《中国药典》2010年版一部炮姜质量控制标准的改进

2015-10-19 02:17韩燕全李钰馨汪永忠夏伦祝
中成药 2015年1期
关键词:中国药典姜辣素干姜

韩燕全, 洪 燕, 李 翔, 李钰馨,, 汪永忠, 夏伦祝*

(1.安徽中医药大学第一附属医院,国家中医药管理局中药制剂三级实验室,安徽 合肥 230038;2.安徽中医药大学,安徽 合肥 230031)

《中国药典》2010年版一部炮姜质量控制标准的改进

韩燕全1,洪 燕2,李 翔1,李钰馨1,2,汪永忠1,夏伦祝1*

(1.安徽中医药大学第一附属医院,国家中医药管理局中药制剂三级实验室,安徽合肥230038;2.安徽中医药大学,安徽合肥230031)

目的 探讨《中国药典》2010年版中炮姜薄层鉴别和成分定量测定标准改进的可行性。方法 姜酮和6-姜辣素薄层鉴别以硅胶G薄层板为固定相,以石油醚-三氯甲烷-乙酸乙酯系统为展开剂;姜酮和6-姜辣素HPLC测定的色谱柱为Waters Symmetry C18(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为乙腈-0.1%磷酸,梯度洗脱,检测波长280 nm,体积流量1.0 mL/min。结果 炮姜中姜酮和6-姜辣素的薄层鉴别斑点清晰,HPLC法可同时测定姜酮和6-姜辣素。与自制炮姜饮片相比,市售14份饮片中姜酮和6-姜辣素的量差异明显。结论 建议炮姜质量控制项下增加姜酮的定量测定,可控制以达不到含量限度的干姜仅轻微炮制即可满足炮姜的现有质量标准。

中国药典;炮姜;姜酮;质量标准

炮姜(Paojiang)是姜科植物姜Zingiber officinale Rosc.干燥根茎经砂烫而成的炮制品。《中国药典》2010年版炮姜项下质量控制以6-姜辣素(6-姜酚)的薄层鉴别和定量测定为指标,定量测定限度为含6-姜辣素不得少于0.30%[1]。本课题组前期研究和文献报道均表明,干姜在炮制成炮姜后6-姜辣素量会降低15%~42%左右[2],且在炮制过程中会有新成分姜酮的产生[3-4]。笔者认为此质量控制标准存有如下问题:只对炮制过程中会降低的6-姜辣素量作了最低限度规定,忽视了对炮制工艺规范的限定要求,如选择质量稍次的干姜饮片,其虽达不到干姜的含量限度要求,但轻微炮制即可满足炮姜的质量标准,如此炮制过程的重要性就被忽略了。鉴于炮姜质量控制存在的上述问题和课题组前期研究结果,本实验增加了姜酮的薄层鉴别并改进了炮姜的薄层鉴别条件;同时,建立了HPLC同时测定姜酮和6-姜辣素的测定方法,并对14份不同产地的市售炮姜和4份实验室自制样品进行了测定,以期能为进一步完善《中国药典》2010年版一部中炮姜的质量控制方法提供参考。

1 仪器与材料

1.1仪器 超高效液相色谱仪(美国Waters Acquity H-C1ass UPLC),包括四元梯度泵自动进样器、柱温箱、二极管阵列检测器以及Empower 2工作站;KQ3200DB型超声仪(江苏昆山超声仪器有限公司);HFB-200型高速中药粉碎机(吉首市中州中药机械厂);炒药设备(自制)。

1.2药品与试剂 乙腈为色谱纯;乙醇、磷酸等试剂均为分析纯,屈臣氏公司蒸馏水;0.2μm微孔滤膜(上海陆纳生物科技有限公司)。姜酮(批号122-485)、6-姜辣素(批号23513-146)对照品由上海鼎瑞化工提供,经1H-NMR、13C-NMR、MS、IR和UV等光谱检测确认其结构。生姜购于合肥市蜀山区三里庵菜市场,经安徽中医药大学第一附属医院韩燕全博士鉴定均为姜科植物姜Zingiber officinalies Rose.的干燥根茎,晾干后得到干姜药材;自制炮姜由课题组按照《中国药典》2010年版一部附录ⅡD项下砂烫法要求,在砂温度200℃、砂烫6 min左右炮制得到;14份市售炮姜药材购自全国不同地区药店;干姜及炮姜样品信息见表1。

表1 干姜及炮姜样品来源信息Tab.1 Origin for nineteen batches of dried ginger and Paojiang

2 方法与结果

2.1姜酮和6-姜辣素薄层色谱鉴别[5-6]取样品粉末2 g,加乙酸乙酯20 mL,超声处理10 min,滤过,取滤液作为供试品溶液。另取姜酮对照品,加乙酸乙酯制成每1 mL含0.5 mg的溶液,作为对照品溶液。照薄层色谱法(附录ⅥB)试验,吸取上述两种溶液各6μL,分别点于同一硅胶G薄层板上,以石油醚(60~90℃)-三氯甲烷-乙酸乙酯(7∶3∶2)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以香草醛硫酸试液,在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点,见图1。

