舒神灵胶囊质量标准研究

汝秋明，楚云杰

(1.吉林省食品药品检验所，吉林 长春 130033；2.长春中医药大学 附属医院，吉林 长春 130021)

△*

汝秋明，副主任药师，研究方向：药品质量标准；E-mail：rqiuming@sina.cn

舒神灵胶囊质量标准研究

汝秋明1*，楚云杰2

(1.吉林省食品药品检验所，吉林 长春 130033；2.长春中医药大学 附属医院，吉林 长春 130021)

目的建立舒神灵胶囊的质量标准。方法采用薄层色谱法对该制剂中的丹参、五味子、甘草、人参进行定性鉴别；采用HPLC测定该制剂中五味子的有效成分五味子醇甲的含量。结果薄层色谱可鉴别出丹参、五味子、甘草、人参的特征斑点，且阴性对照无干扰。HPLC法测定五味子醇甲在0.040 7～0.366 5 μg线性关系良好，平均加样回收率为100.38%，RSD=1.2%(n=6)。结论该方法简便可靠，专属性强，重现性好，可用于舒神灵胶囊的质量控制。

舒神灵胶囊；薄层色谱法；高效液相色谱法；五味子醇甲；质量标准

舒神灵胶囊由丹参、五味子等11味中药组成，质量标准收载于《卫生部药品标准·中药成方制剂》第十册，具有舒肝理气，解郁安神的功效，用于神经衰弱，神经官能症，更年期综合症。原标准中只有两个化学反应鉴别，专属性不强。笔者通过实验研究，增加了丹参、五味子、甘草、人参的薄层色谱鉴别。五味子具有收敛固涩，益气生津，补肾宁心的功效，与该制剂的功能主治有密切关系，因此建立了五味子中五味子醇甲的含量测定方法，以更好地控制该制剂质量。

1 仪器与试药

1.1 仪器

日本岛津LC-2010HT高效相色谱仪，CLASS-VP色谱工作站，ZF-I紫外光灯。预制硅胶G薄层板、预制硅胶GF254薄层板、预制高效硅胶G薄层板(薄层层析用，青岛海洋化工集团)。

1.2 试药

丹参、五味子、甘草、人参对照药材；丹参酮ⅡA，五味子甲素，人参皂苷Rg1、Re等对照品，均购自中国食品药品检定研究院。舒神灵胶囊(规格：0.3 g/粒，吉林省辉南天泰药业股份有限公司，批号：090201，090401，090402；吉林省辉南长龙药业股份有限公司，批号：090401，090402，090403)，五味子醇甲对照品(中国食品药品检定研究院，批号：110857-200406，规格：20 mg，供含量测定用)。乙腈为色谱纯，水为纯化水。其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 薄层色谱鉴别

2.1.1 丹参的鉴别 取本品内容物18 g，研细，加乙醚50 mL，超声处理10 min，滤过，药渣备用，滤液挥干，残渣加乙酸乙酯2 mL使溶解，作为供试品溶液。另取丹参对照药材0.5 g，加乙醚30 mL，超声处理10 min，滤过，滤液挥干，残渣加乙酸乙酯1 mL使溶解，作为丹参对照药材溶液。再取丹参酮ⅡA对照品，加乙酸乙酯制成每1 mL含2 mg的溶液，作为对照品溶液。按处方比例及生产工艺制备缺丹参阴性样品，并按供试品溶液制备方法制备阴性对照溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2010年版一部附录Ⅵ B)试验，吸取上述4种溶液各5 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯(19∶1)[1]为展开剂，展开，取出，晾干，在日光下检视。供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性对照无干扰，结果见图1。

1.阴性对照品 2～4.供试品 5.丹参酮ⅡA对照品 6.丹参对照药材图1 丹参薄层色谱图

2.1.2 五味子的鉴别 取2.1.1丹参鉴别项下的药渣，挥干溶剂，加三氯甲烷70 mL，加热回流30 min，滤过，药渣备用，滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯2 mL使溶解，作为供试品溶液。另取五味子对照药材1 g，加三氯甲烷30 mL，加热回流30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯1 mL使溶解，作为对照药材溶液。再取五味子甲素对照品，加乙酸乙酯制成每1 mL含五味子甲素1 mg的溶液，作为对照品溶液。按处方比例及生产工艺制备缺五味子阴性样品，并按供试品溶液制备方法制备阴性对照溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2010年版一部附录Ⅵ B)试验，吸取上述4种溶液各2 μL，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以石油醚(30～60 ℃)-甲酸乙酯-甲酸(15∶5∶1)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(254 nm)下检视[2-4]。供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性对照无干扰，结果见图2。

