宫颈上皮内瘤变与宫颈鳞癌中NF-кBp50的表达及意义

李国霞　朱炜　陈新妹

宫颈上皮内瘤变与宫颈鳞癌中NF-кBp50的表达及意义

李国霞朱炜陈新妹

目的 观察宫颈上皮内瘤变（CIN）与宫颈鳞癌中NF-кBp50的表达，探讨NF-кBp50与宫颈鳞癌发生的关系。方法 采用免疫组化S-P法检测宫颈鳞癌38例、CIN 63例及正常宫颈组织20例中NF-кBp50的表达并比较其差异。结果 NF-кBp50在正常宫颈组织、CIN及宫颈鳞癌中的阳性表达率分别为5%、65.07%与86.84%（P＜0.05）； 在CINⅠ、CINⅡ及CINⅢ中NF-кBp50的阳性表达率分别为30.76%、65.38%与83.33%（P＜0.05）；在Ⅰ期、Ⅱ期及Ⅲ期宫颈鳞癌中NF-кBp50的阳性表达率分别为55.56%、95.00%及100.00%（P＜0. 05）；在高、中、低分化的宫颈鳞癌中NF-кBp50的阳性表达率分别为81.82%、84.62%及92.86%（＞0.05）。结论 NF-кBp50的表达上调与CIN及宫颈鳞癌的发生与进展相关。NF-кBp50的阳性表达是宫颈癌变的早期事件，可能作为宫颈鳞癌前病变诊断的生物学标志。

宫颈上皮内瘤变 宫颈鳞癌 核转录因子NF-кBp50 免疫组化

宫颈癌是危害妇女健康常见的恶性肿瘤，其发病率日益增高，且发病低龄化趋势明显，严重危及女性健康。宫颈上皮内瘤变及宫颈鳞癌的发生与高危型人乳头瘤病毒（HR-HPV）感染相关。恶性肿瘤的发生与调控细胞增殖与凋亡的各种细胞因子相关。作者通过观察细胞增殖与凋亡调控相关因子NF-кBp50在宫颈上皮内瘤变（CIN）与宫颈鳞癌的表达，探讨NF-кBp50与宫颈上皮内瘤变与宫颈鳞癌发生的关系。

1　临床资料

1.1一般资料 2013年6月至2014年11月本院收治的CIN患者63例，CINⅠ13例、CINⅡ26例、CINⅢ24例。年龄36～49岁，平均年龄（43.1±1.20）岁。选取宫颈鳞癌患者38例，根据2009年FIGO分期，Ⅰ期9例、Ⅱ期20例、Ⅲ期9例；其中高分化鳞癌10例，中分化鳞癌13例、低分化鳞癌15例。年龄46～58岁，平均年龄（51. 3±1.04）岁。另选取同期20例因子宫肌瘤行全子宫切除术后病理检查正常的宫颈组织为对照组，年龄42～48岁，平均年龄（45.6±1.30）岁。

1.2方法 通过手术及宫颈锥切获取标本，标本获取后经10%甲醛溶液固定并石蜡包埋，每个石蜡块切片2张，每张切片厚4μm，一张切片经HE染色后由两位病理科医生做病理学诊断；另一张采用链菌素亲生物素-过氧化物酶法（S- P法）检测标本中NF-кBp50的表达。兔抗人NF-кBp50单克隆抗体购自福州迈新生物技术有限公司，操作过程严格按照说明书进行。用乳腺癌组织作阳性对照，用PBS代替一抗作阴性对照。

1.3结果判断 NF-кBp50的阳性表达呈现棕黄色颗粒，定位于细胞浆与细胞核中。通过400倍显微镜观察，每张切片随机选取10个不同视野，每个视野计数100个细胞，分别记录阳性细胞的百分比（%）并计算其均值，按染色范围分4级：切片中阳性细胞＜10%为阴性（-）；10%～49%为弱阳性（+）；50%～89%为阳性（++）；＞90%为强阳性（+++）。本文中（+～+++）列为阳性表达；而（-）为无表达，列为阴性表达。

