北京地区不同寄主蔬菜菌核病菌抗药性比较

乔广行　李兴红　周莹　黄金宝　林秀敏　张玮

摘要：为明确北京地区不同科蔬菜菌核病菌对4种常用杀菌剂（多菌灵、乙霉威、腐霉利和异菌脲）抗药性现状，20—202年在北京郊区县蔬菜种植地区分别采集84个不同蔬菜菌核病菌（Sclerotinia sclerotiorum）菌株，采用最小浓度抑制法测定84个不同蔬菜菌核病菌对4种杀菌剂的抗药性。检测结果表明：供试的84个菌株中，对多菌灵、乙霉威、腐霉利和异菌脲抗药性菌株比例分别达到9022%、0000%、3750%和5000%；不同科蔬菜的菌核病菌对不同药剂的敏感程度不同。根据菌株对4种杀菌剂的抗药性与敏感性表现分为8种抗性表现型；其中对多菌灵、乙霉威和异菌脲抗药三重抗药性菌株所占比例为3386%，对多菌灵与乙霉威抗药二重抗药性所占比率为275%；4重抗药性菌株所占比例为587%；对多菌灵、乙霉威和腐霉利抗药三重抗药性菌株所占的比例为27%，其他表现型菌株所占比例均在00%以下。结果表明，北京地区蔬菜菌核病菌对供试的4种杀菌剂均已产生抗药性，迫切需要选择新型的杀菌剂或生防制剂防治。

关键词：北京；蔬菜；菌核病菌；杀菌剂；抗药性

中图分类号： S4363文献标志码： A

文章编号：002-302（204）2-055-03

蔬菜菌核病菌[Sclerotinia sclerotiorum （Lib） de Bary]是非常重要的蔬菜土传真菌病害，寄主范围广，可侵染400多种植物，其中包含重要的蔬菜黄瓜、番茄、茄子、辣椒、生菜、莴笋、茴香等[-2]。随着保护地蔬菜种植面积的不断扩大，保护地相对低温和高湿的环境条件下常有发生，加之保护地复种指数提高，连茬种植，病菌逐年累积，危害也逐年加重。崔文清等2006—2008年对北京通州地区蔬菜菌核病发生进行调查并对不同类型的蔬菜发病情况进行分析，重病田发病率20%～30%，据统计，菌核病造成的保护地蔬菜产量损失一般为0%～30%，严重者在80%以上甚至绝收[3]。蔬菜菌核病防控以化学杀菌剂防治为主，辅以农业措施生态调控与生物制剂防治。近年来我国菌核病使用化学杀菌剂防治，防治效果下降，油菜菌核病菌对多菌灵[4-8]、乙霉威[9]、腐霉利[0-]和异菌脲[2-3]抗药性研究报道较多，但未见不同科蔬菜菌核病菌抗药性比较研究报道。不同种类蔬菜生长期种植方式的差异以及生长期防治菌核病使用杀菌剂的用药量与用药次数不同，使菌核病菌对杀菌剂产生抗药性频次产生差异。为了进一步明确目前北京地区不同科蔬菜菌核病菌的抗药性现状，作者对北京地区不同科蔬菜菌核病菌的抗药性进行了监测，以期为指导不同种类蔬菜菌核病的防治、田间病菌抗药性风险评估及综合治理提供有价值的理论和实践依据。

材料与方法

供试菌株

200—202年，在北京市主要蔬菜种植地区随机采集不同科蔬菜病株上的菌核病菌。采集病株挑取病株上的菌丝于DA培养基上，23℃培养分离和单菌丝纯化后保存。从北京地区共采集6个区县以葫芦科、茄科、豆科、十字花科、伞形科与菊科蔬菜上84个菌核病菌菌株。

2供试药剂

98%多菌灵（carbendazim）原药，江苏蓝丰生物化工股份有限公司生产，预溶于0 mol/L盐酸中；95%乙霉威（diethofencarb）原药，江苏蓝丰生物化工股份有限公司生产，预溶于甲醇中；96%腐霉利（procymidone）原药，浙江禾益农化有限公司生产，97%异菌脲（iprodione）原药，江苏快达农化股份有限公司生产，预溶于丙酮中。上述4种药剂分别配成 0 000 μg/mL 母液，母液储存于4 ℃冰箱内。

3试验方法

用最小浓度抑制法（minimum inhibitory concentration，MIC），多菌灵、乙霉威、腐霉利与异菌脲以50 μg/mL设置为鉴别浓度。将待检测的菌核病菌各菌株在DA平皿上培养 3 d 后取直径为5 mm的菌饼移至各含药平皿中，在23℃下培养3 d，在含药平板上不能或几乎不能在该鉴别浓度上正常生长的为敏感菌株，能正常生长的为抗性菌株，同时观察菌丝生长状况，用十字交叉法量取菌丝的直径，根据菌丝生长情况，鉴别菌株对药剂的敏感性。每个药剂浓度3个重复。统计各采集地敏感与抗性菌株的发生频率。

[Z]抗药性频率=抗药性菌株数/总测定菌株数×00%。

2结果与分析

2不同科蔬菜菌核病菌抗性频率分布

20—202年从北京7个科蔬菜的菌核病菌84个菌株，[2]采用最小浓度抑制法（MIC）检测这些菌株对多菌灵、乙霉威、腐霉利和异菌脲的抗药性。结果（表）表明，在84个供试菌株中，多菌灵、乙霉威、腐霉利和异菌脲产生抗药性菌株的频率分别为：9022%、0000%、3750%与5000%，其中对腐霉利产生抗药性的比例最小。由图可知，不同科蔬菜对4种杀菌剂抗药性频率存在差异，结果表明北京地区不同科蔬菜的菌核病菌对多菌灵、乙霉威和异菌脲的抗药性水平较高。

