他扎罗汀倍他米松乳膏人体皮肤耐受性研究

宗文凯 吴黎莉 陈沄 佘晓东 陈正琴 吴国华

他扎罗汀倍他米松乳膏人体皮肤耐受性研究

宗文凯 吴黎莉 陈沄 佘晓东 陈正琴 吴国华

目的 探讨健康志愿者单次或多次局部外用不同浓度的他扎罗汀倍他米松乳膏后，健康皮肤对受试药物的耐受性，预测受试药物对人体皮肤潜在的不良反应及其强度。方法 34例单次给药受试者分为 6 组，分别进行他扎罗汀与倍他米松浓度均为 0.025%、0.05%、0.1%、0.15%、0.2%、0.25%的单次给药耐受性试验。12例多次给药受试者分为2组，分别进行他扎罗汀与倍他米松浓度均为0.2%、0.15%每天给药1次、连续给药7 d的多次给药耐受性试验。观察受试者给药前后体征、实验室检查、给药部位皮肤反应及主观感觉、内源性皮质醇水平的变化，以及经皮吸收进入系统循环的药物量。结果 试验中未发生严重不良事件。单次给药34例受试者用药后均未出现与受试药物有关的不良反应，各项观察指标均未发现与受试药物有关的异常改变。多次给药12例受试者在开始给药后0～7 d给药部位无任何异常皮肤反应及自觉不适症状，给药后14 d（停药后7 d）0.2% 组6例受试者中5例、0.15%组6例受试者中2例，给药部位皮肤出现轻度刺激反应症状；其他各项观察指标均未发现与受试药物有关的异常改变。结论 他扎罗汀与倍他米松乳膏单次给药的最大耐受剂量为0.25%他扎罗汀和0.25%倍他米松。0.15%他扎罗汀和0.15%倍他米松连续给药7 d是比较安全的。

皮肤；人体；外用药；药物耐受性；他扎罗汀倍他米松乳膏

作者单位：210042南京，中国医学科学院北京协和医学院皮肤病研究所

他扎罗汀倍他米松乳膏为治疗银屑病的复方制剂，内含他扎罗汀及二丙酸倍他米松。他扎罗汀给药后在体内快速脱脂并转化成活性成分他扎罗汀酸，选择性地与维A酸受体结合，靶向作用于病变组织，调节细胞分化、抗增殖、抗炎［1］。倍他米松中强效外用糖皮质激素［2］。两药联合用药治疗银屑病，能减轻糖皮质激素引起的皮肤萎缩而不抑制其抗炎作用，同时可降低他扎罗汀的刺激性而不影响疗效。本研究主要检测健康志愿者单次或多次局部外用不同浓度的他扎罗汀倍他米松乳膏后，健康皮肤对受试药物的耐受性，预测受试药物对人体皮肤潜在的不良反应及其强度，为临床用药提供安全的剂量范围。

1 资料与方法

1.1 试验药物：他扎罗汀倍他米松乳膏，由重庆华邦制药有限公司生产，国药准字H20150015。从低到高共6个规格，制剂中他扎罗汀和倍他米松的浓度均为 0.025%、0.05%、0.1%、0.15%、0.2%、0.25%；批号分别为20080902、20080903、20080904、20080905、20080906、20080907。他扎罗汀和倍他米松乳膏基质，由重庆华邦制药有限公司生产，批号20080901。

1.2 试验设计及方案：单次给药试验采用低浓度到高浓度的单次给药序贯试验设计，从起始浓度到最高浓度共设6组。各浓度组按顺序从起始浓度到最高浓度进行耐受性试验，每例受试者只接受一个浓度的单次给药试验。多次给药试验设定2个浓度组，根据第1组的试验结果，第2组给药剂量递增或递减，每例受试者只接受一个浓度的试验。受试者每天给药1次，连续给药7 d共7次。

1.3 受试者选择：入选标准：年龄18～45岁，男女各半，在标准体重范围（体质指数19～24）；试验前体检各项检查合格；无药物过敏史；4周内未曾参加其他皮肤外用药物的临床试验；试验前2周内未系统服用或注射药物；育龄期妇女在研究期间及研究结束后1年内采用有效的避孕措施；对试验目的、试验药物及可能发生的不良反应基本了解，接受本试验方案，并签署知情同意书。排除标准：健康体检异常者；接受过已知对器官有损伤的药物，目前损害尚未完全恢复；有药物过敏史；正在应用其他预防或治疗药物；患重病，或有慢性疾病病史；患有影响药物试验的皮肤病；经常用药，嗜酒；妊娠期、哺乳期或经期妇女。