1.4统计学分析 采用SPSS13.0统计软件。组间比较采用方差分析，以 P＜0.05为差异有统计学意义。

2　结果

2.1NF-кBp50在三组中的阳性表达比较 见表1。

表1　NF-кBp50在三组中的阳性表达比较

2.2NF-кBp50在不同程度宫颈上皮内瘤变中阳性表达比较 见表2。

表2　NF-кBp50在不同宫颈上皮内瘤变中的阳性表达比较

2.3NF-кBp50在不同分期宫颈鳞癌中的阳性表达比较 见表3。

表3　NF-кBp50在不同分期宫颈鳞癌中的阳性表达比较

2.4NF-кBp50在不同分化宫颈鳞癌中的阳性表达比较 见表3。

表3　NF-кBp50在不同分化宫颈鳞癌中的阳性表达比较

3　讨论

宫颈上皮内瘤变是宫颈鳞癌发生的前驱，而宫颈鳞癌是目前女性常见的恶性肿瘤，高危型人乳头病毒（HR-HPV）的持续感染是其发生的主要因素。恶性肿瘤的发生与发展、侵袭与转移等过程受各种细胞因子的调控以及与细胞因子的异常表达相关。NF-кB是一种与细胞增殖及凋亡密切相关的核转录因子，通常情况下NF-кB与其抑制蛋白IкB 结合，以非活性状态贮存于细胞质中，当受到如病毒感染，炎症反应等刺激时，NF-кB被激活并转移至细胞核中，参与调控细胞增殖、分化及细胞凋亡等过程。NF-кB家族有5个成员，根据C末端序列的不同分为两类：一类为P65（RelA）、RelB和c-Rel；另一类为P50和P52。在NF-кB家族中，其功能活性的主要形式是p65/p50的异二聚体［1］。

本资料显示，随宫颈病变的逐渐加重，NF-кBp50的表达逐渐上调，提示NF-кBp50参与CIN及宫颈鳞癌的发生机制。HR-HPV的持续感染与宫颈鳞癌的发生相关，当HR-HPV感染后可导致宫颈局部炎性因子的产生及免疫功能改变，刺激NF-кBp50的异常活化，而活化后的NF-kBp50诱发宫颈细胞周期调控相关蛋白，如细胞周期依赖性激酶（CDK）、细胞周期素D1（Cyclin D1）和c-myc等的表达上调，促进细胞由G1/G0期向S期加速转化，导致细胞无限制增殖［2，3］。此外，NF-кBp50通过诱导凋亡抑制基因c-IAP-1和 c-IAP-2、TRAF1、TRAF2、Bcl-2、P53等的活化而抑制细胞的凋亡［4］，两者协同作用促使宫颈细胞异常增殖，最终导致CIN及宫颈鳞癌的形成。Nair［5］等通过对正常宫颈组织、低度与高度鳞状上皮内瘤变及宫颈鳞癌中NF-кBp50结合能力的研究显示，在正常宫颈及高度鳞状上皮内瘤变组织的细胞浆中可见大量p50/p65异二聚体表达，而低度鳞状上皮瘤变组织中p50/ p65异二聚体则表达在细胞核内，且IкB表达下降，在宫颈鳞癌组织中几乎见不到IкB的表达，表明NF-кBp50的活化在宫颈鳞癌发生与发展的过程中起着重要的作用。Kim［6］研究认为，用NF-кBp50抑制剂可以有效促进宫颈细胞的凋亡，从另一侧面表明NF-kBp50在宫颈鳞癌发生与发展中的作用。

1Maeda S. Omata M. Inflammation and cancer： role of nuclear factorkappaB activation.Cancer Sci， 2008，99（5）：836～842.

2Amiri KI， Richmond A. Role of nuclear factor kappa B in melanoma. Cancer Metastasis Rev， 2005， 24（4）： 301～313.

3Kojima M， Morisaki T ， Sasaki N， et al . In creased nuclear factor-kB activation in human colorectal carcinoma and its correlation with tumor progression. Ant icancer Res， 2004， 24（2）： 675～681.

4Ryan KM， Ernst MK， Rice NR， et al. Role of NF-KappaB in P53-mediated programmed cell death . Nature， 2000， 404（6780）：892～897.

5Nair A， Venkatraman M， et al. NF-kappaB is constitutively activated in high-grade squamous intraepithelial lesions and squamous cell carcinomas of the human uterine cervix. Oncogene， 2003， 22 （1）： 50～58.

6Kim Y H， Chang I，et al. IFN-alpha sensitizes ME-180human cervical cancer cells to TNF alpha-induced apoptosis byinhibiting cytoprotective NF-kappaB activation. FEBS Lett， 2001，495（2）：66～70.

广东省清远市科技计划项目（2014B118）

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