母牛妊娠早期诊断技术简介

桑雷 孙世坤 陈冬金 陈岩峰 谢喜平 （福建省农业科学院畜牧兽医研究所 350013）

母牛妊娠早期诊断技术简介

桑雷 孙世坤 陈冬金 陈岩峰 谢喜平 （福建省农业科学院畜牧兽医研究所 350013）

妊娠早期诊断技术能缩短母牛空怀时间，是提高繁殖效率的手段，关系到养殖场 （户）的切身利益。本文从诊断时间、诊断技术难度、诊断真确率、成本等方面比较分析直肠检测、B超妊娠诊断、早孕因子、孕酮和妊娠相关蛋白免疫学诊断技术。

母牛；妊娠诊断；早期诊断；综述

母牛的繁殖效率影响到奶业生产，决定了一个奶牛场是否盈利。母牛繁殖率是由产犊间隔时间决定的，其影响因素包括繁殖疾病造成的屡配不妊和空怀时间太长，目前常规方法对奶牛进行诊断一般要等到配种后的2～3月，而新技术的出现能有效的缩短时间[1]，提高生产效益，本文就目前的一些妊娠早期诊断技术进行介绍。

1 直肠检查法

该种方法一般是在配种后两月进行，技术员徒手或戴手套将手通过母牛肛门伸进直肠内，隔着直肠触摸子宫角、子宫中动脉和卵巢，依据手的触觉判断母牛是否怀胎及怀胎时间，该种技术优点不需要任何设备，快捷简便，准确率高，目前广大养殖户和养殖小区大部分采用该种技术，然而直肠检查也存在缺点：①操作技术不易掌握，配种员实际操作经验影响摸胎的准确率；②母牛的怀胎时间长短影响判断空怀与否的准确率；③操作不当易引起母牛间的交叉感染及母牛流产[2]。

2 B超妊娠法

应用B超扫描可对母牛早期胚胎进行观察，并根据其不同时期的图像特征做出准确妊娠诊断。B超的原理：通过向母牛机体发射2万赫兹以上的超声波，由于母牛各组织有声学的特异差异，超声波在两种不同组织界面处发生反射、折射、散射、绕射、衰减以及声源与接收器相对运动产生多普勒频移等物理特性，应用不同类型的B超仪接受这些反射、散射信号，显示各种组织形态。

利用B超监测胚胎及胎儿发育情况：配种后12～14d子宫出现不连续无反射小区，判断子宫中出现胎水，为聚有液体的胚泡，不断扩张；至20d，胚胎在子宫中启动发育，胚泡中出现短直线状配体；并于22d能监测到胎心搏动等生命迹象；22～30d，B超检测到子宫区域内胎测出现明显的囊胚和胚斑，此作为怀孕与否的诊断标准[3,4]。贾国慧等对126头奶牛配种后20～60d进行B超妊娠检查发现，20～25d妊娠诊断准确率较低，26～28d准确率相对较高，29～31d妊娠准确率能达到100%，同时还发现青年牛20～28dB超妊娠诊断准确率好于经产牛[5]。B超诊断的优点在于能在活体实时影像观察早孕的子宫及其中的发育胚胎，感觉直观；对母牛机体无损伤性不会引起母牛间的交叉感染；判定母牛怀胎时间上早，能减少母牛的空怀时间，降低养殖成本。然而该种对操作人员的直肠检查水平要求很高，母牛产科疾病对超声妊娠诊断的阳性符合率有一定的影响，如胚胎死亡、胚胎吸收和流产、子宫肌瘤和积水等疾病[6]。

3 早孕因子检测法

早孕因子检测法 （Early pregnancy factor，EPF）是一种具有免疫抑制和生长因子特性的胚胎生长及存活所必需的分泌性蛋白，在胚胎着床前后数小时至数天内可检测到，是哺乳动物受精后最早在血清中检测到的妊娠相关蛋白，是目前最早确认妊娠的生化标志之一[7]。玫瑰花环抑制试验检测法（Rosette inhibition titre，RIT）是检测EPT的经典方法，但是存在实验操作复杂、重复性差、判断客观性差等问题，因此该方法难以推广。由于对早孕因子的化学本质及免疫学效果研究未有突破性进展，一直未形成的快速、高效检测早孕手段。

