HCV－RNA与HCV－Ab、ALT、TP相关性研究

李 昕，管世鹤

(安徽医科大学第二附属医院检验科，安徽 合肥 230601)

丙型病毒性肝炎，是一种由丙型肝炎病毒(hepatitis C virus，HCV)感染引起的病毒性肝炎。据世界卫生组织统计，全球HCV 的感染率约为3%，约1.8 亿人感染HCV，每年新发丙型肝炎病例约3.5 万例，呈现全球流行趋势。其中50%～85%感染者发展为慢性丙型肝炎，lO%～30%发展为肝硬化，肝硬化患者中约3%～10%可演变为肝细胞癌［1］。近年来HCV 感染人数持续上升，成为日趋严重的社会和公共卫生问题。临床实验室多采用实时荧光(RT－PCR)法检测血液中的HCVRNA 用于HCV 感染诊断、丙型肝炎患者抗病毒药物疗效监测及血液筛查［2］。本研究对本院2011～2013年疑似丙肝患者的HCV－RNA、HCV－ Ab、ALT 及TP 监测指标进行分析，对其相关性进行研究，探讨其在丙型肝炎诊断和治疗疗效方面的临床意义。

1 对象及方法

1.1 对象

选取本院2011～2013年度共708 例住院及门诊患者HCV－Ab 阳性、伴随典型临床表现并已排除其他肝炎的可疑丙型肝炎患者血样。其中男444例、女264 例，男性年龄1～95 岁，平均年龄45.5 岁，女性年龄10～73 岁，平均年龄45.1 岁。

1.2 试剂与仪器

1)丙型肝炎病毒核酸扩增(PCR)荧光定量检测试剂:上海科华生物工程有限公司生产，批号分别为20121206、20131201。仪器采用罗氏Light Cycler480荧光定量PCR 仪，Agilent Technologies 扩增仪。

2)丙型肝炎病毒抗体检测试剂盒(ELISA):广州中山生物工程有限公司生产，批号分别为20121205、20131203。仪器采用科华KHB ST－360酶标仪。

3)谷丙转氨酶(ALT)和总蛋白(TP)试剂:SIEMENS 有限公司生产，批号分别为20121117、20131201。仪器采用德国SIEMENS Dimension RxL Max 全自动生化分析仪。

1.3 方法

1)HCV－ RNA 检测。采用实时荧光RT－PCR 法，由PCR 实验室人员严格按照试剂盒说明书进行荧光定量检测，在实验中设置阴性对照、强阳性对照、弱阳性对照以及4 个不同浓度的标准品(2 ×104～2 ×107)，HCV－RNA 值＜1.0 ×103IU/mL 为检测下限(不同HCV－RNA 检测方法可用IU/mL 和copy/mL 两种单位，换算公式:IU/mL=0.854 ×copy/mL+0.538)。本实验选用试剂盒采用定量单位为IU/mL。

2)HCV－Ab 检测。采用ELISA 法，由实验室人员严格按照试剂盒说明书进行定性检测，实验中设置一孔阴性对照、一孔空白对照及一孔阳性对照。酶标仪采用450nm/630nm 双波长检测吸光度(A)。试剂盒阴性对照A 值≤0.1，阳性对照A 值≥0.6，临界值(Cut－ off 值)计算:Cut－ off 值=0.15 +阴性对照A 值均值。通过与阴性对照、空白对照、阳性对照的Cutoff 值比较判断样本A 值＜Cut－off 值为阴性，样本A 值≥Cut－off 值为阳性。

3)ALT 检测。采用SIEMENS Dimension RxL Max 全自动生化分析仪的酶速率法，ALT ＜40U/L为正常合格。

4)TP 检测。采用SIEMENS Dimension RxL Max 全自动生化分析仪的双缩脲比色法，TP ＜80g/L为正常合格。

1.4 统计学方法

应用SPSS13.0 统计软件包分析，均值比较用t检验，以P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

1)708 例HCV－Ab 阳性患者HCV－RNA 的检测结果:708 例HCV－ Ab 阳性患者中，HCV－RNA 值1.0 ×103者为504 例，HCV－RNA 阳性率为71.2%。HCV－ RNA 值＜1.0 ×103者为204例。504 例HCV－ RNA 值1.0 ×103者中数量级107为42 例、106为174 例、105为156 例、104为90例、103为42 例，经统计计算两种检测方法的差异有统计学意义(χ2=39.723，P=0.005 ＜0.05)。

