祖师麻凝胶膏剂的制备工艺及含量测定

李希珍，张庆贺，董刚，李平亚，卢丹

(吉林大学药学院，长春 130021)

祖师麻(Cortex daphnes)为瑞香科瑞香属植物黄瑞香(DaphnegiraldiiNitsche)的干燥根皮及茎皮，别名祖司麻、大救驾、金腰带、黄狗皮，分布于陕西、甘肃、四川、青海等省。味辛、苦，性温，有小毒，具有祛风除湿、活血止痛、舒筋活络、消肿等功效，主治风湿痹痛、四肢麻木、头痛、腰痛、跌打损伤、支气管炎和风湿性关节痛等症[1，2]。

目前，临床上应用的含有祖师麻外用制剂均为橡胶膏剂，有祖师麻膏药、祖师麻腰间盘突出贴和祖师麻关节止痛膏。橡胶膏剂由于具有载药量较小(0.2%～2.0%)、生物利用度低、对皮肤有刺激性、贴敷于皮肤上不易揭去[3～5]等缺点，使应用受到限制；而凝胶膏剂的载药量一般为5%～10%，最大可达20%。由于其保湿性好，所以透皮吸收好、生物利用度高，且对皮肤刺激小，可反复帖敷[6，7]。因此，凝胶膏剂的研究日益成为外用制剂开发的热点。本试验研究了祖师麻凝胶膏剂的制备工艺，以期为广大风湿类患者提供更加高效和舒适的临床用药。

1 仪器与材料

RK-200型水凝胶涂布机流水线(天津瑞康医药生物科技有限公司)；RCT-3200型超纯水机(长春莱博帕特科技发展有限公司)；JYT-10型托盘天平(上海医用激光仪器厂)；FA1104N型分析天平(上海民桥精密科学仪器有限公司)；KQ-3200型超声波清洗器(江苏省昆山市超声仪器有限公司)；1525型高效液相色谱仪、2998型PDA检测器(美国Waters公司)；AT-330柱恒温箱(天津奥特赛恩斯仪器有限公司)。

祖师麻(采自太行山，经吉林大学药学院生药教研室张晋敏教授鉴定为祖师麻)；祖师麻提取物(实验室自制，批号140521)；祖师麻甲素对照品(中国食品药品检定研究院，批号110900-201006)；甲醇为色谱纯；水为超纯水；其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 评价标准

测定初黏度、剥离性、残留量、皮肤追随性，并对其外观质量打分，评分时将各指标的最大值作为参照，然后多指标综合加权评分，根据综合评价计算公式计算出各批制剂的得分。试验发现，皮肤追随性对凝胶膏剂的使用影响较大，故设定其权重k4为0.3；残留量和剥离性对凝胶膏剂的黏度有一定的影响，故设定其权重k3和k2均为0.2；初黏度和外观质量对凝胶膏剂的质量和使用影响较弱，故设定其权重k1和k5均为0.15，权重设定与文献[8]报道基本一致。祖师麻凝胶膏剂的评价指标及评分标准见表1。

表1祖师麻凝胶膏剂的评价指标及评分标准

Table 1 The evaluation index and scoring standard of cortex daphnes gels

注：*.皮肤追随性是指将成型的凝胶膏剂贴于手腕背部，用力甩10下不脱落为满分10分。

Note:Skin to follow sex refers to the forming gel paste paste on the back of the wrist,hard left off under 10,for out of ten.

2.2 制备工艺考察

采用L9(34)正交试验进行制备工艺考察[9～11]。在预实验的基础上，考察活性氢氧化铝、甘油、酒石酸和EDTA-2Na共4个因素用量，对每个因素确定3个水平，见表2。

按L9(34)正交试验因素水平表，称取适量的EDTA-2Na、活性氢氧化铝和聚丙烯酸钠置于烧杯中，混合均匀，加入甘油，搅拌均匀，作为A相；称取适量酒石酸，加入50mL超纯水，搅拌使之完全溶解，作为B相；称取祖师麻提取物，加入250mL超纯水，搅拌使之充分溶解，作为C相；将B相和C相倒入A相中，立即搅拌均匀，涂布于无纺布上，阴干即得[12，13]。

表2祖师麻凝胶膏剂制备工艺正交试验因素水平

Table 2 The orthogonal experiment factor levels of preparation technology of cortex daphnes gels

按“2.1”项下评价标准对祖师麻凝胶膏剂样品进行评分及其方差分析，结果见表3和表4。

表3祖师麻凝胶膏剂制备工艺正交试验结果

Table3Theorthogonalexperimentresultsofpreparationtechnologyofcortexdaphnesgels

编号No.ABCD总 分Totalpoints1111142.082122255.163133364.374212155.555223292.066231174.927313248.348321357.899332137.42K153.8748.6658.3057.19K274.1868.3749.3859.47K347.8858.9068.2659.27R26.2919.7118.882.08

表4祖师麻凝胶膏剂制备工艺正交试验结果方差分析

Table4Theanalysisofvarianceoforthogonalexperimentresultsofcortexdaphnesgels

方差来源SoruceofvariationSSfFPA1139.542118.57<0.01B583.23260.69<0.05C535.22255.69<0.05D9.6121.00