22不同科蔬菜菌核病菌对4种杀菌剂抗药性表现型

供试的84个蔬菜菌核病菌菌株，依据它们对多菌灵（car）、乙霉威（die）、腐霉利（pro）和异菌脲（ipr）这4种杀菌剂的抗感程度，可以分为8种抗药性表现型（表2）。其中多菌灵、乙霉威和异菌脲表现抗药性但对腐霉利表现敏感的菌株56个，所占比例为3043%；对多菌灵和乙霉威表现抗药性而对腐霉利与异菌脲表现敏感的菌株5个，所占比例为2772%；对多菌灵、乙霉威、腐霉利和异菌脲均表现抗药性的菌株28个，所占比例为522%；对多菌灵、乙霉威、腐霉利表现抗药性而对异菌脲表现敏感的菌株3个，所占比例为685%，其他表型的菌株数均在0个以下，所占比例较低。

3不同科蔬菜的菌核病菌对多菌灵、乙霉威、腐霉利和异菌脲4种杀菌剂抗药性表现型

202年采用最小浓度抑制（MIC）法测定了不同科蔬菜菌核病菌菌株对多菌灵、乙霉威、腐霉利和异菌脲的抗药性，结果表明，不同科蔬菜的菌核病菌对多菌灵、乙霉威、腐霉利和异菌脲的产生抗药性的菌株所占的比例分别为9022%、0000%、3750%与50%。试验结果（表、图）表明，北京地区不同科蔬菜菌核病菌对多菌灵、乙霉威抗药性较严重，应用这2种药剂防治蔬菜菌核病意义不大，其次对异菌脲抗药性水平较高。但北京不同科蔬菜抗药性水平存在差异，其中源自豆科蔬菜的菌核病菌菌株对多菌灵抗药性频率相对较低，达6667%；源自十字花科蔬菜的菌核病菌菌株对腐霉利抗药性频率相对较高，达到7000%；而源自菊科与茄科蔬菜的菌核病菌菌株对异菌脲的抗药性水平相对较高，所占比例分别为6742%与5789%，田间使用腐霉利与异菌脲应考虑不同科蔬菜菌核病菌抗药性水平，注意限制多菌灵与乙霉威2种药剂使用，腐霉利与异菌脲2种药剂使用要根据蔬菜的种类注意与其他不同作用方式的药剂轮换使用，适当减少存在抗药性风险的杀菌剂在个生长季节的使用量与使用次数，以延缓异菌脲与腐霉利抗药性进一步增加。

32不同科蔬菜的菌核病菌对杀菌剂多重抗药性

菌核病菌对多菌灵、乙霉威、腐霉利和异菌脲抗药性在油菜、大豆和向日葵等大田作物均有报道，但是也多数是对单种或2种杀菌剂抗药性的研究，而对蔬菜菌核病菌菌株的多重抗药性的报道较少。本研究202年测定了84个不同科蔬菜的菌核病菌对多菌灵、乙霉威、腐霉利和异菌脲抗药性，没有检测到对这4种杀菌剂都敏感的菌株。4重抗药性菌株28个，所占比例为522%；对多菌灵、乙霉威和异菌脲3重抗药性菌株56个，所占比例为3043%；对多菌灵、乙霉威和腐霉利3重抗药性菌株3个，所占比例为685%；对多菌灵与乙霉威2种药剂2重抗药性菌株5个，所占比例为272%；对多菌灵与乙霉威2种药剂产生抗药性菌核病菌的抗性普遍较强，而对多菌灵与乙霉威2种药剂具有交互抗性的菌株8个，所占比例为979%，田间应尽量减少这2种药剂的使用。菊科蔬菜菌核病菌对异菌脲抗药性相对较重，所占比例为6742%。田间使用，应注意确定防治适期并与其他不同作用方式新型药剂如啶酰菌胺[4- 5]、咯菌腈[6]、咪鲜胺[7]与申嗪霉素[8]等轮换使用，目前国内正式登记生物防治制剂只有噬菌核酶2亿活孢子/g可湿性粉剂[9]，但有研究报道认为生物防治制剂盾壳霉[20]、枯草芽孢杆菌[2]、放线菌[22]与粘帚霉[23]对菌核病菌有较好的防治效果，生产上还可辅以合理的农业管理措施如温汤浸种、及时清除病残体、温湿度控制等，发病严重的注意水旱轮作以及与非寄主植物轮作等，以达到延缓病菌对常规杀菌剂药剂的抗药性。

植物病原菌对杀菌剂的抗性风险是由药剂和病原菌共同决定的，如药剂的选择压力和作用机制、病原菌自身的抗药性频率、抗药性突变体的适合度和交互抗性等[24]。在蔬菜菌核病防治研究中没有明确菌核病菌对这些新杀菌剂抗性风险情况下，在农业生产过程中，各地要根据当地的生产水平和实际情况，科学、合理地指导施药，避免长期、单一地使用某一种药剂或某一类型的药剂，有条件的地区，要定期做好田间病菌抗药性的监测工作，并配合不同作用机理的药剂合理搭配使用，减少因防治不当而带来的蔬菜品质下降和产量损失。在应用中应该遵循杀菌剂使用准则，与其他不同作用机制的杀菌剂轮换使用或交替使用，以延缓病菌抗药性的产生。

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