2)708 例HCV－Ab 阳性患者的HCV－RNA含量与ALT、TP 平均值之间的关系如表1～表2所示，在708 例HCV－Ab 阳性患者中ALT 异常人数所占百分比随着HCV－RNA 载量的增加呈依次递增的趋势，与HCV－RNA 成正相关性(r=0.837，P=0.01 ＜0.05)，但HCV－RNA 载量与ALT 平均值不构成正相关性(r= 0.112，P= 0.60 ＞0.05)。708 例HCV－Ab 阳性患者中HCV－RNA载量与TP 异常的人数所占百分比未有相关性(r=－0.233，P=1.73 ＞0.05)，且随着HCV－RNA 载量的增加，相应的TP 平均值呈在正常范围值内的负相关(r=－0.827，P=0.00)，不同HCV－RNA载量的标本的TP 平均值变化较平稳。

表1 708 例HCV－Ab 阳性患者的HCV－RNA 载量与ALT、TP 的平均值

3)708 例HCV－Ab 阳性患者的HCV－RNA载量与性别、年龄之间的相关性分析如表3所示，708 例HCV－Ab 阳性患者的HCV－RNA 载量与平均年龄之间并无明显关系，且随着HCV－RNA载量的增加，男性所占比例、女性所占比例及40 岁以上患者所占比例、40 岁以下患者所占比例未呈规律性变化。但在总体HCV－Ab 阳性患者中，男性患者的比例62.7% 要大于女性患者的比例37.3%，但差异无统计学意义(P＞0.05);40 岁以上患者的比例为69.2%高于40 岁以下患者的比例30.8%，差异有统计学意义(P＜0.05)。其中40 岁以上男性患者人数为392 人，所占比例为55.37%。

表2 708 例HCV－Ab 阳性患者的HCV－RNA 载量与ALT、TP 异常人数百分率

表3 236 例HCV－Ab 阳性患者的HCV－RNA 载量与性别、年龄之间的关系

3 讨论

1)HCV 是丙型肝炎的病因，目前所用实验室诊断方法主要为病原抗原检测、病原抗体检测和HCV－RNA 检测。由于采用实时荧光RT－ PCR方法检测HCV－RNA 可以缩短检测窗口期(最少可至22 天)［3］，所以血液中HCV－RNA 的实时荧光RT－PCR 检测，已成为HCV 感染诊断、丙型肝炎患者抗病毒药物治疗疗效监测及血液筛查的重要手段。本研究708 例HCV－Ab 阳性患者中有204 例HCV－ RNA 值为阴性，分析原因如下:①HCV－Ab 假阳性，可能与高球蛋白血症［4］或试剂盒包被抗原不纯［5］等因素导致;②HCV 感染后的病毒血症分为持续、一过和间隙三种时间模式［6］。故HCV－RNA 出现间隙阴性，或是患者处于疾病恢复期，病毒量下降导致HCV－ RNA 阴性，而HCV－Ab 阳性持续存在;③因实时荧光RT－PCR法提取HCV－ RNA 过程较复杂，易被RNA 酶降解，从而影响低载量的HCV－RNA 的检测［7］;④因核酸的稳定性较抗体低，故HCV－RNA 不稳定，导致HCV－RNA 检出值不稳定［8］，影响实验结果;⑤抗病毒治疗导致干扰和抑制了患者体内HCV－RNA 的复制，使得血清中HCV－RNA 的载量低于检测下限［9］。

2)由表1、表2 看出，随着HCV－RNA 值的升高ALT 的平均值未呈比例升高，但ALT 异常人数所占百分比升高，与HCV－RNA 值呈正相关(r=0.837，P＜0.05)，提示肝细胞发生损伤，但不能反映肝脏的损伤程度［10］。但据澳大利亚的一项实验调查研究证明HCV－RNA 和ALT 的水平动态变化在感染的前三至五个月有相互影响作用，在感染的早期治疗有重要的作用［11］。故在以后的研究中需进一步收集临床资料验证丙型肝炎早期感染阶段的指标动态变化的影响意义。

3)急慢性肝病会造成总蛋白偏高，但在708例HCV－Ab 阳性患者中，TP 平均值变化较平稳，且都在正常范围内，TP 异常较集中在HCV－RNA值为103～105范围内，说明TP 异常常伴随低HCV－RNA 含量时存在，可能与丙型肝炎早期肝细胞纤维化、炎症和代谢失常有关。

