血细胞分析仪（SysmexXN－2000）计数低值血小板样本方法学比较

刘　洋，段美庆，张　蕾，薛　杰，韩艳秋（内蒙古医科大附属医院检验科，内蒙古　呼和浩特　010059）

血细胞分析仪（SysmexXN－2000）计数低值血小板样本方法学比较

刘洋，段美庆，张蕾，薛杰，韩艳秋
（内蒙古医科大附属医院检验科，内蒙古呼和浩特010059）

摘要：目的：研究血细胞分析仪（Sysmex XN-2000）的荧光法检测低值血小板对临床的应用价值.方法：将180例血液样本分成3组，PLT＜50×109/L组、100×109/L≤PLT≤300×109/L组和PLT＞300×109/L组.用手工法、荧光法(PLT-F)、电阻抗法(PLT-I)同时计数血小板，参考方法为手工法计数.将手工法与荧光法、手工法与电阻抗法的PLT计数结果进行配对t检验.结果：SYSMEX XN-2000仪器上，100×109/L≤PLT≤300×109/L组和PLT＞300×109/L组，三种方法PLT计数结果无显著性差异(P＞0.05).PLT＜50×109/L组，荧光法(PLT-F)和参考方法无显著性差异(P＞0.05)，电阻抗法(PLT-I)和参考方法则有显著性差异(P＜0.05).结论：SYSMEX XN-2000荧光法用于检测低值血小板准确性较高，对于异常血液样本计数血小板能够提供一个准确而客观的手段，为临床提供可靠的诊疗依据.

关键词：XN-2000血细胞分析仪；血小板；荧光法；电阻抗法

随着血细胞分析仪的飞速发展，进入21世纪以来，在临床常规检测大规模使用各种血细胞分析仪后，关于血小板计数准确性的问题不断地引起关注和讨论.导致血小板计数不准确的原因主要是许多仪器检测红细胞和血小板在一个通道，不能准确地将血小板与非血小板颗粒分开，如小红细胞、红细胞碎片、白细胞碎片以及血小板和红细胞的大小分布出现交迭[1，2，3，4].Sysmex XN－2000血细胞分析仪可以采用两种方法检测血小板，分别是电阻抗法（PLT-I)和荧光法（PLT-F).本研究着重探讨比较在出现患者血小板低时，电阻抗法和荧光法两种方法与手工显微镜法血小板计数结果的比较.

1　材料与方法

1.1材料

1.1.1血液分析系统日本全自动血细胞分析仪（Sysmex XN－2000）、全自动制片染色仪（Sysmex SP－1000i）组成的全自动血液分析系统.三人共揽显微镜，德国莱卡公司提供.

1.1.2试剂日本Sysmex提供的XN－2000原装进口试剂和e-check质控品（level1、2)；由中国科华医疗有限公司提供的EDTA－K2抗凝管.按照“全国临床检验操作规程”第3版的要求配制血小板稀释液[5].

1.1.3样本来源180例样本为本院住院患者，样本均用EDTA－K2抗凝管真空采血.

1.2方法

1.2.1样本分组将180例血液样本按血小板数量分3组，即血小板数量减少组（PLT＜50×109/L)、血小板数量正常组（100×109/L≤PLT≤300×109/L)和血小板数量增高组（PLT＞300×109/L).

1.2.2检测方法

（1）手工法为血小板计数参考方法：世界卫生组织（WHO)推荐的血小板计数方法，按照“全国临床检验操作规程”（第3版）的要求配制溶血稀释剂，成分为1g/dl的草酸铵液.由两名有经验的检验员在显微镜下用血细胞计数板按照双盲法人工计数，取两次计数结果的均值，两次误差控制在5%以内.[6]

（2）仪器法：由经培训的人员操作血细胞分析仪（Sysmex XN－2000），用荧光通道、电阻抗通道对同一样本进行测定，2h内计数完成.

1.2.3重复性实验用荧光法和电阻抗法对同一样本连续测定10次，计算其变异系数（CV)和标准差（SD).

1.2.4日间精密度监测在相同时间使用e-check低值（批号：18470801)和中值（批号：18470802)质控品测量1次，连续测量20天，分别计算荧光法和电阻抗法的变异系数（CV)和标准差（SD).