本临床试验方案经中国医学科学院皮肤病医院伦理委员会批准实施，受试者均签署知情同意书。

1.4 试验方法及观察指标《皮肤病外用药物临床研究指导原则》［新药（西药）临床研究指导原则汇编］［3］：单次给药试验：34例受试者分为6组，起始剂量组4例，其余5组每组6例。用2块面积为1 cm×1 cm的双层纱布分别涂布等量（0.03 g）的受试药膏或基质，两者相距3 cm，贴敷于受试者双前臂屈侧皮肤及两侧腰背部（共4处），再覆盖上一单层纱布，周边固定，保留24 h。给药前、给药后24、72 h及7 d各观察记录1次受试者皮肤反应情况及主观感觉，以及受试者一般情况（心率、呼吸、血压、体温）、心电图。给药后7 d检查血尿常规、肝肾功能。

多次给药试验：按单次给药试验的给药方法，每天给药1次，连续给药7 d共7次。给药前、开始给药后 24 h、72 h、5 d、7 d、14 d 各观察记录 1 次受试者皮肤反应情况及主观感觉。同时观察记录受试者一般情况（心率、呼吸、血压、体温）、心电图。给药后7 d、14 d检查血尿常规、肝肾功能。分别于给药前、开始给药后 24 h、72 h、5 d、7 d，采集受试者静脉血样，液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）法测定经皮吸收进入系统循环的药物量；给药前、开始给药后7 d、14 d测定内源性皮质醇水平。

1.5 皮肤反应的检查及判断：参照《皮肤病外用药物临床研究指导原则》［新药（西药）临床研究指导原则汇编］［3］，将用药部位的皮肤反应情况及受试者主观感觉以分级记分法记录，两者相加的总分值来判定皮肤反应的强度。

1.6 单次给药试验起始浓度、最高浓度的确定及剂量递增方法：临床前药效及毒理试验结果，0.05%他扎罗汀与0.05%倍他米松为临床用药的最佳药效及安全浓度。因此，将0.05%他扎罗汀与0.05%倍他米松确定为预测浓度，以预测浓度的1/2作为本次耐受性试验的起始浓度。

动物长期毒性实验结果，0.25%他扎罗汀倍他米松乳膏（高剂量）可导致所有动物均出现程度不等的皮肤刺激症状；动物体重出现增长缓慢，尤以雄性大鼠为重；部分脏器系数增大；用药局部皮肤的病理损伤明显增高。但所有毒性反应均具有可逆性，停止用药后均能恢复。各项实验室检查指标未见异常变化，未见有与受试药物相关的动物死亡。因此，本次试验的最高剂量确定为0.25%他扎罗汀和0.25%倍他米松。

按改良的费氏剂量（Fibonacci法）进行浓度递增，实际剂量递增顺序为：他扎罗汀和倍他米松均为0.025%、0.05%、0.1%、0.15%、0.2%、0.25%。

1.7 多次给药试验浓度的确定：以单次给药最大耐受量的前一浓度进行多次给药耐受性试验。如50%及以上受试者出现轻度皮肤反应、或受试者有其他不良反应，则下降一个浓度再进行多次给药耐受性试验。反之则上升一个浓度再进行多次给药耐受性试验。

1.9 耐受性判断标准：出现以下情况判断为不耐受：出现严重不良事件或≥50%受试者出现轻度不良反应。

受试制剂的安全性评价标准为：安全为无任何不良反应；比较安全为有轻度不良反应，不需做任何处理可继续给药；有安全性问题为有中等程度的不良反应，处理后可继续给药；不安全为因不良反应中止试验。

2 结果

2.1 入选受试者资料：单次给药试验入选34例健康受试者中男17例、女17例，年龄22～38岁，身高150～ 178 cm，体重50～ 76 kg，体质指数19.00～23.98。多次给药试验入选12例健康受试者中男6例、女6例，年龄19～32岁，身高158～183 cm，体重 51 ～ 75 kg，体质指数 19.33 ～ 23.59。试验期间无退出和剔除。受试者的年龄、身高、体重、体质指数以非参数检验进行组间比较分析，结果均P＞0.05，各组间受试者一般情况差异无统计学意义。

