乳腺癌组织中SPARC和Her—2的表达

孙孝媛+于国华+张居民

[摘要] 目的 探讨富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白（SPARC）和人表皮生长因子受体（Her-2）在乳腺癌组织中的表达及与临床病理参数的关系。 方法 应用免疫组织化学方法检测70例乳腺癌和20例乳腺纤维腺瘤中SPARC和Her-2的表达。 结果 SPARC在乳腺癌间质细胞的高表达率为68.6%（48/70）明显高于肿瘤细胞表达率为37.1%（26/70）（P<0.05）；间质细胞中乳腺癌的SPARC表达率为68.6%（48/70）明显高于乳腺纤维腺瘤的表达率为40.0%（8/20）（P<0.05）；在有淋巴结转移、TNM分期为Ⅲ期的乳腺癌中SPARC的表达率升高（P<0.05）。乳腺癌中SPARC的高表达率与腋窝淋巴结转移相关。Her-2在乳腺癌肿瘤细胞中的高表达率为45.7%（32/70）明显高于乳腺纤维腺瘤表达率的10.0%（2/20）（P<0.05）。Her-2在淋巴结转移组的表达率较无淋巴结转移组高（P<0.05）。 结论 乳腺癌中SPARC、Her-2的高表达与乳腺癌的发生、发展、转移和预后有关。

[关键词] SPARC；Her-2；乳腺肿瘤

[中图分类号] R737.9 [文献标识码] A [文章编号] 2095-0616（2014）12-18-04

乳腺癌是目前女性发病最高的恶性肿瘤，且发病率越来越高，对女性患者的健康和生活造成严重影响，在乳腺癌的病理类型中浸润性导管癌最常见，恶性程度高，预后差。SPARC和Her-2在乳腺癌的发生、发展、侵袭和转移中起重要作用。本研究应用免疫组化法检测SPARC和Her-2在乳腺癌组织中的表达情况，并进一步分析SPARC、Her-2与临床病理因素之间的关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2013年1月1日～11月20日潍坊市人民医院收治的经病理证实为乳腺癌浸润性导管癌的患者70例、乳腺纤维腺瘤患者20例，均为女性，年龄33～73岁，平均（53±20）岁，均为首诊初治的患者，平均病程（30±15）d，且乳腺癌组和乳腺纤维腺瘤组具有可比性。根据TNM分期标准：Ⅰ期患者共22例，Ⅱ期患者共27例和Ⅲ期患者共21例；有淋巴结转移患者共30例，无淋巴结转移患者共40例。每例标本均有免疫组化法检测的ER和PR的表达情况。

1.2 试剂、方法

兔抗人SPARC单克隆抗体（Ⅰ抗）购自北京博奥森生物技术有限公司（工作浓度1∶200）；抗Her-2单克隆抗体（Ⅰ抗）、二步法检测试剂盒（PV-6000） （Ⅱ抗）购自北京中杉金桥生物技术有限公司。通用型二步法免疫组化染色，将标本连续4μm切片，常规脱蜡入水，3% H2O2处理20min，高压热修复2min，顺序加入Ⅰ抗（4℃过夜）、Ⅱ抗（30min），DAB染色，苏木精复染，脱水，透明，封片。用已知阳性切片做为阳性对照，用PBS代替Ⅰ抗做为阴性对照。

1.3 结果判定

由两位病理科医师双盲阅片。SPARC在细胞中出现棕黄色颗粒为阳性，Her-2在细胞膜上呈棕黄色为阳性。根据着色程度和着色细胞占总细胞计数的百分率综合进行评分：无着色者为0分，着色淡者为1分，着色适中者为2分，着色深者为3分；着色细胞占计数细胞的百分率：≤5%记为0分，>5%～25%记为1分，≥25%～50%记为2分，>50%记为3分；将每张切片的着色程度与着色细胞的百分率的得分相乘，其乘积为最后得分。0～1分为阴性（-），2～3分为弱阳性（+），4～6分为阳性（++），>6分为强阳性（+++）。Her-2根据美国乳腺癌HER2检测指南[1]，HER2阳性为（+++）（>30%浸润癌细胞的细胞膜呈完整的强着色），不确定为（++）（至少10%肿瘤细胞有完整的细胞膜着色，但染色不均匀或强度较弱）。阴性为（-）或（+）（任何比例的肿瘤细胞有微弱的、不完整的细胞膜着色或无着色）。在统计分析中将表达（-）～（+）划为低表达组，（++）～（+++）划为高表达组。

1.4 统计学方法

应用SPASS21.0软件进行统计学分析，SPARC和Her-2的表达及其与临床病理因素的分析采用x2检验，相关性分析采用Spearman秩相关分析。检验水准ɑ=0.05，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 乳腺癌组织和乳腺纤维腺瘤组织中SPARC的差异性表达