4)在本研究中，708 例HCV－Ab 阳性患者的HCV－RNA 的含量与平均年龄、性别之间有一定联系。在总体HCV－Ab 阳性患者中，男性患者的比例要大于女性患者，差异无统计学意义(P＞0.05)。据国外报道称女性献血者的丙肝感染率远低于男性献血者［12］，故考虑在以后的研究中增大标本量进行统计研究;40 岁以上患者的比例要大于40 岁以下患者的比例，差异有统计学意义(P＜0.05)。本研究数据表明，丙型肝炎患者以40 岁以上男性居多，可能由于年龄大机体老化导致机体免疫力下降或因40 岁以上男性社会压力大及饮酒、吸烟等不良生活习惯或合并其他疾病并发症致使机体抵抗力下降易受病毒侵害［13］。据美国全国健康和营养检查调查显示:40 岁以上成年人的丙型感染率明显增高，且27.3%的40 岁以上丙肝患者中有过量饮酒史，酒精对于HCV 感染具有乘法效应［14］。

综上所述，RT－ PCR 检测血液中的HCV－RNA 由于其窗口期短、定量监测病毒复制量，较好地应用于HCV 的诊断，药物治疗疗效监测，但不能确切反映病理性肝损伤。ELISA 法检测HCV－Ab由于其操作简单、成本经济、检出率高等特点用于大规模的人群筛查指标，但其窗口期长且易出现假阳性。ALT 和TP 在丙肝感染的过程中一定程度上反映了肝脏的损伤情况，与丙肝的感染阶段有一定关联。因此需结合HCV－RNA、HCV－Ab、ALT和TP 对丙型肝炎患者进行病情的诊断、检测和治疗。本研究中丙型肝炎以40 岁以上男性患者多见，故应增加临床重视度。

［1］付涌水.丙型肝炎病毒感染的流行病学［J］.中国输血杂志，2009，22(11):873－875.

［2］KAWAI S，YOKOSUKA O，KANDA T，et al.Quantification of hepatitis C virus by TaqMan PCR:comparison with HCV Amplicor Monitor assay［J］.Med Virl，1999，58(2):121.

［3］BARTH H，LIANG TJ，BAUMERT TF.Hepatitis C virus entry:molecular biology and clinical implications［J］.Hepatology，2006，44(3):527.

［4］李金明.临床酶免疫测定技术［M］.北京:人民军医出版社，2005:202－206.

［5］WANG TY，KUO HT，CHEN LC，et al.Use of polymerase chain reaction for early detection and management of hepatitis C virus infection after needlestick injury［J］.Ann Clin Lab Sci，2002，32(2):137－141.

［6］秦伟斐，李小红，田耕博，等.TMA 技术检测HCV－RNA 和ELISA 法检测抗－HCV 的比较［J］.国际检验医学杂志，2013，34(11):1 427.

［7］李妙羡，王香玲，吴晓康，等.HCV 抗原检测与HCV－RNA 和HCV 抗体检测的比较研究［J］.现代检验医学杂志，2012，27(4):56.

［8］龙润乡，李华，崔萍芳，等.丙型肝炎病毒3 种标志物的稳定性［J］.中国生物制品学杂志，2009，22(5):468－469.

［9］吴斌，李彩东，段正军，等.实时荧光定量聚合酶链反应在丙型肝炎诊断中的临床应用价值［J］.检验医学与临床，2012，9(11):1 337－1 338.

［10］刘厚德，刘映祥，谢金荣.抗－HCV、HCVRNA 及肝功能联合检测在丙型肝炎病［J］.中国中医药资讯，2012，4(5):120－121.

［11］HAJARIZADEH B，GREBELY J，APPLEGATE T，et al.Dynamics of HCV RNA levels during acute hepatitis C virus infection［J］.Journal of medial virology，2014，86(10):1 722.

［12］PANDIT DP，PAGARO MD，NABAMITA C.Prevalence of antibodies to hepatitis C virus in voluntary blood donors:are women better donors?［J］.Journal of clinical and diagnostic research:2014，8(4):DC20－3.

［13］刘贤华，白晓东，刘元明，等.丙型肝炎病毒核酸定量和抗－HCV 血清学分析的诊断价值［J］.武警医学，2013，24(6):489－490.

［14］LIU G，HOLMBERG SD，KAMILI S，et al.Racial disparities in the proportion of current，unresolved hepatitis C virus infections in the United States，2003－2010［J］.Digestive diseases and sciences 2014，59(8):1 950－1 957.