奥林巴斯AU5400检测血清抗链球菌溶血素O的测量范围评价

2014-12-16 01:25张淑琼云南省昆明市第三人民医院检验科65004云南省第一人民医院检验科昆明65003
检验医学与临床 2014年7期
关键词:测量范围奥林巴斯试剂

张淑琼,王 凡(.云南省昆明市第三人民医院检验科 65004;.云南省第一人民医院检验科,昆明 65003)

抗链球菌溶血素O(ASO)是化脓性链球菌细胞外产物的特异性抗体。ASO主要用于链球菌感染引起的扁桃体炎、急性肾小球肾炎、活动性风湿热、风湿性心肌炎、皮肤及软组织等的感染诊断和监控[1]。评价分析测量范围有助于发现方法学原理、仪器、校准品、试剂、操作程序、质量控制计划等很多方面的误差来源,是一个很重要的仪器性能指标[2]。作者参照美国临床和实验室标准化协会(CLSI)的EP6-A文件指南,用奥林巴斯AU5400全自动生化分析仪对血清ASO检测系统的测量范围进行评价。

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂奥林巴斯AU5400全自动生化分析仪;试剂:德赛诊断系统(上海)试剂盒,批号为17648校准品批号为16693;质控品为美国BIO-RAD,批号为54551、54553。

1.2 样本根据EP6-A指南推荐选择高值和低值样本各一份。

1.3 方法收集高值(H)和低值(L)的患者样本血清,要求高值样本超过厂家提供的线性范围。按1L+0H、0.8L+0.2H、0.6L+0.4H、0.4L+0.6H、0.2L+0.8H、0L+1H配制方法,制成6个不同浓度的系列评价标本,在奥林巴斯AU5400全自动生化分析仪上测定ASO,每个样本按随机方式重复测定3次,在1d内完成。将ASO浓度为841IU/mL的血清分别作2~160倍稀释,检测结果与稀释后的预期值比较,计算回收率,确定最大稀释度。

2 结 果

2.1 ASO测量值与预期值结果将配制好的不同浓度系列样本进行检测,结果见表1。

表1 ASO测量值与预期值结果(IU/mL)

将预期值为X,测量均值为Y,作散点图,目测呈一条直线关系,在Microsoft Excel 2000作直线回归,预期值与测量均值的散点图见图1。

图1 ASO预期值与测量均值散点图

从上述直线回归结果得知,r2=0.998 7,说明组成回归线的所有数据点紧密贴近回归线,预期值与测量值之间相关性极好;斜率b1=0.984,在0.97~1.03,从经验上判断,斜率与1之间无差异;截距b0=7.45,与分析测量范围的上限1 200IU/mL相比值很小,作截距与0差异的t检验,差异有统计学意义(P<0.05),说明截距是由统计引入的,实际的标准曲线能通过原点。从上述结果说明,该方法在实验所涉及的浓度范围7~1 094IU/mL呈线性。

表2 ASO稀释回收率测定结果(IU/mL)

2.2 ASO临床可报告范围验证将ASO浓度为841IU/mL的样本分别进行2、10、20、40、80、160倍稀释,每个稀释样本重复测定2次,计算稀释回收率。按仪器说明书要求,回收率在90.0%~110.0%结果时为可接受。稀释回收率=(测定值/预期值)×100%。见表2。从表2结果可看出,随着标本稀释倍数的增加,回收率逐渐增高,当稀释倍数大于或等于1∶80时,标本回收率大于110.0%,超过可接受范围。因此,当患者样本超过线性范围时,必须稀释重做,但最大稀释度不宜超过40倍,标本稀释后的测定值必须大于21IU/mL,否则结果不可靠。即AMR(分析测量范围)上限乘以最大稀释度即为CRR(临床可报告范围)上限(1 094.1IU/mL×40=43 764IU/mL),结合试剂说明书灵敏度为7IU/mL,故本检测系统测定ASO的临床可报告范围为7~43 764IU/mL。

3 讨 论

分析测量范围即定量检测项目的线性检测范围,是反映分析方法性能的重要指标,也是保证临床检测结果准确性的重要砝码。分析测量范围的建立有助于获得准确可靠的检测结果,在日常检测过程中,标本真实浓度只有在分析测量范围内才能保证其检测结果的可靠性,否则可能会造成检测结果的假性偏高或偏低[3]。对于CRR大于AMR的检验项目,需进行最大稀释度验证实验,并结合临床决定水平和功能灵敏度来共同确定该项目的CRR。

分析用于验证的材料必须具有该方法的基质效应[4]。本研究首先通过一系列浓度的血清验证ASO测量的线性范围,避免基质效应的影响,然后通过倍比稀释实验确定ASO的临床可报告范围。从表1结果可看出,ASO的测量均值与预期值成很好的线性关系:Y=0.984 2 X+7.458 1,r2=0.998 7,验证后说明奥林巴斯AU5400全自动生化分析仪测定ASO在7~1 094IU/mL线性良好,超出了试剂说明书规定的(7~800 IU/mL)范围。在实际工作中,仍应按照试剂说明书规定的线性为准,对于超出试剂说明书规定的线性范围的患者样本,作者建议稀释后重测。表2结果显示,对于倍比稀释血清,随着稀释倍数的增加,回收率逐渐增高,当稀释至1∶80倍时,回收率为122.9%,已经高于110.0%,结果不可靠。这可能是基质效应的影响,当稀释倍数不断增加,反应环境已发生较大变化。当患者标本ASO测定值超过最大线性范围时,必须稀释重做,但最大稀释度不宜超过40倍,即奥林巴斯AU5400全自动生化分析仪检测ASO的临床可报告范围为7~43 764IU/mL。

综上所述,对于超过线性范围的患者样本,稀释程序非常关键,为确保检测结果的准确性,建议临床实验室在编写标准化操作规程时,有必要规范样本稀释操作程序,为实验室提供进一步的质量保证,更好地为临床提供更准确的检测结果。

[1]陈文彬,潘祥林,康熙熊,等.诊断学[M].6版.北京:人民卫生出版社,2004:482.

[2]杨有业,张秀明.临床检验方法学评价[M].北京:人民卫生出版社,2008:168-195.

[3]潘锡龙.血清肌酸激酶活性检测的分析测量范围建立与评价[J].检验医学与临床,2013,10(2):167-168.

[4]潘超,王文龙,张国伟.定量检测中分析测量范围的验证[J].检验医学,2010,25(4):303.

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