4 孕酮检测法

孕酮 （Progesterone，P4）主要由黄体及胎盘产生。母牛性周期中孕酮水平呈规律性变化，发情期孕酮水平较低，黄体期孕酮水平较高，妊娠期孕酮水平一直维持在较高。1971年，Laing等采用放射性免疫技术 （Radioimmunoassay，RIA）检测发现发情期乳汁中孕酮浓度变化与直肠检查卵巢的评估结果基本一致 （Milk Progesterone，MP4）[8]。 史远刚等在母牛配后18～24d通过RIA技术检测母牛乳汁中的孕酮浓度判断配种效果，怀孕确诊率达到90%以上，未孕确诊率为100%[9]。鉴于孕酮-放免检测法需要实验设备昂贵，且具有放射性污染，在生产推广具有一定的难度，孕酮-酶免法（EIA）则被应用于配种效果检测能通过颜色反应判定孕酮浓度。杨国林等报道运用目视ELISA孕酮检测法检测乳样只需30～45min判断配种效果，19～23d早期妊娠诊断正确率为81.25%[10]。万积成等报道采用胶体金技术研制了孕酮早孕诊断试纸，能在5min内完成妊娠检测，此种方法操作要求低，反应迅速、易保存，成本低，但是这种方法无法准确确定母牛是否妊娠，适用于妊娠初筛[11]。

5 妊娠相关糖蛋白测定

妊娠相关糖蛋白 （Pregnancy associated glycoproteins，PAG）又称妊娠特异蛋白 B（Pregnancy specific protein B，PSPB），是妊娠母牛胎盘滋养层双核细胞表达。研究表明，母牛妊娠后，外周血液中PAG浓度开始缓慢上升，妊娠22d达到2ng/mL以上，与空怀母牛体内的PAG浓度差异显著[12]。基于母牛妊娠期PAG的特点，目前检测PAG主要采用放免法 （RIA）、酶免法 （ELISA）方法。放免法 （RIA）由于存在核污染等问题，在生产上不适合推广应用，目前只是作为实验室的检测手段。而基于此原理检测母牛配种28d后PAG浓度的ELISA已被商业化开发，准确率达到93%以上[13]。王建勇等2013年1～3月份对上海地区9个牧场3400个血样进行检测发现奶牛配后28～33d空怀检出准确率达到98%，对怀孕牛检出准确率达到94%[14]。

6 小结

妊娠早期诊断对母牛繁殖管理有着极其重要的意义，快速、准确、简便、低价是理想妊娠早期诊断方法必须具备的条件。目前大多数妊娠早期诊断方法只能具备其中一种或几种条件，需要进一步的科研创新以研制出更优化的诊断技术满足生产。

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[5]贾国慧,王杏龙,王亮,等.奶牛B超妊娠诊断应用研究[J].上海畜牧兽医通讯,2009(1):8-9.

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[10]杨国林,熊三友,牛建荣,等.目视ELISA测定孕酮的研究及其应用[J].中国兽医科技,1998,28（8）:28-29.

[11]万积成,万志静,唐晓宾,等.奶牛早孕诊断试纸条的研制及临床试验[J].中国奶牛,2007(12):22-25.

[12]Piechatta M,Bollwein J,Friedrich M,et al.Comparison of commercial ELISA blood tests for early pregnancy detection in dairy cows[J].J Reprod Dev,2010（1）:72-75.

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[14]王建勇,庄海,李荣杰,等.血液早孕检测法在规模牛场应用效果分析[J].中国奶牛,2013(13):23-25.

桑雷 （1981-），男，汉族，博士，助理研究员，从事草食动物遗传育种与繁殖工作。