注：F0.05(2，2)=19.00；F0.01(2，2)=99.00

由直观分析可知，各因素对祖师麻凝胶膏剂制备工艺的影响因素顺序为A>B>C>D，以极值最小的D因素进行方差分析表明，A因素(EDTA-2Na)对祖师麻凝胶膏剂制备工艺的影响极显著；B因素(酒石酸)和C因素(活性氢氧化铝)对祖师麻凝胶膏剂制备工艺的影响显著；D因素(甘油)对祖师麻凝胶膏剂制备工艺无显著影响。确定最佳工艺条件为A2B2C3D2，制备工艺如下：称取EDTA-2Na 0.6g、活性氢氧化铝0.7g和聚丙烯酸钠34g置于烧杯中，混合均匀，加入甘油130g，搅拌均匀，作为A相；称取酒石酸1.2g，加入50mL超纯水，搅拌使之完全溶解，作为B相；称取祖师麻提取物适量，加入250mL超纯水，搅拌使之充分溶解，作为C相；将B相和C相倒入A相中，立即均匀，涂布于无纺布上，阴干即得。

按确定的工艺制备3批祖师麻凝胶膏剂，并按“2.1”项下的评分标准进行综合评分，3批产品平均得分为93.16，RSD 0.08%，表明确定的制备工艺稳定可行。

2.3 含膏量

含膏量测定采用《中国药典》2010版一部附录Ⅱ“贴膏剂的含膏量测定法第二法”测定祖师麻凝胶膏剂的含膏量。结果表明，含膏量分别为：5.9mg/100cm2、6.1mg/100cm2、6.0mg/100cm2。

2.4 含量测定

含量测定方法采用《中国药典》2010年版一部附录Ⅵ D“高效液相色谱法”测定祖师麻凝胶膏剂中祖师麻甲素的含量。

色谱条件：Diamonsil C18色谱柱(4.6mm×250mm，5μm)，流动相甲醇-0.3%磷酸(24∶76)，检测波长327nm，流速1.0mL/min，柱温35℃。

对照品溶液的配制：精密称取祖师麻甲素对照品适量，加85%甲醇制成0.1g/L的对照品溶液。

供试品溶液的配制：精密称定祖师麻凝胶膏体2.114g，加85%甲醇50mL，称定重量，超声处理30min，放冷，再称定重量，用85%甲醇补足失去的重量，用0.2μm微孔滤膜过滤，取续滤液，即得。

含量测定：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪，测定，即得。

2.4.1标准曲线的绘制精密吸取祖师麻甲素对照品溶液1.0mL、2.0mL、4.0mL、6.0mL、8.0mL、10.0mL，分别置于10mL容量瓶中，用85%甲醇定容至刻度，得系列对照品溶液。分别精密吸取20μL，按“2.4”项下色谱条件测定，以质量浓度为横坐标、峰面积为纵坐标，得回归方程Y=3.55×103X-2.27×105(r=0.9994)，线性范围0.2μg～2.0μg。

2.4.2精密度试验精密吸取同一供试品溶液，连续进样6次，按“2.4”项下色谱条件测定，结果峰面积的RSD为0.99%，说明该方法精密度良好。

2.4.3重复性试验取同一批祖师麻凝胶膏剂，按“2.4”项下供试品制备方法平行制备6个供试品溶液，依次按“2.4”项下色谱条件测定，结果祖师麻甲素含量的RSD 1.17%，表明该方法重复性良好。

2.4.4稳定性试验取同一批样品制得的供试品溶液，分别于0h、2h、4h、8h、24h、48h各进样10μL，结果祖师麻甲素含量的RSD为1.82%，表明供试品溶液在48h内稳定。

2.4.5加样回收率试验精密称取已知含量的祖师麻凝胶膏剂9份，分别加入祖师麻甲素对照品适量，按“2.4”项下供试品制备方法制备供试品溶液。精密吸取各供试溶液10μL，按“2.4”项下色谱条件测定(表4)，测定结果表明，该方法回收率良好。

表4祖师麻甲素加样回收率试验

Table 4 The Sample recovery rate experiment of daphnetin

2.5 样品祖师麻甲素含量测定

按“2.2”项下最佳工艺制备3批祖师麻凝胶膏剂，每批次按5%比例取样，按“2.3”项和“2.4”项方法测定含膏量和祖师麻甲素含量。3批祖师麻凝胶膏剂的平均祖师麻甲素含量(n=2)分别为10.1mg/贴、10.1mg/贴、10.2mg/贴。

3 讨论

本凝胶膏剂是以聚丙烯酸钠为骨架材料，活性氢氧化铝为交联剂，甘油为保湿剂，酒石酸和EDTA-2Na为调节剂。聚丙烯酸钠作为骨架材料，不但为有效成分提供骨架支撑，而且本身可以作为增黏剂，提高凝胶膏剂的黏度；保湿剂常用的有甘油、丙二醇、山梨醇、聚丙二醇等，因甘油无色澄清、高沸点，具有较强的吸湿性，冰点较低、能防止冰冻，贴于皮肤后，有温热的感觉，故选择甘油作为保湿剂。

研究表明，在制备凝胶膏剂时，搅拌速度与时间是关键因素。搅拌速度过快，成胶时间缩短，且容易引进气泡，难以涂布；搅拌速度过慢，容易出现部分成胶，胶体颜色不均，使有效成分在凝胶膏体中分布不均。一般搅拌速度控制在100r/min～120r/min，搅拌时间3min～5min较好。

供试品溶液的制备方法一般采用回流提取法和超声提取法，参考《中国药典》2010版中祖师麻片和跌打止痛膏的供试品溶液的制备方法。本实验选择超声提取法，并对提取溶剂和提取时间进行考察。提取溶剂考察了纯甲醇、85%甲醇、75%甲醇和水，结果显示，85%甲醇效果最好，超声提取30min祖师麻甲素能提取完全。

本实验采用HPLC对祖师麻凝胶膏剂的有效成分祖师麻甲素进行含量测定，研究表明，本方法操作简单，精密度、重复性、稳定性和准确性良好，适用于祖师麻凝胶膏剂的含量测定和质量控制[14，15]。

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