HPLC-ELSD法测定催乳颗粒中黄芪甲苷的含量

张祖亮　邓资源

（六安市食品药品检验中心，安徽 六安 237000）

HPLC-ELSD法测定催乳颗粒中黄芪甲苷的含量

张祖亮邓资源

（六安市食品药品检验中心，安徽 六安 237000）

目的建立以高效液相色谱-蒸发光散射检测器（HPLC-ELSD）测定催乳颗粒中黄芪甲苷含量的方法。方法用ZORBAX Eclipse XDB-C18色谱柱，流动相为乙腈-水（33∶67），流速1.0 mL/min。结果黄芪甲苷的线性范围为0.1385～2.77 μg（r=0.9997），平均回收率为98.0%，RSD为1.5%（n=6）。结论该方法专属性强、操作简便。

黄芪甲苷；催乳颗粒；高效液相-蒸发光散射法

催乳颗粒是由黄芪、党参、白术、当归等九味中药组成的复方制剂，具有益气养血，通络下乳的功效，主要用于产后气血虚弱所致的缺乳，少乳。现行标准［1］采用薄层扫描法测定催乳颗粒中黄芪甲苷的含量，操作繁琐，重现性差。笔者参考文献［2-6］，建立HPLC-ELSD法测定黄芪甲苷的含量，结果显示专属性强、操作简便。

1　仪器与试药

图1　色谱图（a对照品；b供试品；c阴性对照；1.黄芪甲苷）

表1　加样回收率测定结果（n=6）

表2　供试品测定结果（n=3）

Waters e2695高效液相色谱仪；2424蒸发光散射检测器；Empower化学工作站；ZORBAX Eclipse XDB-C18（150 mm×4.6 mm，5 μm）色谱柱；AL204电子天平（Mettler Toledo公司，感量0.01 mg）；MS105DU电子天平（Mettler Toledo公司，感量0.1 mg）。黄芪甲苷对照品（批号：110781-200613）为中国药品生物制品检定研究院提供，乙腈为色谱纯，实验用水为重蒸水，其他试剂均为分析纯，催乳颗粒为市场销售品（批号为120517、120521、120607）。

2　实验方法与结果

2.1色谱条件。色谱柱：ZORBAX Eclipse XDB-C18（150 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：乙腈-水（33∶67）；流速为l mL/min；柱温为30 ℃；检测器参数：漂移管温度为75 ℃，雾化器温度为48 ℃，气体压力为25 psi。

2.2对照品溶液的制备：精密称取黄芪甲苷13.85 mg，置于100 mL容量瓶中，加甲醇溶解，并稀释至刻度，摇匀，即得黄芪甲苷对照品溶液（0.1385 mg/mL）。

2.3供试品溶液的制备：取本品约10 g，研细，置具塞锥形瓶内，加50 mL甲醇，精密称定，超声30 min（功率：300 W，频率：50 kHz），放冷至室温，称定重量，用甲醇补足因超声减失的重量，摇匀，滤过，蒸干；残渣加入20 mL水，微热溶解，用水饱和正丁醇溶液萃取4次，每次用40 mL，合并正丁醇提取液，再加氨试液洗涤2次，每次用40 mL，保留洗涤后的正丁醇液，并将其置于水浴上蒸干；残渣加入适量的甲醇溶解，然后转移至5 mL容量瓶中，稀释至刻度，摇匀，滤过，即得。

2.4阴性对照溶液的制备：取缺黄芪以外的药材按处方要求制备样品，按2.3的制备方法，同法制成阴性对照溶液。

2.5专属性实验：将以上三种溶液按上述色谱条件注入液相色谱仪，记录色谱图，结果供试品与对照品在相同保留时间的位置上有色谱峰，阴性对照则无色谱峰。说明在此保留时间其他成分对其无干扰。具体见图1。

2.6线性关系的考察：精密量取对照品溶液1、2、5、10、20 μL，依次进样，进行测定，记录色谱峰面积，以黄芪甲苷进样量的自然对数值为横坐标（X），以峰面积自然对数值为纵坐标（Y），进行线性回归，计算回归方程为Y=2.0242X+6.9902，r=0.9997，结果表明黄芪甲苷在0.1385～2.77 μg范围内具有良好的线性关系。

2.7精密度试验：重复对黄芪甲苷对照品溶液进样5次，每次10 μL，测定其峰面积，RSD为0.49%，表明精密度良好。

2.8稳定性试验：精密量取供试品溶液，每0、2、4、6、8、12 h，按色谱条件测定。记录测定结果，黄芪甲苷峰面积RSD为1.1%（n=6），表明在12 h之内测定供试品稳定。

2.9重复性试验：精密称取同一批号供试品（120508）6份，按供试品溶液的制备项下方法制备，测定峰面积，代入线性方程，得平均含量为1.41毫克/袋（n=6），RSD=0.90%；说明该方法重复性良好。

2.10加样回收试验：精密称取同批已知含量的供试品（批号为120517，含量为0.0705 mg/g）6份，分别精密加入黄芪甲苷对照品溶液2.5 mL，按供试品测定方法制备成6份溶液，测定含量，计算其回收率，具体见表1，黄芪甲苷的平均回收率为98.0%，RSD为1.5%。

2.11供试品测定：取制备好的供试品溶液和对照品溶液，其中对照品分别进样10 μL和20 μL，供试品进样20 μL，进行测定，计算含量，结果见表2。

3　讨　论

3.1用紫外检测器检测黄芪甲苷时，由于黄芪甲苷紫外吸收在近末端，干扰较大，蒸发光散射检测器是一种通用性检测器，可以消除紫外末端吸收引起的干扰，是检测黄芪甲苷的较好方法。

3.2原标准中黄芪甲苷测定采用薄层扫描法，由于提取时前处理步骤多，同时需要对薄层板进行显色，重现性差，误差也较大，本实验采用HPLC-ELSD法测定黄芪甲苷含量，操作简便，专属性强，结果更准确。

［1］国家食品药品监督管理局.国家药品标准WS3-413（Z-085）-2003（Z）［S］.

［2］国家药典委员会编.中国药典2010年版一部［S］.北京:中国医药科技出版社，2010:283.

［3］周洪波，葛晓明，房志坚，等.HPLC-ELSD法测定玉屏风颗粒中黄芪甲苷的含量［J］.中药材，2007，30（6）:739-740.

［4］孙健，刘泓，范斌.HPLC-ELSD法测定祝艾胶囊康中黄芪甲苷的含量［J］.中国实验方剂学杂志，2010，16（4）:60-61.

［5］刘惠珍.HPLC-ELSD法测定胃疡灵颗粒中黄芪甲苷的含量［J］.中国药师，2009，12（1）:79-80.

［6］江霞，刘纪青.HPLC法测定竺黄喷雾剂中黄芪甲苷的含量［J］.中国药房，2013，24（23）:2170-2171.

Determination of Astragaloside in Cuiru Granules by HPLC-ELSD Method

ZHANG Zu-liang，DENG Zi-yuan
（Liu'an Food and Drug Inspection Center，Liu'an 237000，China）

Objective To establish a HPLC-ELSD method for the determinatione of astragaloside in Cuiru Granules. Methods ZORBAX Eclipse XDB-C18 column was used with acetonitrile-water （33∶67） as mobile phase. The flow rate was 1.0 mL/min. Results The linear range of astragaloside was 0.1385-2.77 μg （r=0.9997）. The average recovery was 98.0% with RSD of 1.5% （n=6）. Conclusion The method is specific and simple.

Cuiru Granules；Astragaloside；HPLC-ELSD

R9

B

1671-8194（2015）22-0031-02