1.阴性对照品 2～4.供试品 5.五味子甲素对照品 6.五味子对照药材图2 五味子薄层色谱图

2.1.3 甘草的鉴别 取2.1.2五味子鉴别项下的药渣，挥干溶剂，加甲醇70 mL，超声处理30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加水30 mL微热使溶解，移至分液漏斗中，用乙酸乙酯50 mL提取，分取乙酸乙酯层，水层溶液备用，乙酸乙酯液蒸干，残渣加乙醇1 mL使溶解，作为供试品溶液。另取甘草对照药材0.5 g，加甲醇30 mL，超声处理30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加水20 mL使溶解，移至分液漏斗中，用乙酸乙酯30 mL提取，分取乙酸乙酯层，蒸干，残渣加乙醇1 mL使溶解，作为对照药材溶液。按处方比例及生产工艺制备缺甘草阴性样品，并按供试品溶液制备方法制备阴性对照溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2010年版一部附录Ⅵ B)试验，吸取上述3种溶液各2 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲醇(7∶3∶1)为展开剂[5-7]，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105 ℃加热至斑点显色清晰，分别置日光及紫外光灯(365 nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，日光下显相同颜色的斑点，紫外光下显相同颜色的荧光斑点，阴性对照无干扰，结果见图3、4。

1.阴性对照品 2～4.供试品 5.甘草对照药材图3 甘草(日光)薄层色谱图

1.阴性对照品 2～4.供试品 5.甘草对照药材图4 甘草(紫外光)薄层色谱图

2.1.4 人参的鉴别 取2.1.3甘草鉴别项下的水层液，用水饱和正丁醇提取2次，每次50 mL，合并正丁醇液，用氨试液提取2次，每次30 mL，分取正丁醇层，蒸干，残渣用乙醇5 mL使溶解，置中性氧化铝柱(200～300目，5 g，内径1～1.5 cm)用40%乙醇50 mL洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣用乙醇1 mL使溶解，作为供试品溶液。另取人参对照药材1 g，加水0.5 mL润湿，加水饱和正丁醇15 mL，超声处理30 min，滤过，滤液用3倍量氨试液提取，分取正丁醇液，残渣加乙醇1 mL使溶解，作为对照药材溶液。再取人参皂苷Rg1、Re对照品，加乙醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作为对照品溶液。按处方比例及生产工艺制备缺人参阴性样品，并按供试品溶液制备方法制备阴性对照溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2010年版一部附录Ⅵ B)试验，吸取对照品与对照药材溶液各5 μL、供试品溶液10 μL、阴性对照溶液10 μL，分别点于同一高效硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水(13∶7∶2)10 ℃以下放置下层溶液为展开剂[8-10]，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105 ℃加热至斑点显色清晰，在日光下检视。供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性对照无干扰，结果见图5。

1.人参对照药材 2.人参皂苷Rg1、Re对照品 3～5.供试品 6.阴性对照图5 人参薄层色谱图

2.2 五味子醇甲的含量测定

2.2.1 色谱条件与系统适用性试验 采用Diamonsil-C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)色谱柱；以乙腈-水(40∶60)为流动相[2-4，11]；流速：0.8 mL·min-1；柱温：30 ℃；检测波长：250 nm；进样量：10 μL；理论板数为8 562。

2.2.2 对照品溶液的制备 取五味子醇甲对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 mL中含五味子醇甲25 μg的溶液，即得。HPLC图见图6。

2.2.3 供试品溶液的制备 取本品装量差异项下内容物，研细，取约1.0 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇20 mL，称定重量，超声处理(功率250 W，频率33 kHz)30 min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。HPLC图见图6。

2.2.4 阴性对照溶液的制备 按处方比例及生产工艺制备缺五味子阴性样品，并按2.2.3供试品溶液制备方法制备阴性对照溶液。HPLC图见图6。

A.五味子醇甲对照品 B.供试品 C.阴性对照品图6 舒神灵胶囊及对照品HPLC图

2.2.5 线性关系考察 精密称取五味子醇甲对照品9.95 mg，置50 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取3 mL，置25 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，分别精密吸取1，2，5，10，15，20，25 μL测定，以对照品进样量为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程Y=2 638 714X+181 1，r=0.999 9，结果表明五味子醇甲进样量在0.040 7～0.366 5 μg呈良好的线性关系。

