离子色谱法测定托吡酯中氨基磺酸盐和硫酸盐的含量

刘家胜，孙建合

(鲁南制药集团股份有限公司，国家手性制药工程技术研究中心，山东 临沂 276006)

托吡酯(Topiramate)是一个由氨基磺酸酯取代单糖的新型、安全的广谱抗癫痫药物，具有多重抗癫痫作用机制［1，2］，在临床上已经得到广泛的认可和使用，取得了较好的临床疗效［3，4］。托吡酯由美国强生制药公司(Johnson＆Johnson)开发，于1995年在英国首次上市，美国食品药品监督管理局(FDA)于1996年批准用于治疗成人原发性部分性癫痫，于2000年批准用于儿童癫痫治疗［5］。氨基磺酸盐和硫酸盐为托吡酯原料的无机降解产物，《美国药典》USP35版中采用高效液相色谱联合电导检测器的方法对托吡酯原料中氨基磺酸盐和硫酸盐进行测定，并规定二者的限度均为0.1%。而冯金元等［6］采用间接紫外检测离子色谱法对托吡酯片中氨基磺酸盐和硫酸钠进行了测定，但灵敏度较低。离子色谱法(IC)是一种主要用于阴、阳离子的新型分析技术，具有选择性好［7］，灵敏、快速、简便、环保，近年来也被应用于药物及合成中间体的分析等方面［8］。但国内尚未见到采用离子色谱法测定托吡酯中氨基磺酸盐和硫酸盐的相关报道。本文采用离子色谱法，建立了托吡酯原料中氨基磺酸盐和硫酸盐含量的测定方法，经方法学验证，该法灵敏度高、专属性强、精密度好、回收率高，可准确测定托吡酯原料中氨基磺酸盐和硫酸盐的含量，有效控制托吡酯原料的质量。

1 仪器与试药

1.1 仪器 Dionex ICS－1100型离子色谱仪;DS6电导检测器;Dionex AS－DV自动进样器;Chromeleon色谱工作站;Hamilton PRP－X100阴离子交换色谱柱(4.6mm × 150mm，5μm);Thermo Asrstm 3004mm抑制器;Cascadatm LS MK2超纯水系统(PALL公司);梅特勒XS205DU型电子天平。

1.2 试药 氨基磺酸对照品(含量:99.99%，Alfa Aesar公司);硫酸钠对照品(含量:100%，国家标准物质，国防科技工业应用化学一级计量站);对羟基苯甲酸(优级纯，ACROS公司);硫酸、氢氧化钠均为分析纯，试验用水均为电阻率为18.2 MΩ·cm的超纯水;甲醇(色谱纯，MERCK公司);托吡酯原料药(山东新时代药业有限公司，批号:121202、121203、121204)。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 淋洗液:甲醇－0.8 g·L－1对羟基苯甲酸缓冲液(2.5∶97.5)(用氢氧化钠溶液调 pH值至 10.0 ±0.1);再生液:5mmol·L－1硫酸溶液;检测器温度:30℃;流速:1.5mL·min－1;进样量:100μL。

2.2 标准曲线 精密称取氨基磺酸对照品15.22mg和硫酸钠对照品22.56mg，置50mL量瓶中，加淋洗液溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品储备液;精密量取 20、50、80、100、120、150 和 200μL，分别置10mL量瓶中，用淋洗液稀释至刻度，摇匀，依法测定，以浓度(C)对峰面积(A)进行线性回归，得氨基磺酸盐的回归方程A=0.0987C+0.018，r=0.9993(n=7);得硫酸盐的回归方程A=0.1641C+0.0152，r=0.9994(n=7)。结果表明，氨基磺酸盐(以NH2SO3－计)在 0.61 ～6.09 μg·mL－1浓度范围内线性关系良好;硫酸盐(以SO42－计)在 0.90～9.02 μg·mL－1浓度范围内线性关系良好。

2.3 供试品溶液和对照品溶液的制备 取托吡酯适量，精密称定，用淋洗液溶解并稀释制成每1mL中含托吡酯6.0mg的溶液，作为供试品溶液;另取无水硫酸钠和氨基磺酸对照品各适量，精密称定，用淋洗液溶解并稀释成每1mL中含氨基磺酸3.0 μg、硫酸钠4.5 μg的溶液，作为对照品溶液。