2.2HPLC法测定姜酮和6-姜辣素

2.2.1对照品溶液的制备 分别称取一定量姜酮、6-姜辣素对照品,置量瓶中,分别配制成0.711 mg/mL和0.701 mg/mL的对照品贮备液;分别取姜酮和对照品贮备液0.25、0.5、1.0、2.0、4.0 mL和6-姜辣素1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL置于10 mL量瓶中,加乙醇定容至刻度,得5份不同质量浓度的姜酮和6-姜辣素的混合对照品溶液。

2.2.2供试品溶液的制备 分别精密称取各干姜、炮姜0.5 g,置10 mL量瓶中,加90%乙醇定容至刻度,超声(150 W,40 Hz)40 min,放冷,称量,加乙醇补足失质量,摇匀,0.2μm滤膜滤过,取续滤液,即得。

图1 对照品和样品的薄层色谱图Fig.1 TLC chrom atogram of reference substance and samp Ies

2.2.3色谱条件[7-9]Waters Symmetry C18色谱柱(4.6 mm×250 mm);流动相为乙腈(A)-0.1%磷酸(B),梯度洗脱(0~10 min,30%A;10~20 min,30%A;20~25 min,50%A;25~27 min,30%A;27~30 min,30%A);检测波长280 nm;体积流量1.0 mL/min;柱温为室温。

2.2.4系统适用性试验 按照“2.2.3”项下色谱条件,分别取对照品混合溶液、干姜供试品溶液和炮姜供试品溶液各10μL进样。结果姜酮和6-姜酚的色谱峰峰形对称因子均在0.95~1.05之间,分离完全,与其他色谱峰的分离度均大于1.5;姜酮和6-姜酚的理论塔板数分别为10 646和13 811。姜酮、6-姜辣素混合对照品,干姜,市售炮姜,自制炮姜的HPLC色谱图见图2。

2.2.5标准曲线的制备 取“2.2.1”项下不同质量浓度混合对照品溶液各10μL,自动进样,测定峰面积,以峰面积(Y)为纵坐标,姜酮、6-姜辣素质量浓度(Ⅹ)为横坐标,绘制标准曲线,计算回归方程,结果见表2。

图2 混合对照品溶液(A)、干姜样品(B)、市售炮姜样品(C)和自制炮姜样品(D)的HPLC色谱图Fig.2 HPLC chromatograms of m ixed reference substances(A),Ganjiang sam p Ie(B),commerciaI Paojiangsam p Ie(C)and hom emade Paojiang sam p Ie(D)

表2 姜酮、6-姜辣素线性回归方程及相关系数Tab.2 Linear regression equation and correIation coefficient of zingerone and 6-gingeroI

2.2.6稳定性试验 取17号炮姜样品,按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液,分别于0、4、8、12、16、24 h进样并测定峰面积,结果姜酮和6-姜辣素的RSD(n=6)分别为0.8%和1.5%,结果表明该样品稳定性良好。

2.2.7精密度试验 精密吸取混合对照品溶液10μL,自动进样6次,测定峰面积,计算得姜酮与6-姜辣素的RSD(n=6)分别为0.5%和0.4%,表明仪器精密度良好。

2.2.8重复性试验 取16号炮姜样品,按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液,精密吸取10μL,自动进样6次,测定峰面积并计算,姜酮与6-姜辣素的RSD(n=6)分别为2.4%和2.2%,表明该方法重复性良好。

2.2.9加样回收试验 取已知含有量18号炮姜(姜酮、6-姜辣素分别为1.378、3.577mg/g)样品6份,每份0.21g左右,精密称定后分别加入对照品姜酮0.35mg和6-姜辣素0.76mg,按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液,按“2.2.3”项下色谱条件进行测定,每次进样10μL计算回收率,见表3。

表3 姜酮、6-姜辣素的加样回收试验结果Tab.3 ResuItsofrecoverytestsforzingeroneand6-gingeroI

2.2.10样品测定 取表1中各干、炮姜0.5g,按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液,在“2.2.3”项下色谱条件进行进样,每个样品进样2次,测定峰面积并计算,见表4。

表4 样品中姜酮和6-姜辣素的测定结果Tab.4 DeterminationresuItsofzingeroneand6-gingeroIfromsampIes

结果表明:市售14份炮姜中,6-姜辣素含有量符合《中国药典》2010年版项下规定的0.30%标准的仅为5份,而姜酮含有量差异更加明显,提示炮姜的质量控制标准制定过程中需要考虑炮制过程的重要性,笔者建议炮姜质量控制项下增加姜酮的定量测定,可促使生产者使用符合标准的干姜生产炮姜。