1.2.5统计学方法数据用SPSS18.0和Excel统计学软件进行处理[7]，计量资料用X±SD表示，两组比较用t检验，以P＜0.05为有差异，具有统计学意义.

2　结果

2.1电阻抗法和荧光法测定的重复性结果.

荧光法SD=4.2，CV为2.6%，电阻抗法SD=4.9，CV为3.0%.

2.2仪器日间精密度监测结果见表1.

表1血细胞分析仪（SysmexXN-2000）质控品e-check监测结果

2.3将手工法与荧光法、手工法与电阻抗法的PLT计数结果进行配对t检验.结果见表2，从表中可知，100×109/L≤PLT≤300×109/L组（B组）和PLT＞300×109/L组（C组）三种方法所测结果无显著性差异（P＞0.05)，而PLT＜50×109/L组（A组）中电阻抗法和手工法血小板检测结果有显著性差异（P＜0.05)，结果无显著差异（P＞0.05)的为荧光法和手工法检测值.

表2 3种方法对180例全血样本血小板检测结果

3　讨论

从实验结果可以看出，当样本中血小板数量PLT＜50×109/L时，用荧光法（PLT－F)与手工法计数血小板比较，差异无统计学意义（P＞0.05)，电阻抗法与手工法计数血小板比较，差异有统计学意义（P＜0.05)；当血小板数量PLT＞300×109/L，荧光法、电阻抗法计数和手工法计数血小板均无显著性差异（P＞0.05)，同时在提示血小板值较高时，仪器计数结果准确性较高.这表明，当仪器检测低值血小板数量的样本时，血小板计数的准确性可能受到多种因素的影响[8，9].当一些体积较大或巨大血小板、畸形血小板、血小板聚集、血小板卫星现象[10]出现时，电阻抗法都可能未正常计数，造成血小板假性减少[11，12].所以当面对PLT减少，如再生障碍性贫血、急性心肌梗死、糖尿病、急性白血病、原发性血小板减少性紫癜等的患者，大血小板会增多，造成血小板检测结果偏低，出现这种情况，最好使用荧光法检测血小板.

参考文献：

〔1〕Tatsumi N，Tsuda I，FunaharaY.Assessment of hematological data obtained by the aperture impedance method in blood from patients with thalassemia or hemoglobinpoathy [J]. ICMR Annals，1998，8(1)：49-60.

〔2〕Nakagoshi R. Abnomal cases of platelet distribution[J]. Med Tech，1991，40(1)：41-48.

〔3〕孙克，王威.电阻抗法血小板计数的影响因素及对策[J].医学综述，2012，18(15)：2470-2472.

〔4〕张黎蕾，张葵.Sysmex XE-2100全自动血细胞分析仪血小板聚集报警信息可靠性分析[J].临床输血与检验，2012，14(1)：60-61.

〔5〕Turgeon ML.检验医学：基础理论与常规检验技术[M].西安：世界图书出版西安有限公司，2012.83.

〔6〕叶应妩，王毓三，申子瑜.全国临床检验操作规程[M].南京：东南大学出版，2006.122.

〔7〕颜虹，徐勇勇.医学统计学[M].北京：人民卫生出版社，2005.214.

〔8〕车轶群，沈迪，董莹莹，等.3种方法检测血小板的对比分析[J].北京医学，2011（7）：61-63.

〔9〕孙启国.血细胞分析仪检测血小板偏低的临床分析[C].中华医学会第7次全国检验医学学术会议论文汇编，2012.223.

〔10〕薛飞平，孙瑞雪，吴理锋.3种方法对巨大血小板的检测分析[J].检验医学，2010（5）：30-31.

〔11〕张琴，廖扬.Sysmex XN-3000全自动血细胞分析仪血小板计数性能评价分析[J].生物技术通讯，2014，4(25)：550-553.

〔12〕丛玉隆，乐家新.现代血细胞分析技术与临床[M].北京：人民军医出版社，2005.10-15.

中图分类号：R735.35

文献标识码：A

文章编号：1673-260X（2015）09-0033-02