2.2.6 精密度试验 精密吸取对照品溶液10 μL，注入液相色谱仪，重复6次，记录其色谱峰面积值，计算RSD=0.1%，表明仪器精密度良好。

2.2.7 稳定性试验 取供试品溶液(吉林省辉南长龙药业股份有限公司，批号：090401)，分别于0，7，14，21，28 h按上述色谱条件测定，计算RSD=0.8%。结果表明28 h内供试品溶液中五味子醇甲的含量基本稳定。

2.2.8 重复性试验 取供试品(吉林省辉南长龙药业股份有限公司，批号：090401)，按供试品溶液处理方法制备6份供试品溶液，进行测定，其平均含量为0.140 mg/粒，RSD=1.3%。表明重复性良好。

2.2.9 回收率试验 精密称取已知含量的供试品(吉林省辉南长龙药业股份有限公司，批号：090401)0.5 g，精密加入五味子醇甲对照品溶液(0.039 8 mg·mL-1)5 mL，再精密加入甲醇15 mL，称定重量，超声处理(功率250 W，频率33 kHz)30 min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，滤过，取续滤液即得。共处理6份，按上述色谱条件测定，计算回收率，结果见表1。

表1 舒神灵胶囊中五味子醇甲回收率试验

注：五味子醇甲对照品加入量均为0.199 0 mg

2.2.10 样品测定结果 按上述方法测定6批样品中的五味子醇甲含量，样品的平均含量在0.14～0.16 mg/粒，结果见表2。建议质量标准中规定五味子醇甲含量不低于0.14 mg/粒。

表2 舒神灵胶囊中中五味子醇甲含量测定 mg/粒

3 讨论

由于五味子鉴别和人参鉴别中阴性对照均有一定的干扰，故对照品溶液中未采用五味子乙素和人参皂苷Rb1对照品，且人参鉴别须用高效薄层板才可达到较好的分离效果。

取五味子醇甲对照品溶液，经UV-2201紫外-可见分光光度计在220～300 nm的波长范围内进行扫描，确定五味子醇甲在254 nm波长处有最大吸收，参考《中国药典》2010年版一部五味子药材项下规定[2]，选择250 nm为本实验的测定波长。

参照《中国药典》2010年版一部五味子药材项下规定[2]的甲醇-水(65∶35)流动相，但本品用此流动相分离效果不好，后参考文献[3-4，11]改为乙腈-水(60∶40)能很好分离，且不同品牌色谱柱耐用性良好。

供试品溶液分别超声20，30，40 min；提取溶剂量分别为15，20，30 mL，计算五味子醇甲含量均为0.14 mg/粒。说明按上述方法配制供试品溶液完全能使样品提取完全。

实验建立的薄层色谱鉴别方法及五味子醇甲的含量测定方法，可以更好地控制舒神灵胶囊质量，研究为舒神灵胶囊质量标准的完善提供了参考依据。

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QualityStandardforShushenlingCapsules

RUQiuming1*，CHUYunjie2

(1.JinlinProvicialInstituteforFoodandDrugControl，Changchun130033，China；2.AffiliatedHospitalofChangChunUniversityofTraditionalChineseMedicine，Changchun130021，China)

Objective：To establish quality standard for Shushenling Capsules.MethodsSalviae miltiorrhizae Radix et Rhizoma，Schisandrae chinensis Fructus，Glycyrrhizae Radix et Rhizoma，Ginseng Radix et Rhizoma were identified by TLC，and the content of schisandrin in Schisandrae chinensis Fructus was determined by HPLC.ResultsTLC could identify Salviae miltiorrhizae Radix et Rhizoma，Schisandrae chinensis Fructus，Glycyrrhizae Radix et Rhizoma，and Ginseng Radix et Rhizoma.schisandrin showed a good linear relationship at a range of 0.040 7～0.366 5 μg.The average recovery was 100.38%(n=6)，and RSD was 1.2%.ConclusionThe method is simple，accurate，high specificity，and with good repeatability.The method can be used for Shushenling Capsules quality control.

Shushenling Capsules；TLC；HPLC；Identification；Quality standard

10.13313/j.issn.1673-4890.2014.02.013

2013-05-22)