2.2 单次给药试验：6组34例受试者用药后均未出现与受试药物有关的不良反应，各项生命体征观察、心电图及实验室检查亦未发现与受试药物有关的异常改变。绝大部分指标差异无统计学意义，个别指标在给药前后差异有统计学意义（P＜0.05），但均在正常值范围波动。个别受试者给药后有略偏离正常值的实验室检查指标，但未见有临床意义的改变。

2.3 多次给药试验：12例受试者试验期间各项生命体征、心电图及实验室检查未见异常改变。绝大部分指标差异无统计学意义，个别指标在给药前后的差异有统计学意义（P＜0.05），但均在正常值范围波动。个别受试者给药后有略偏离正常值的实验室检查指标，但未见有临床意义的改变。

12例受试者在开始给药后0～7 d前臂及腰背给药部位无任何异常皮肤反应及自觉不适症状。给药后14 d（停药后7 d），0.2%组6例受试者中5例0.15%组6例受试者中2例，给药部位皮肤出现轻度刺激反应，表现为红斑、或脱屑、或红斑及脱屑、或红斑及皱褶，但无自觉不适。

皮肤连续用药7 d，2组受试者内源性皮质醇水平轻度下降，0.15% ～0.15%组给药前后的内源性皮质醇水平差异有统计学意义（P＜0.01），但均值在正常值范围（185.0 ～ 623.8 nmol/L），未见有临床意义的改变。停药1周后内源性皮质醇水平回升，与给药前相比，差异无统计学意义（P＞ 0.05，表 1）。

受试药物3～4倍于临床剂量皮肤局部连续给药7 d，他扎罗汀及二丙酸倍他米松经皮吸收进入系统的药量极低，血药浓度均低于检测方法的定量下限 0.04 ng/ml。

2.4 不良事件及不良反应：本研究各剂量组均未发生严重不良事件。单次给药试验34例受试者出现不良事件 4例（0.025%组 2例、0.05%组 2例），均为给药后实验室检查指标轻度异常，与受试药物可能无关。嘱清淡饮食、良好休息，未用药物处理。1周后复查恢复至正常值。

多次给药试验12例受试者出现不良事件8例其中1例为丙氨酸转氨酶、丙氨酸氨基转移酶轻度升高，与受试药物可能无关，1周后复查恢复至正常值。其余7例（0.2%组5例、0.15%组2例）为皮肤反应，主要表现为皮肤脱屑、或红斑、或脱屑及红斑、或红斑及皱褶，均为受试药物已有报道的不良反应，因此，判为受试药物的不良反应。嘱常规皮肤涂润肤剂，未用药物处理。7 d后均恢复正常。

2.5 耐受性评价：单次给药试验给药部位皮肤均未出现异常皮肤反应及自觉不适。他扎罗汀倍他米松乳膏单次给药的最大耐受剂量为0.25%他扎罗汀和0.25%倍他米松，5倍于临床浓度。

他扎罗汀倍他米松乳膏0.2%浓度连续给药7 d，6例受试者中5例出现轻度皮肤反应；0.15% 浓度连续给药7 d，2例出现轻度皮肤反应。可以认为0.15%他扎罗汀和0.15%倍他米松（3倍于临床浓度）连续给药7 d是比较安全的。

表1 多次给药组给药前后不同时间受试者内源性皮质醇水平（nmol/L，±s）

表1 多次给药组给药前后不同时间受试者内源性皮质醇水平（nmol/L，±s）

0.2% 组（n=6） 0.15%组（n=6）给药前 432.5 ± 176.6 307.7 ± 112.8给药后 7 d 342.8 ± 60.1 258.9 ± 94.0给药后 14 d 407.1 ± 96.1 264.1 ± 94.5

3 讨论

局部应用他扎罗汀，可出现轻至中度的皮肤刺激反应，表现为烧灼、瘙痒、刺痛和红斑，发生率高，呈剂量依赖性。但无光毒、光变态和接触过敏反应。对临床治疗而言，外用药局部应用后出现皮肤刺激反应并不是用药禁忌，有时这种轻至中度的反应是一过性的，继续用药可耐受；有时皮肤刺激反应可能与疗效相关，因此，不宜简单地以“开始出现不良反应”作为中止试验的指标。本次试验以同一剂量组≥50%受试者（≥3例）出现轻度皮肤刺激反应作为中止试验的指标之一，考察健康皮肤对受试药物的耐受程度。

