HPLC法测定乳泉颗粒中阿魏酸含量及不同厂家产品含量的研究

段广勋 王军花

摘要：目的： 建立乳泉颗粒中阿魏酸含量测定方法。方法： 采用lichrospher C18柱（5μm，4.6mm×250mm），流动相为甲醇-0.085%磷酸（28：72）；流速为1.0mL/min；检测波长为321nm。结果： 阿魏酸在1.265×10-5～2.024×10-4mg范围内呈良好的线性关系，r=0.9993，平均样品加样回收率为96.97%。结论： 该方法简便可靠，重复性好，可用于乳泉颗粒的质量控制。

关键词：乳泉颗粒；高效液相色谱；阿魏酸；含量测定

乳泉颗粒是妇科用中成药，其处方由王不留行、穿山甲（炙）、天花粉、当归、漏芦、甘草（炙）组成，具有通经、活血、下乳的功效，适用中医肝郁气滞证型产后缺乳患者的治疗[1-2]。其现行质量标准为卫生部《部颁标准》1993版，质量控制项仅有理化鉴别，虽有乳泉颗粒中阿魏酸含量测定的报道[3-4]，但尚未收录标准，本文为了更好地控制药品质量[5]，采用HPLC法对乳泉颗粒中阿魏酸含量测定方法进行研究并对不同厂家产品含量进行了测定。

1仪器与材料

1.1仪器 Agilent 1260（美国安捷伦）；电子分析天平（梅特勒一托利多仪器上海有限公司，型号：XP6）；

1.2材料和试剂 乳泉颗粒（南京中山制药有限公司，批号：121201、121202、121203、130601、130602、130603；上海悦盛芜湖药业有限公司，批号：120704、130101、130102；河南天方药业中药有限公司，批号：130401、130402、130403；辽宁康博士制药有限公司，批号：20130302、20130303、20130304）。阴性样品（自制），阿魏酸对照品（中国药品生物制品鉴定所，批号110773-200611），甲醇（HPLC），其他试剂均为分析纯。

2方法与结果

2.1色谱条件 色谱柱：lichrospher C18（5μm，4.6mm×250mm，江苏汉邦）；流动相：甲醇-0.085%磷酸（28：72）；流速：1.0mL/min；检测波长：321nm；柱温35℃；进样量10μL。理论板数按阿魏酸峰计算应不低于3500。

2.2对照品溶液的制备 精密称取阿魏酸对照品2.53mg，置100mL棕色量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得，作对照品储备液（避光操作）。

2.3供试品溶液的制备[3-4] 取本品15g，碾细，取2g，精密称定，加稀盐酸2.5mL润湿，加水30mL，使溶解，用乙醚-乙醇（27：3）混合溶液萃取4次，每次20mL，合并萃取液，用无水硫酸钠脱水，60℃蒸干，残渣加甲醇溶解，转移至5mL棕色容量瓶中，定容至刻度，即得（避光操作）。

2.4专属性试验 取缺当归阴性样品，照2.3项下方法得阴性对照溶液。分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各10μL，照2.1项下色谱条件，注入液相色谱仪测定。结果，见图1。

该色谱条件下，色谱峰分离较好。阴性对照色谱图中在待测成分保留时间处无杂质峰出现，表明本法具有良好的专属性。

2.5线性关系考察 精密吸取对照品储备液0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、8.0mL，分别置10mL容量瓶中，加甲醇定容，依次稀释配制成1.265、2.53、5.06、7.59、10.12、12.65、20.24μg/mL的溶液，精密吸取10μL，照2.1項下色谱条件，注入液相色谱仪测定。以峰面积A为纵坐标，阿魏酸含量C为横坐标，作标准曲线，线性方程为A=58.882C-14.422，r=0.9993。结果表明，阿魏酸在1.265×10-5～2.024×10-4mg间呈良好的线性关系。结果见表1。

表1 线性关系考察中测定结果

2.6精密度试验 吸取同一供试品溶液10μL，重复进样6次，测定阿魏酸的峰面积。

2.7重复性试验 取同一批号样品平行制备6份样品，照本文所述测定方法测定，计算阿魏酸平均含量为0.2698mg/袋，RSD=1.86%（M=6）。

2.8稳定性试验 取同一供试品溶液，分别在0，2，4，6，8h分别进样，结果表明样品溶液在8h内稳定。

2.9加样回收率实验 取已知含量的供试品1g，精密称定，置150mL磨口锥形瓶中，分别精密加入阿魏酸对照品溶液（5.06μg/mL）2.1、3.5、4.9mL，照2.3项下供试品溶液制备方法分别平行制备3份，照2.1项下色谱条件测定，计算加样回收率。

2.2.10样品测定 分别取不同厂家不同批号样品，碾细后取2g，精密称定，照2.1项下色谱条件，依法测定阿魏酸含量，结果见表2。

表2 不同厂家不同批号样品含量测定结果

3讨论

3.1通过二极管阵列检测器对阿魏酸对照品及样品峰进行全波长扫描， 在321nm波长处均有最大吸收，故将321nm作为检测波长。

3.2文献[6]对阿魏酸测定方法进行了探究，认为在测定过程中应采用避光，控制温度等进行操作，故本试验均低温、避光操作。

3.3在稳定性考察8h时，RSD为1.66%；10h时， RSD为5.49%，说明阿魏酸在10h时有分解反应，试验结果表明阿魏酸在8h内稳定。

3.4 国内有15家药企拥有乳泉颗粒批准文号，目前市场收集到的只有4家药企的产品，样品颜色、阿魏酸含量差别较大，检测结果表明，随着颗粒颜色的加深，阿魏酸含量逐渐升高。颜色、含量差异较大主要因为该制剂尚无阿魏酸含测标准，无法进行定量分析，导致不同厂家阿魏酸含量差别较大，且与不同厂家原药材、药材转移率、辅料差异等有关。故本试验为提高乳泉颗粒产品质量提供了参考依据。参考试验结果，结合中国药典中当归含量测定项下标准[7]，通过折算每袋乳泉颗粒中所含当归药材的量，建议暂定本品每袋15g中含当归以阿魏酸（C10H10O4）计不少于0.12mg。

3.5现行的乳泉颗粒标准尚无薄层鉴别，另其君药为王不留行，应当建立王不留行相关物质含测方法，故该品种的质量标准尚有待进一步研究。

参考文献：

[1] 卫生部.卫生部药品标准·中药成方制剂[S].第7册.1993：98.

[2] 宋健，濮存海，孙波.乳泉颗粒处方考证及研究进展[J].中国现代中药，2013，15（3）：226-229.

[3] 杨霞，李向阳，李振国.RP-HPLC法测定乳泉颗粒中阿魏酸的含量[J].中医研究.2006，19（7）：21-23.

[4] 陈涛，郭韶莉.HPLC法测定乳泉颗粒中阿魏酸的含量[J].天津药学，2008，20（1）：14-15.

[5] 国家药典委员会.中国药典，Ι部[S].北京：中国医药科技出版社.2010：附录130-131.

[6] 闵凡新，李文玉，王彦为，等.HPLC法测定当归中阿魏酸的含量[J].中草药，2004，35（3）：332-333.

[7] 国家药典委员会.中国药典，Ι部[S].北京：中国医药科技出版社.2010：124.