2.4 专属性试验 取空白溶液(淋洗液)、对照品溶液和供试品溶液各100μL，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，色谱图见图1。

图1 托吡酯IC谱图

2.5 重复性试验 取托吡酯(批号:121202)，依法制备供试品溶液6份，分别进样测定，结果氨基磺酸的平均含量为0.0039%，RSD=5.37%;硫酸钠的平均含量为0.0027%，RSD=6.51%。表明本法的重复性良好。

2.6 精密度试验 取托吡酯(批号:121202)，依法制备供试品溶液，重复测定6次，结果氨基磺酸峰面积的 RSD为2.55%，硫酸钠峰面积的 RSD为1.86%，精密度良好。

2.7 加样回收率试验 取已知氨基磺酸盐和硫酸盐含量的托吡酯60mg，精密称定，共6份，分别置10mL量瓶中，再精密加入标准曲线项下的对照品储备液96μL，加淋洗液溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。按“2.3”项下配制对照品溶液。按“2.1”项下的色谱条件进行测定，结果氨基磺酸盐的回收率为97.21% ～106.27%，平均回收率为103.22%，RSD为 6.60%;硫酸盐的回收率为96.88%～105.05%，RSD为5.39%。说明此法测定托吡酯中的氨基磺酸盐和硫酸盐含量回收率良好。

2.8 稳定性试验 将供试品溶液在室温条件下放置，分别于 0、1、2、4、6、8、10、12、24 h 取样测定，记录色谱图。结果氨基磺酸盐峰面 积的 RSD为2.57%，硫酸盐峰面积的 RSD为3.48%，表明供试品溶液在室温下24 h内稳定性良好。

2.9 检测限 取对照品溶液逐级定量稀释，以信噪比(S/N)=3时，氨基磺酸盐的检测限浓度为0.07 μg·mL－1，硫酸盐的检测限浓度为0.06 μg·mL－1。

2.10 样品测定 取3批托吡酯原料药(批号:121202、121203、121204)，精密称定，按“2.3”项下方法制备供试品溶液和对照品溶液，依法测定，结果见表1。

表1 样品测定结果

3 讨论

对淋洗液的pH值进行了考察，结果淋洗液pH=10时，峰形较好，灵敏度较高，通过试验摸索，淋洗液pH值在(10.0±0.1)范围内，均能达到灵敏度要求。为消除溶液干扰，外部连接抑制器，选择硫酸溶液作为再生液，当硫酸浓度为5mmol·L－1，获得理想色谱图，灵敏度高，溶液无干扰。通过试验摸索建立的离子色谱法测定托吡酯原料中氨基磺酸盐和硫酸盐的含量，该方法快速、方便，灵敏度高、重现性好，氨基磺酸盐峰和硫酸盐峰形较好，溶液干扰较小，可准确测定托吡酯原料中氨基磺酸盐和硫酸盐的含量，有效控制托吡酯原料的质量。

［1］赵忠新，黄坚.抗癫痫新药托吡酯临床应用研究进展［J］.中国新药与临床杂志，2001，20(1):65 －67.

［2］王薇薇，吴逊.托吡酯(Topiramate)－一种新型抗癫痫药［J］.中国临床药理学杂志，1999，15(3):212 －215.

［3］刘凤英，王学峰.托吡酯单药治疗新诊断的癫痫［J］.中国新药杂志，2007，16(2):107 －111.

［4］周克英，张蔚，陈霆，等.托吡酯长期治疗癫痫的耐受性与安全性［J］.实用儿科临床杂志，2004，19(7):579－581.

［5］郁金泰，欧江荣，谭兰.托吡酯治疗癫痈的现况及前景［J］.中国新药与临床杂志，2008，27(10):791 －794.

［6］冯金元.间接紫外检测离子色谱法测定托吡酯片的无机降解产物［J］.中国药业，2012，21(14):53－55.

［7］吴燕，米亚娴.离子色谱法及其在药物分析中的应用［J］.天津药学，2011，23(4):50 －53.

［8］牟世芬，刘克纳.离子色谱方法及应用［M］.北京:化学工业出版社，2000:1－3.