抗敏止痒液的质量研究

周 顺，刘丰贤

(1. 湘西苗族土家族自治州民族中医院，湖南 吉首 416000;2.湖南师范大学医学院，湖南 长沙 410013)

抗敏止痒液由千里光、苦参、大黄、金银花等9味中药经水提、过滤、浓缩而成，功能:清热祛风，抗敏止痒;主治:痱子、丘疹、寻麻疹、夏季性皮炎、过敏性皮炎、风热性湿疹等。本文通TLC 法和HPLC 法对方中主要药材和主要有效成分进行了实验研究，拟制定简便有效的方法对本制剂进行质量控制。

1 主要仪器与试药

岛津LC-210ATvp 型高效液相色谱仪，SPD-210Avp 可见紫外检测器，浙大N3000 双通道色谱工作站;对照品绿原酸、对照药材金银花、千里光、苦参、大黄等均购自中国药品生物制品检定所;乙腈为色谱纯，水为重蒸水。其他试剂均为分析纯，抗敏止痒液由湘西苗族土家族自治州民族中医院提供。

2 实验及结果

2.1 薄层鉴别试验

2.1.1 千里光［1］

取样品20mL，水浴蒸干后，残渣加无水乙醇50mL 水浴回流1 h，滤过，滤液水浴蒸干，残渣加无水乙醇1mL 使溶解，作为供试品溶液;取缺千里光的阴性样品，同供试品溶液的制备方法，制备成阴性对照溶液;取千里光对照药材1.0g，加水100mL 煎煮1 h，滤过，滤液水浴蒸干，加无水乙醇50mL 水浴回流1 h，滤过，滤液水浴蒸干，残渣加无水乙醇1mL使溶解，作为对照药材溶液。

取上述溶液各10μL 分别点于以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G 板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(5:4:0.5)为展开剂上行展开。紫外灯(365nm)下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点;阴性对照无干扰，薄层试验结果见图1A。

2.1.2 苦参［2］

取样品10mL，加浓氨溶液调节pH 值至为12，加乙酸乙酯振摇提取2 次，每次30mL，合并乙酸乙酯溶液，水浴蒸干，残渣加甲醇1mL 使溶解，作为供试品溶液;取缺苦参的阴性样品，同法制成阴性对照溶液;取苦参对照药材0.5g，加浓氨溶液浸泡1 h后，再加乙酸乙酯20mL，超声处理45min，滤过，滤液水浴蒸干，残渣加甲醇1mL 使溶解，作为对照药材溶液。

取上述溶液各10μL 分别点于以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G 板上，以甲苯-丙酮-乙酸乙酯-浓氨试液(15:5:20:1)为展开剂，上行展开，喷以改良碘化铋钾试液显色，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性对照无干扰，薄层试验结果见图1B。

2.1.3 大黄［3］

取样品15mL，加HCl1.5mL，水浴加热30min，冷却至室温，加二氯甲烷振摇提取2 次，每次20mL，合并二氯甲烷溶液，水浴挥干，残渣加甲醇1mL 使溶解，作为供试品溶液;取缺大黄的阴性样品15mL，同法制成阴性对照溶液;取大黄对照药材0.5g，加热水20mL，超声处理1 h，过滤，滤液加HCl1.5mL，水浴加热30min，冷却至室温，加二氯甲烷振摇提取2 次，每次20mL，合并二氯甲烷，水浴挥干，残渣加甲醇1mL 使溶解，作为对照药材溶液。

取上述溶液各10μL 分别点于以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G 板上，以石油醚(60℃ ～90℃)-甲酸乙酯-甲酸(15:5:1)的上层液为展开剂，上行展开，日光下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点;阴性对照无干扰，薄层试验结果见图1C。

2.2 绿原酸含量测定［4］

2.2.1 色谱条件

Kromasil C18(250mm×4·6mm，5μm)色谱柱，乙腈-0·4% 磷酸(10:90)为流动相，检测波长为327nm，流速1mL/min，柱温室温。

2.2.2 标准溶液配制

取绿原酸标准品0.1g，精密称定，置10mL 量瓶，用甲醇稀释至刻度，轻轻振摇，使溶解，得标准品母液备用。

2.2.3 供试品溶液配制

精密量取抗敏止痒液10mL，水浴蒸干，残渣加甲醇30mL 使溶解，过滤，用适量甲醇洗涤残渣，滤液定量转移至100 mL 容量瓶中，加甲醇至刻度，作为供试品溶液。

2.2.4 专属性试验

按处方制备不含金银花的阴性样品，按照供试品溶液的制备方法制成阴性溶液。取阴性样品、对照品溶液和供试品溶液进样测定，色谱图见图2。可见在此色谱条件下，阴性样品对测定无干扰。

图1 薄层色谱图(1. 阴性对照，2.3.4. 样本，5.参考值)

图2 薄层色谱图

2.2.5 标准曲线的绘制

分别取2. 2 项下的标准母液溶液0. 1mL、0.2mL、0.3mL、0.4mL、0.5mL、0.6mL 稀释至1mL。得到浓度分别为0. 1003mg/mL、0. 2006 mg/mL、0.3009 mg/mL、0. 4012 mg/mL、0. 5015 mg/mL、0.6018mg/mL。分别注入高液色谱仪，进样量20μL。以质量浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制表尊曲线，得回归方程。y =1579461.7x +3123.2，r=0.9997，线性范围:2μg ～12μg。

2.2.6 精密度试验

精密吸取标准品溶液(0.5015 mg/mL)20μL，连续进样6 次。绿原酸的峰面积RSD 为0.55%(n=6)。

2.2.7 稳定性试验

精密吸取供试品(20130601)溶液20μL，分别在0、2、4、6、8、10h 进样1 次，绿原酸的峰面积RSD为0.95%(n =5)，表明供试品溶液在10h 内，绿原酸含量稳定

2.2.8 加样回收率

精密量取6 份同一批样品(20130601)，每份5mL(含量0.4811mg/mL)，水浴蒸干，残渣分别加标准品溶液(0. 01003mg/mL、0. 03009 mg/mL、0.06018 mg/mL)25mL 定容，制备成供试品溶液，分别进样20μL，计算得平均回收率为99.56%，RSD为0.16%，结果见表1。

2.2.9 样品测定

取五批样品，制成供试品溶液，分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液和阴性样品溶液20μL，进样测定，按回归方程计算绿原酸的含量，结果见表2。

表1 绿原酸的回收率

表2 绿原酸含量的测定

3 讨论

TLC 实验研究表明处方中千里光、苦参、大黄的薄层色谱鉴别简便可行，结果可靠;HPLC 测定方中绿原酸含量方法简捷，结果稳定可靠。二者可作为该处方的质量标准。

［1］Chinese Materia Medica 中华本草［M］. Shanghai:Shanghai Provincial Science and Technology Press，1999，1390.

［2］李毅，王飞，吴民.苦参药材质量标准研究［J］. 中成药，2011，32(2):363-364.

［3］顾明娟，蔡定国. 大黄蒽醌甙元的TLC 展开剂改进［J］.中成药，199，2(8):31.

［4］Zhang Jian-hai，Feng Bin-bin. RP-HPLC Determination on the Content of Chlorogenic Acid in FLOS LONICERAE JAPONICAE and FLOS LONICERAE from Different Producing Areas［J］. Medicinal Plant ，2012，3(1):52-53，57.