千里光消除大肠埃希菌R质粒的实验研究

沈红仙

桐庐县第一人民医院中药房，浙江 桐庐 311500

千里光消除大肠埃希菌R质粒的实验研究

沈红仙

桐庐县第一人民医院中药房，浙江 桐庐 311500

目的：评价千里光消除大肠埃希菌R质粒的效果。方法：对从本院尿路感染患者尿液中分离出的大肠埃希菌R质粒进行检测，随机选取60只小鼠，采用随机数字表法分为2组，对照组采取空白对照，小鼠经口感染大肠埃希菌，实验组小鼠经口感染大肠埃希菌后口服千里光浓缩液，观察并比较从2组小鼠大肠分离出的大肠埃希菌对抗生素的耐药性情况，与大肠埃希菌R质粒消除率。结果：实验组在含有四环素、氨苄青霉素、链霉素的药物平板上的消除大肠埃希菌R质粒菌落数均多于对照组（P＜0.05）。实验组大肠埃希菌R质粒消除率高于对照组（P＜0.01）。结论：中药千里光在消除大肠埃希菌R质粒方面具有良好的效果，在含有四环素、链霉素、氨苄青霉素的抗生素药物平板上仍可有效清除大肠埃希菌R质粒，安全、有效。

大肠埃希菌；R质粒；尿路感染；千里光；动物实验

大肠埃希菌是医院感染的主要致病菌群之一[1]。过去临床上通常采用高温培养、紫外线照射和溴化乙锭消除大肠埃希菌R质粒，但是大量临床资料显示这些方法存在毒副作用，对机体伤害较大[2]。近几年来，临床学者不断寻求更加安全、有效的方法消除大肠埃希菌R质粒。中药具有纯天然、无刺激的优点，适合临床应用于消除大肠埃希菌R质粒[3]。为进一步评价中药消除大肠埃希菌R质粒的临床效果，笔者对尿路感染患者尿液中分离出的大肠埃希菌R质粒进行检测，对其进行分析后报道如下。

1 材料

1.1 菌株 所选取的菌株为大肠埃希菌，均从本院尿路感染患者的尿液中分离所得，并经鉴定确定为大肠埃希菌。

1.2 实验动物 60只清洁级ICR健康小鼠，均由本院动物实验中心提供，常规实验室饲养，自然昼夜，实验均于白天进行。雌性小鼠30只，雄性小鼠30只，6～8周龄，体重18～20 g。采用随机数字表法将小鼠分成实验组和对照组各30只。实验组雌性小鼠15只，雄性小鼠15只；6～8周龄，平均(7.31±2.38)周；体重18～20 g，平均(19.02±6.12)g。对照组雌性小鼠15只，雄性小鼠15只；6～8周龄，平均(7.45± 2.29)周；体重18～20 g，平均(18.98±6.54)g。2组实验动物一般资料比较，差异均无统计学意义(P＞0.05)，具有可比性。

1.3 药材 千里光购于桐庐县某药房，培养基以及四环素、链霉素和氨苄霉素均属于国产的标准品。

2 实验方法

2.1 对照组 空白对照，小鼠经口感染大肠埃希菌，每天给予2 mL生理盐水后不采取任何措施。

2.2 实验组 采用中药消除大肠埃希菌R质粒，具体方法如下：对小鼠进行灌肠，以达到肠道清洁的目的，经口感染大肠埃希菌，然后给予中药溶液。取干燥千里光50 g，用适量水煮沸后过滤，将过滤药渣再用适量水煮沸，过滤，将2次千里光滤液合并后，浓缩为50 mL浸液，储存备用。每只小鼠每天给予2 mL中药溶液，连续给药3天。

3 观察指标与统计学方法

3.1 观察指标 3天后处死小鼠，分离培养细菌，计算消除大肠埃希菌R质粒的数量，通过抽提琼脂糖凝胶电泳进行测算。挑选在无药平板上生长的菌落，而在有药平板上不生长的菌落，即初步确定为R质粒消除子。将消除子与原菌液同时快速抽离质粒DNA，0.7%琼脂糖凝胶电泳，以监测R质粒带的消失情况。将小鼠大肠分离液接种于10块4%琼脂培养基上，在37℃培养1天，直至琼脂板长出菌落，挑选1000个菌落，采用影印培养法，依次转接到含有四环素、链霉素、氨苄青霉素的药物平板上，在相同温度环境下继续培养1天，观察并记录实验结果。比较2组大肠埃希菌对抗生素的耐药情况，应用的抗生素主要有四环素、链霉素、氨苄青霉素，比较四环素、链霉素、氨苄青霉素药物平板上消除大肠埃希菌R质粒的菌落数，菌落数越少，说明清除效果越好。比较2组大肠埃希菌R质粒消除率，消除率＝有药平板上不生长的菌落数/无药平板上生长的菌落数×100%。

