愈骨佳胶囊含量测定方法

白 洁 郝武常 郭 冬

西安交大医用器材厂 (西安 710061)

愈骨佳胶囊含量测定方法

白 洁 郝武常△郭 冬▲

西安交大医用器材厂 (西安 710061)

目的：通过控制愈骨佳胶囊中芦丁的含量，来控制制剂的质量。方法：用高效液相色谱法，以乙腈-甲醇-0.4%醋酸(16∶6∶78)为流动相，检测波长为360nm。结果：含测方法针对性强、重现性好，质量可控。结论：将该方法列入本制剂质量标准中。

愈骨佳胶囊为医院制剂，临床使用多年。由三棱、莪术等七味中药组成，具有破气行血、散结止痛功能。用于治疗风、寒、湿、邪等多种原因引起的髋部疼痛、肿胀、屈伸活动受限、行走困难的功能障碍性疾病，主治股骨头环死。处方中三棱为君药，主要含有挥发油、黄酮类等成分[1-3]。现代药理研究说明三棱黄酮具有抗血小板聚集、抗血栓、镇痛作用[4]，是其活性部位之一，因此可用三棱总黄酮的量来控制制剂的质量，以保证制剂的临床治疗效果。

1 设施设备、试药 1.1 仪器设备 H-CLSS 超高效液相色谱仪， Waters公司， C18色谱柱(Diamosil 4.6×250mm，5μm)，超声波清洗机(H66025T)，TGL-16G离心机(上海安亭科学仪器厂)。

1.2 试 药 乙腈、甲醇为色谱纯，水为娃哈哈纯净水(杭州娃哈哈食品有限公司)，其余试剂为分析纯(天津富宇化学试剂厂)；芦丁标准品(购于中国生物制品检定所，批号0021-1205，含测用)，愈骨佳胶囊为我院自制制剂。

2 实验与结果 2.1 试验条件 色谱柱为Diamosil C18；流动相：乙腈-甲醇-0.4%醋酸溶液(16∶6∶78)，流速：1.0mL/min；检测波长360nm；柱温30℃。

2.2 对照品溶液制备[5]精密称定在120℃减压干燥至恒重的芦丁对照品适量，加一定量甲醇溶解，制成每1mL含0.3mg的溶液。

2.3 供试品溶液制备 称取25g胶囊内容物，加甲醇120mL，超声提取30min，过滤，滤液放于150mL容量瓶中，用洗涤液洗涤并转入到量瓶中，补加甲醇到刻度，摇匀，过滤，滤液留用。

2.4 阴性溶液制备 取缺三棱的供试品内容物25g，依据供试品溶液制备方法制备，得滤液留用。

2.5 空白试验 按上述实验条件，吸取供试品溶液、对照品溶液及阴性溶液各10μL，分别注入高效色谱仪中。在供试品色谱峰中，选择与对照品色谱峰位置相一致的吸收峰作为含量测定峰，而阴性溶液在此处无吸收峰。

2.6 含量测定方法 分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液各10μL，注入高效色谱仪中，进行测定，得含量结果。

2.7 方法学验证实验 2.7.1 线性关系考察:分别吸取对照品溶液0.1mL、0.2mL、0.4mL、0.6mL、0.8mL放置于10mL容量瓶中，混匀，加甲醇至刻度，采用上述色谱条件进行含量测定。峰面积(A)为纵坐标、芦丁进样量(C)为横坐标，绘制标准曲线图，其线性回归方程为A=5.3254×10-8C-5.1585×10-5(R= 0.9998)，芦丁的含量在2.98μg～23.19μg范围内线性关系良好。

2.7.2 精密度试验方法:精密吸取对照品溶液(0.3mg/mL)10μL注入高效色谱仪中，连续进5次样，得芦丁吸收峰面积的RSD<3% ，表明测定方法精确度高。

2.7.3 重复性试验方法:取供试品溶液(批号20140301)5份，采用含量测定方法进行测定，其芦丁含量的RSD<3% ，表明该方法重现性好。

2.7.4 稳定性试验 将供试品溶液室温放置，于0h、2h、4h、6h、8h、10h、12h取样，测定，得峰面积值，其芦丁含量的RSD% <3%，显示供试品液在12h内是稳定的。

2.7.5 回收率试验:精密称取已知含量的供试品(批号20140301)适量，分别精密加取不同体积的芦丁对照品溶液，依据供试品溶液制备方法制备，进行含量测定，回收率在95%～105%(n=6)之间，证明芦丁的提取和检测方法准确、稳定。

2.8 样品测定 取三批样品，依据供试品溶液制备方法制备，分别精密吸取10μL，注入高效色谱仪中，按外标法以峰面积计算芦丁的含量，结果见表1。

表1 含量测定结果

3 讨 论 用高效液相色谱法对愈骨佳胶囊中的芦丁含量进行测定，具有方法适当、精确度高、专属性强，重现性好的特点。

通过在200～500 nm波长范围内，扫描对照品溶液、供试品溶液显示在360 nm波长处有最大吸收，阴性溶液无干扰。

以甲醇为供试品的提取液，对比了索氏提取法和超声提取法，芦丁含量无太大的差异，鉴于超声提取法简单、易操作，因此选用超声提取法处理供试品较好。

[1] 毛春芹, 陆兔林 . 三棱总黄酮镇痛作用研究[J].南京中医药大学学报(自然科学版),2001，17(5):299-300.

[2] 张恩户,赵 锐. 活血化瘀药镇痛作用的文献再评价[J].中药药理与临床成药,2010，26(6):79-81.

[3] 王新胜,吴启南.三棱化学成分与质量评价的研究进展[J]. 中国药房,2013,24(15):1417-1419 .

[4] 胡旭光，邓小慧. 三棱总黄酮抗血小板聚集及抗血栓作用研究[J].陕西中医,2009,30(8):1091-1093.

[5] 张 媛，崔 蓉.金华产三棱中总黄酮的含量测定[J].中医药导报, 2011,17 (1):89-90.

(收稿2015-06-17；修回2015-08-05)

@愈骨佳胶囊 芦丁 色谱法，高压液相

R284

A

10.3969/j.issn.1000-7369.2015.11.045

△陕西省新药评审中心 ( 西安 710065)

▲陕西省中医药研究院 ( 西安 710003)