HPLC-ELSD测定青蒿素片中青蒿素的含量

青蒿素结构研究协助组

张东1，杨岚1，王满元2，屠呦呦

（1.中国中医科学院中药研究所，北京100700；2.首都医科大学中医药学院，北京10006）

HPLC-ELSD测定青蒿素片中青蒿素的含量

青蒿素结构研究协助组

张东1，杨岚1，王满元2，屠呦呦

（1.中国中医科学院中药研究所，北京100700；2.首都医科大学中医药学院，北京10006）

青蒿素是从青蒿中提取出来的有效成分，是我国唯一获得国际承认的抗疟药物。青蒿素片是由我所研制，该药对间日疟、恶疟包括凶险型脑疟均有卓效，尤其对抗氯喹、抗喹哌等抗性疟疾有特效。青蒿素的含量测定方法一般采用双波长薄层扫描法、紫外分光光度法[1]、柱前衍生-RP-HPLC[2]、高效液相蒸发光散射检测法[3]、反相高效液相色谱法[4]等。目前青蒿素片的含测方法为紫外分光光度法，该法有干扰，不准确。本实验采用蒸发光散射检测法测定青蒿素片中青蒿素的含量，方法可靠，结果准确，可以控制青蒿素片的质量。

1 仪器与试药

Alliance高效液相色谱仪及Empower2色谱工作站（Waters公司）；2420蒸发光散射检测器（Waters公司）；NA-5L氮气发生器（北京中兴汇利科技发展有限公司）；KQ-100型超声波清洗器（功率300 W，频率50 kH、昆山超声仪器有限公司）；Milli-Q超纯水机（美国Millipore公司）；青篙素对照品（中国药品生物制品检定所，纯度大于98%，批号100202-200402）；青篙素片（本实验室自制，批号为060510，060511，060512），甲醇（色谱纯）。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：ThremoC18（4.6 mm×250 mm，5 μm），流动相：甲醇-水（80∶20），流速：1.0 mL·min-1；柱温：25℃；蒸发光散射检测器漂移管温度60℃，载气（N2）压力5.8×10-3Pa，增益值为50，进样体积为5 μL。

2.2 方法的专属性考察

由青篙素与溶剂及辅料的HPLC-ELSD色谱图可知，辅料对青篙素的测定没有干扰，色谱柱的理论塔板数按青篙素的峰计算应不低于4000。

2.3 对照品溶液的制备

精密称取干燥至恒重的青篙素对照品适量，加甲醇制成每1 mL含0.501 mg的溶液，为对照品溶液。

2.4 线性关系考察

分别精密吸取对照品溶液2，4，5，6，8 μm注入液相色谱仪，计算峰面积，以进样量的对数为横坐标（X），峰面积的对数为纵坐标（Y）绘制标准曲线，计算回归方程为：Y=1.8784X+5.9856，r=0.9996。表明对照品在1.002～4.008 μg内，进样量对数与峰面积对数呈良好线性关系。

2.5 精密度实验

精密量取“2.3”项下对照品溶液5 μL，连续进样6次，以青篙素的含量计算RSD为1.83%（n=6），表明精密度良好。

2.6 样品溶液的制备

取本品20片，精密称定，研细混匀，精密称取细粉适量（相当于青篙素50 mg）置100 mL具塞锥形瓶中，精密加入甲醇100 mL，称定重量，超声（300 W，50 kHz）处理15 min放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，用微孔滤膜（0.45 μm滤过），取续滤液，即为供试品溶液。

2.7 稳定性实验

取同一份（批号为060510）腆试品溶液，分别于0，1，2，4，6，24 h测定，测得的峰面积变化趋势不明显，以青篙素的含量计算RSD为0.72%，表明在室温条件下供试品溶液24 h内稳定。

2.8 重现性实验

取同一批样品（批号060510）6份，分别制备成供试品溶液，在所确定的HPLC条件下，测定青篙素的含量，RSD为1.86%，说明方法重现性良好。

2.9 回收率实验

精密称取已知含量同一批号的样品（批号060510，含量每片248.7 mg）6份，每份约30 mg（含青篙素约24 mg），分别精密加青篙素对照品适量，精密加甲醇100 mL，按“2.6”方法制成供试品溶液。测定青篙素的含量，结果平均回收率为99.45%，相对标准偏差为2.31%，说明方法是可靠的。

2.10 样品测定

精密吸取对照品溶液5 μL，3批样品溶液5 μL注入液相色谱仪，记录色谱图。按外标两点法计算供试品中青篙素的含量。测定结果见表1。

3 讨论

本实验选择了石油醚、乙酸乙酯、甲醇作为提取溶剂，结果均能提取完全，但是石油醚和乙酸乙酯极性较小，需要回收溶剂后再以流动相溶解后进样，甲醇不需要回收溶剂，所以选择甲醇作为提取溶剂。实验还考察了提取时间对提取效率的影响，发现超声15 min就能提取完全，所以选择超声15 min。

本实验选择了3种不同品牌的色谱柱分别在两台液相色谱仪上对样品进行测定，所得结果变化很小，RSD为1.26%，说明本方法的耐用性良好。

李燊锦等[4]，采用反相高效液相色谱法测定青篙素的含量，青篙素测定的线性范围为10.4～104 μg对样品含量要求较高，对于微量的青篙素无法测量，具有一定的局限性，应用本法测定青篙素的线性范围为1.002～4.008 μg有效的解决了这个问题，定量下限降低了一个数量级。

本实验所建立的HPLC-ELSD方法测定青篙素的含量，准确度高、专属性强，灵敏度及稳定性均较好，测定方法可靠，测定结果能客观反映青篙素的含量，可作为该制剂的质量控制方法，并可作为其他复方制剂的参考。

摘编自《中国药学杂志》，2008年第43卷第7期：491～492页，图、表、参考文献已省略。