3 讨论

中药炮制是体现中医辩证用药特点的主要手段之一,而中药的功效与其炮制方法有极为密切的关系。因此,在制定炮制品质量标准时如能选择可体现炮制过程变化的成分进行质量控制,将对了解炮制品是否“依法炮制”具有十分重要的意义。文献和课题组前期研究均表明,干姜在炮制为炮姜过程中会产生新生成分——姜酮,药理学研究表明,姜酮具有一定的抗炎、抗氧化、抗菌等活性[10-11];课题组前期已对姜酮在炮制过程产生的条件进行了考察,表明姜酮的含有量受炮制的温度、时间影响十分明显。姜辣素类成分是姜中的主要活性成分,包括6-、8-、10-、12-姜酚等10余种,其中6-姜辣素(姜酚)含有量最高,本次实验结果表明市售炮姜样品中6-姜辣素能达到《中国药典》2010年版0.30%标准的样品数量不足一半,同时姜酮含有量又偏低提示以低质量的干姜药材炮制炮姜现象存在。根据实验结果,笔者建议在测定6-姜辣素的基础上,增加姜酮定量测定来控制炮姜的质量,这对于控制炮姜的炮制过程具有一定的科学性。

在《中国药典》2010版炮姜薄层板鉴别基础上,优化了展开条件,增加了姜酮的薄层鉴别方法,炮姜中姜酮和6-姜辣素的薄层斑点清晰,可实现定性鉴别。成分定量测定实验过程中分别考察了乙腈-水、甲醇-水、乙腈-0.1%磷酸和甲醇-0.1%磷酸等流动相系统,结果以乙腈-0.1%磷酸作流动相较佳;实验分别考察了Agi1ent TC-C18(4.6 mm×250 mm)、大连依利特Kromasi1 C18(4.6 mm×250 mm)、大连日普利Kromasi1 C18(4.6 mm×250 mm)和Waters Symmetry C18(4.6 mm×250 mm)4种不同品牌的色谱柱,结果以Waters Symmetry C18色谱柱对两种成分分离度、保留时间等方面较佳;同时优化了体积流量、进样量等实验因素,最终建立了HPLC法同时定量测定炮姜中姜酮和6-姜辣素的方法。实验建立的姜酮和6-姜辣素的薄层鉴别和定量检测方法简单、稳定、重复性好,可为炮姜的质量控制改进和进一步开发提供依据。

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Im provement in quaIity controI of Zingiberis Rhizoma praeparatum in Chinese Pharmacopoeia(2010 Edition)

HAN Yan-quan1, HONG Yan2, LIXiang1, LIYu-xin1,2, WANG Yong-zhong1, XIA Lun-zhu1*
(1.The First Affiliated Hospital,Anhui University of Chinese Medicine,Grade3 Laboratory of TCM Preparation,State Administration of AnhuiUniversity of Chinese Medicine,Hefei230031,China 2.Anhui University of Chinese Medicine,Hefei230038,China)

AIM To exp1ore the feasibi1ity of improving TLC identification and content determination of Paojiang(Zingiberis Rhizoma praeparatum)in Chinese Pharmacopoeia(2010 Edition).METHODS TLCmethod for zingerone and 6-gingero1adopted si1ica ge1G p1ate as the stationary phase,petro1eum ether-ch1oroform-ethy1acetate system as deve1oper,and their HPLCmethod emp1oyed Waters Symmetry C18(4.6 mm×250 mm,5μm)as co1umn,acetonitri1e-0.1%phosphoric acid asmobi1e phasewith 1.0mL/min vo1umn speed at280 nm detection wave1ength in a gradient e1utionmode.RESULTS The TLC spots of zingerone and 6-gingero1were c1ear,HPLC cou1d simu1taneous1y determine the above measured constituents.As compared with homemade,the contents of zingerone and 6-gingero1 from fourteen commercia1Paojiang made marked1y difference.CONCLUSION It is suggested that the increase in the determination of zingerone cou1d avoid using the poor dried ginger by simp1e processing to satisfy the current qua1ity contro1of Paojiang.

Chinese Pharmacopoeia;Paojiang(Zingiberis Rhizoma praeparatum);zingerone;qua1ity contro1 standardization

R283

A

1001-1528(2015)01-0160-05

10.3969/j.issn.1001-1528.2015.01.034

2014-05-29

国家自然科学基金项目(81102811);安徽省自然科学基金项目(10040606Q40);国家中医药重点学科临床中药学建设项目(国中医药人教发[2012]32号)

韩燕全,男,副主任中药师,研究方向:中药炮制与质量控制。E-mai1:hyquan2003@163.com

夏伦祝,主任药师,教授,硕士生导师,研究方向:中药制剂和临床药学。E-mai1:xia1unzhu@sohu.com

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