3.2 统计学方法 采用SPSS17.0软件分析数据。计量资料以(±s)表示，采用t检验；计数资料采用χ2检验。

4 实验结果

4.1 2组消除大肠埃希菌R质粒菌落数情况 见表1。实验组在含有四环素、氨苄青霉素、链霉素的药物平板上的消除大肠埃希菌R质粒菌落数均多于对照组(P＜0.05)。

表1 2组消除大肠埃希菌R质粒菌落数情况 个(%)

4.2 2组大肠埃希菌R质粒消除率比较 见表2。实验组大肠埃希菌R质粒消除率高于对照组(P＜0.01)。

表2 2组大肠埃希菌R质粒消除率比较 个

5 讨论

大肠埃希菌俗称大肠杆菌，是哺乳动物大肠内的正常菌群之一，不仅能够合成维生素B和维生素K供机体利用，还能有效控制腐败菌、病原菌、真菌的过度繁殖，但是大肠埃希菌过度繁殖时会引起感染、急性肠炎等疾病[4]。近几年来，这种由R质粒介导耐药性的严重性，在临床和流行病学上引起极大重视。抗生素的应用，促使携带R质粒的菌株出现与迅速播散。这种质粒介导的多重耐药性菌株不但治疗困难，亦难控制其流行，常常引起医院内感染的早发流行[5]。大量临床资料显示，医院感染中R质粒的检出率高达50%以上，严重危及住院患者的健康[6]。大肠埃希菌的耐药性主要由染色体或耐药质粒，即R质粒介导，随着大肠埃希菌R质粒的传播和耐药性的逐渐增强，大肠埃希菌对抗菌药物的敏感性明显降低，给临床治疗带来了很大的困难。

R质粒被消除后，细菌的耐药性也消失了。临床上所应用的部分抗生素对机体存在一定的毒副作用，不便于临床的广泛应用，长期使用，效果明显降低[7]。因此在消除R质粒方面，医疗界一直在寻找安全、有效的措施。中医方法温和，毒副作用较少，对抗药物耐药性具有良好的应用价值[8]。本研究选用的中药千里光，性寒、味苦，具有清热解毒、明目、止痒等功效，还具有抗菌作用，多用于治疗风热感冒、目赤肿痛、泄泻痢疾、皮肤湿疹疮疖。大量资料显示千里光消除大肠埃希菌R质粒具有良好的效果[9]，作用机制主要是该中药激发和增强了机体抵抗力和防御功能，消除肠道菌群耐药质粒，其中主要为质粒R清除，提高菌群对药物的敏感性，降低菌群的耐药性[10]。虽然千里光在消除大肠埃希菌R质粒的能力不如十二烷基硫酸钠，但是大量实验已经充分证明了千里光的有效性，为深入研究千里光抗耐药菌株的作用提供了强有力的支持。在检测大肠埃希菌R质粒清除率中，采用抽提琼脂糖凝胶电泳，该方法能够有效反映中药及其代谢产物的药理作用，避免中药直接体外用药的一些误差，能够使大肠埃希菌R质粒清除率更加准确，科学地反映千里光的效果[11]。

本研究结果显示，千里光在消除大肠埃希菌R质粒方面具有良好的应用效果，在含有四环素、链霉素、氨苄青霉素的药物平板上仍可有效清除大肠埃希菌R质粒，安全、有效，可在临床上广泛应用。

[1]李延鸿，朱怀军．中药单方或复方对大肠埃希菌R质粒消除作用的研究[J]．实用药物与临床，2013，16(12)：1147-1150.

[2]黄依玲，冯洁，杨秋燕．抗大肠埃希菌的药物研究进展[J].广西医学，2013，35(10)：1394-1397.

[3]杨帆，杨玉荣，赵振升，等．中草药消除细菌耐药性质粒研究进展[J]．动物医学进展，2013，34(12)：160-164.

[4]何明，吴峥嵘，李渊，等．双黄连、清开灵对耐药大肠埃希菌R质粒及β-内酰胺酶的影响[J]．北京中医药大学学报，2012，35(2)：105-108.

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[8]桂勇，黄俐华，胡小洋，等．10种中药对产ESBLs大肠埃希菌的体外抑菌活性[J]．中国现代医生，2013，51 (31)：65-67.

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[10]李娟，李晓东，杨丽霞，等．单味中药体外抑菌活性的研究进展[J]．中国实验方剂学杂志，2011，17(11)：283-286.

[11]李延鸿，张慧华．痰热清逆转大肠埃希菌对β-内酰胺类抗生素耐药的研究[J]．抗感染药学，2013，10(1)：40-42.

（责任编辑：刘淑婷，吴凌）

R285.5

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0256-7415（2015）05-0276-02

10.13457/j.cnki.jncm.2015.05.130

2015-01-15

浙江省杭州市卫生发展基金项目 (hz2917223)

沈红仙（1971-），女，副主任中药师，主要从事中医药的临床研究。