紫杉醇注射液含量测定方法建立

刘利檬

哈药集团生物工程有限公司

紫杉醇注射液含量测定方法建立

刘利檬

哈药集团生物工程有限公司

目的采用高效液相色谱法测定紫杉醇注射液含量。方法采用高效液相色谱法，色谱柱为Ultimate柱（250mm★4.6mm, 5um），以乙腈：水（44：56）为流动相，柱温45℃，流速为1.0ml/min，检测波长为230nm。结果辅料对含量测定无干扰，耐用性试验表明色谱条件微小变化不影响含量测定，溶液溶度在0.1mg/ml～1mg/ml范围内线性关系良好，准确度试验的平均回收率为99.7%，RSD为1.1%，重复性及中间精密度符合规定，溶液在8小时内稳定。结论方法学试验各项指标符合规定，可用于本品含量测定。

紫杉醇；方法学；含量测定

紫杉醇是红豆杉属植物中的一种复杂的次生代谢产物,也是目前所了解的惟一一种可以促进微管聚合和稳定已聚合微管的药物。同位素示踪表明,紫杉醇只结合到聚合的微管上,不与未聚合的微管蛋白二聚体反应。细胞接触紫杉醇后会在细胞内积累大量的微管，这些微管的积累干扰了细胞的各种功能,特别是使细胞分裂停止于有丝分裂期，阻断了细胞的正常分裂[1]。我们采用高效液相色谱法测定紫杉醇注射液含量，建立本品含量测定方法[2]。

1.仪器与试药

日本岛津高效液相色谱仪LC-20A（DAD检测器），色谱柱Ultimate AQ-C18 5μm 4.6×250mm

紫杉醇对照品（含量：99.4%），紫杉醇注射液由哈药集团生物工程公司提供，乙腈为色谱纯，其它试剂均为分析纯。

2.方法与结果

色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈：水（35：65）为流动相，检测波长为230nm。理论塔板数不低于5000。对照品重复进样5次，RSD不得过1.5%。

测定法取本品，精密称定，用流动相稀释制成每1ml含0.4mg的溶液，精密量取20μl注入液相色谱仪，记录色谱图，另精密称取紫杉醇对照品，同法测定。按外标法以峰面积计算，即得。

2.1 专属性试验

紫杉醇、空白辅料、起始物料及中间体，加流动相溶解，按照拟定方法进样，结果紫杉醇与其它物质可有效分离，紫杉醇峰纯度符合规定，辅料、中间体及起始物料不干扰含量测定。

2.2 系统适用性试验

取紫杉醇对照品，加流动相使溶解，制成0.4mg/ml的溶液，取对照品溶液，按照拟定含量测定方法进样，结果重复进样的RSD为0.6%，偏差符合规定。

2.3 耐用性试验

改变流动相比例（乙腈变化±5%）、柱温（30℃、35℃、45℃）、色谱柱（相同品牌不同批号的3根色谱柱）及流速（0.8ml/min、1.0ml/ min、1.2ml/min），评价各项指标改变对含量测定结果的影响，同时评价各色谱条件下系统适用性，结果表明各项指标变化对含量测定结果无明显影响，耐用性试验符合规定。在各种色谱条件下对称因子在0.9至1.1之间，塔板数均大于10000。在各种条件下系统适用性偏差均小于1.0%。

2.4 线性范围试验

精密称取紫杉醇对照品50mg，加流动相溶解制成2mg/ml的溶液，摇匀，作为对照品储备液。分别精密量取对照品储备液0.5ml、1.0ml、2.0ml、3.0ml、4.0ml，置10ml容量瓶中，分别加流动相稀释至刻度，摇匀。制成系列溶度溶液，分别精密量取20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，以紫杉醇的浓度为横坐标，对应的峰面积为纵坐标，计算线性回归方程，结果紫杉醇浓度在0.1mg/ml～0.8mg/ml的浓度范围内线性关系良好。

2.5 准确度试验

取紫杉醇对照品，精密称定，加流动相溶解制成1mg/ml的溶液，作为对照品储备溶液。领取紫杉醇注射液加流动相稀释制成0.4mg/ml的溶液，作为供试品溶液，取供试品溶液及对照品溶液按照测定法测定供试品溶液浓度。领取供试品溶液及对照品储备溶液，制成系列浓度溶液，即供试品溶液得80%、100%、120%组。精密量取对照品溶液及各供试品溶液20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算紫杉醇的含量，计算加样回收率。结果平均回收率为100.6%，RSD为1.4%，符合规定。

2.6 重复性及中间精密度试验

取供试品溶液，制备0.4mg/ml的溶液6份，作为重复性试验样品溶液。按照含量测定方法进行测定，结果平均含量为99.8%，RSD为0.1%，重复性符合规定。领取取供试品溶液，变动因素为实验者、实验时间，考察含量测定结果变化情况，结果6次测定平均含量为99.5%，RSD为0.4%，中间精密度符合规定。

2.7 溶液稳定性试验

精密量取供试品溶液，加流动相制成0.4mg/ml的溶液，作为供试品溶液；领取紫杉醇对照品，加流动相制成0.4mg/ml的溶液，作为对照品溶液。室温条件下放置放置8小时，分别于0小时、1小时、2小时、4小时、6小时及8小时进样。按照含量测定方法测定，考察各时间点主峰峰面积变化，结果8小时内供试品及对照品溶液峰面积RSD分别为0.5%及0.9%，供试品溶液及对照品溶液在8小时内稳定。

2.8 样品含量测定

取本品，精密称定，用流动相溶解制成0.4mg/ml的溶液，按照所确定含量测定方法测定供试品含量，结果三批含量分别为99.1%、99.5%、99.8%。

3.讨论

紫杉醇注射液含量测定方法可行，操作简便，结果准确，重现性好，专属性强，方法准确，可用于紫杉醇注射液含量测定。

[1]骆泽宇.紫杉醇的药理与临床研究进展.现代中西医结合杂志,2006，12，15（24）：3457-3458.

[2]吴健敏,张才煜,张启明.关于HPLC法测定紫杉醇有关物质方法的探讨[J].中国药事,2009,(11):1072-1075.

刘利檬（1982-），男，黑龙江省哈尔滨市，哈药集团生物工程有限公司，质检员、工程师、本科。