SPARC在乳腺癌的肿瘤细胞、间质细胞的胞质和（或）胞核中均有不同程度表达，呈弥漫或散在的棕黄色颗粒状（见图1A）。在乳腺癌的间质细胞中SPARC的高表达率68.6%（48/70）明显高于肿瘤细胞的高表达率37.1%（26/70）（P<0.05）；在乳腺纤维腺瘤中SPARC在间质细胞的高表达率40.0%（8/20）高于肿瘤细胞的高表达率30.0%（6/20）（P>0.05）。在乳腺癌组织和乳腺纤维腺瘤中SPARC在肿瘤细胞的高表达率分别为37.1%（26/70）和30.0%（6/20）（P>0.05）；在乳腺癌组织和乳腺良性病变组织中SPARC在间质细胞的高表达率分别为68.6%（48/70）和40.0%（8/20）（P<0.05）。

实验表明，SPARC在乳腺癌间质细胞中呈高表达，而在肿瘤细胞中呈低表达，并且实验发现在乳腺癌浸润边缘的间质细胞中SPARC的表达率较肿瘤实质内间质细胞的表达率高，提示SPARC与肿瘤的浸润转移有关。

2.2 乳腺癌组织中SPARC的表达与临床病理参数的关系

2.3 乳腺癌组织中Her-2的表达

2.4 乳腺癌组织中Her-2的表达与临床病理参数的关系

3 讨论

SPARC具有明显的组织特异性。研究表明，SPARC在100%的原发及转移性黑色素瘤中高表达，在多数发育异常的痣中呈中等表达，在痣细胞中低表达，而在正常的黑色素细胞中不表达[1]。对人类结直肠癌的研究同样表明SPARC基因的过度表达与肿瘤的恶化相关[2]。研究发现，SPARC在食管癌[3]、乳腺癌[4]、口腔癌[5]、神经胶质细胞瘤[6]、肝癌[7]、胃癌[8]等恶性肿瘤中呈高表达。但在卵巢癌[9]、胰腺癌[10]和非小细胞肺癌[11]等恶性肿瘤中的表达水平降低，在这些肿瘤中表现出一定的抑瘤性。Chlenski等[12]用SPARC来治疗神经细胞瘤，结果发现治疗组的MVD明显低于对照组，由此表明SPARC在神经细胞瘤中具有抑制新生血管生成的作用，并且具有影响肿瘤生长的作用。有研究发现，SPARC还具有调节肿瘤细胞生长、增殖及凋亡的作用。Puolakkainen等[13]研究表明在敲除了SPARC基因的小鼠中发现卵巢癌细胞和胰腺癌细胞的增殖作用得到加强，并且其凋亡作用下降。Yiu等[14]研究表明，SPARC可以使卵巢癌的正常上皮细胞和肿瘤细胞的增殖作用得到抑制，并且还可以加快肿瘤细胞的凋亡速率。Massi等[15]通过将SPARC mRNA转染低表达SPARC的黑色素瘤细胞，结果发现低表达SPARC的黑色素瘤细胞的致瘤作用得到增强，这提示SPARC与黑色素瘤的发生可能有一定的相关性。本研究结果表明，SPARC在乳腺癌组织和乳腺纤维腺瘤组织中表达不同，SPARC在乳腺癌间质细胞的表达率68.6%（48/70）和乳腺纤维腺瘤间质细胞的表达率40.0%（8/20）进行比较（P<0.05）；SPARC在乳腺癌肿瘤细胞的表达率37.1%（26/70）和乳腺纤维腺瘤肿瘤细胞的表达率30.0%（6/20）进行比较（P<0.05）。表明SPARC在乳腺癌间质细胞中表达率高于乳腺纤维腺瘤，这与张雪梅等[16]研究结果一致。SPARC在乳腺癌中有淋巴结转移组的表达率高于无淋巴结转移组（P<0.05）；SPARC在TNM分期为Ⅲ期的表达率高于Ⅰ期和Ⅱ期（P>0.05）。本实验表明，SPARC在肿瘤细胞的表达与年龄、分期、ER、PR及C-erbB2表达无关，但与淋巴结转移相关。SPARC在乳腺癌间质细胞中高表达，这与Barth等[17]的研究结果相符。endprint

Her-2在正常组织中呈阴性表达，而在乳腺、卵巢、肺等肿瘤组织中呈过表达。van研究发现，在侵袭性乳腺癌的疾病早期发现Her-2过表达；有学者认为Her-2过表达与淋巴结转移无关[18]。有研究表明，Her-2的过表达阳性率与组织学分级相关[19]，其表达预示肿瘤恶性程度高，提示与乳腺癌的发展有关。在临床上有20%～30%的乳腺癌可以检测到Her-2基因扩增[20]。Her-2过表达者表现为易发生淋巴结转移、恶性程度高。因此，Her-2是乳腺癌患者预后差的指标。本实验中Her-2主要表达于乳腺癌的肿瘤细胞，Her-2在乳腺癌的表达率为45.7%（32/70），Her-2与患者年龄、ER、PR无关，与腋窝淋巴结转移、分期呈正相关。Strauss等研究提示，Her-2基因过表达的乳腺癌恶性程度高、预后差，并与患者的无病生存和总生存期有关[21]。总之，Her-2扩增的乳腺癌患者倾向于早期复发，且生存期短。

总之，SPARC、Her-2在乳腺癌组织中均呈高表达。SPARC和Her-2与肿瘤转移关系密切，两者之间的具体作用机理仍有待进一步研究。

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（收稿日期：2014-04-11）endprint

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