皂化瓶口，否则会造成碱解不完全。

样品的均匀性对数据的影响非常大，由于鱼贝的不同部位富集石油烃的能力不同[6]，因此样品预处理和称样时均要注意保证样品的均匀性。

石油醚、无水乙醇、二氯甲烷的荧光强度：本实验选用了色谱纯或分光纯的试剂，其荧光强度在360 nm处无吸收，对检测结果不会造成影响。

所用分液漏斗为聚四氟乙烯活塞，不能使用涂抹了凡士林的磨口塞分液漏斗。

5结论

应用该法检测贝类中的石油烃含量，有的样品最终得到的上机液中会出现凝胶状物质，造成测定结果不准确；鱼虾检测的最终上机溶液澄清，回收率好。因此该法不完全适用于贝类等物质中石油烃的测定，但能很好地应用于鱼虾中石油烃的检测。

参考文献：

[1] 尚龙生，孙茜，徐恒振，等.紫外分光光度法测定贻贝体内石油烃的方法研究[J].海洋环境科学，1998，17（1）：62-65

[2] 贾小平，林钦，吕晓瑜，等.荧光分光光度法测定海洋贝类总石油烃的方法研究[J].湛江海洋大学学报，1999，119（4）： 30-35

[3] 尚龙生，许乙烈，马永安，等.荧光分光光度法测定海藻中的石油烃[J].分析化学研究简报，1997，25： 205-207

[4] GB17378.6-2007，海洋生物监测[s] 第6部分：生物体分析.北京：中国标准出版社，2008

[5] 张海燕，周德庆.荧光分光光度法测定水产品中石油烃的方法研究[J].海洋水产研究，2008，29（4）：106-111

[6] 杨广杏，万军明，麦志勤.鱼类石油烃污染剖析[J].环境与开发，1995，10（3）：25-26