一般而言，人体四肢伸侧及躯干部位的皮肤较屈侧为厚，前臂屈侧皮肤对化合物的刺激更为敏感，因此，考察受试药物对人体皮肤潜在的不良反应及其强度的用药部位均选择在前臂屈侧。由于银屑病皮损好发于躯干及四肢伸侧，本研究除在受试者双前臂屈侧用药外，还在受试者的两侧腰背部用药，使试验与临床实际用药情况尽可能接近。

由于外用糖皮质激素经皮肤吸收进入系统后可产生可逆性下丘脑-垂体-肾上腺皮质轴抑制，在多次给药试验的给药前后，测定受试者内源性皮质醇水平。结果表明，连续用药可轻度影响肾上腺皮质功能，停药后可恢复。

临床前动物局部用药安全性评价试验结果表明，复方与单方比较没有毒性程度增加及毒性靶器官的改变。为全面了解和评估人体皮肤外用他扎罗汀倍他米松乳膏后的安全性，多次给药试验时，测定受试者经皮吸收进入系统循环的药物量，结果与动物实验一致，经皮吸收进入系统的药量极低。

［1］孙联文,郑家润.他扎罗汀临床前药理及临床药理研究 ［J］.国外医学皮肤性病学分册,1999,25（6）:342-235.

［2］左辉,赵树恩,姚军.得宝松的药理作用、临床应用及不良反应的评价［J］.实用疼痛学杂志,2004,12（2）:40-42.

［3］中华人民共和国卫生部药政局.皮肤病外用药物临床研究指导原则［新药（西药）临床研究指导原则汇编］［S］.1993：145-146.

Evaluation of human skin tolerance to creams containing tazarotene and betamethasone dipropionate

Zong Wenkai,Wu Lili,Chen Yun,She Xiaodong,Chen Zhengqin,Wu Guohua.Institute of Dermatology,Chinese Academy of Medical Sciences and Peking Union Medical College,Nanjing 210042,China

ObjectiveTo evaluate skin tolerance to creams containing different concentrations of tazarotene and betamethasone dipropionate in healthy volunteers after single or multiple applications,and to predict potential adverse effects of these creams as well as their degree.MethodsThirty-four healthy volunteers were enrolled in a single-dose trial group,and divided into six subgroups to receive single session of topical treatment with creams containing tazarotene and betamethasone dipropionate both at the concentrations of 0.025%,0.05%,0.1%,0.15%,0.2%and 0.25%respectively.Another 12 healthy volunteers were enrolled in a multiple-dose trial group,and divided into two subgroups to topically apply creams containing tazarotene and betamethasone dipropionate both at the concentrations of 0.2%and 0.15%,respectively,once a day for 7 consecutive days.General status and subjective feelings of these testees were evaluated,skin reactions at application sites were observed,and routine laboratory examinations（including routine blood test,routine urine test,hepatic and renal function examination）were performed,before and after the application of these creams in both single-and multiple-dose trials.Endogenous cortisol levels were measured before and 7,14 days after the initial application of the creams,and the amount of drugs percutaneously absorbed into systemic circulation was determined before and 1,3,5,7 days after that in the multiple-dose trial.ResultsNo serious adverse events were found in the study.In the single-dose trial,the testees showed no drug-related adverse reactions or abnormal changes in test patameters after the application of the creams.In the multiple-dose trial,no aberrant skin reaction or self-reported discomfort was noted in any of the testees from day 0 to 7 after the first initial application of the creams,but mild irritation occurred in 5 out of 6 volunteers applying the cream containing 0.2%tazarotene and 0.2%betamethasone dipropionate and in 2 out of 6 volunteers applying the cream containing 0.15%tazarotene and 0.15%betamethasone dipropionate on day 14,with no abnormal drug-related changes in the other test parameters.ConclusionsThe maximum tolerated concentration of both tazarotene and betamethasone dipropionate is 0.25%when they are topically applied in a combined cream for one session.It is relatively safe to apply the cream containing 0.15%tazarotene and 0.15%betamethasone dipropionate for 7 consecutive days.

Skin;Haman body;External application drugs;Drug tolerance;Tazarotene betamethasone dipropionate cream

Chen Yun,Email:sxmcysissi@163.com

10.3760/cma.j.issn.1673-4173.2015.04.002

陈沄，Email:sxmcysissi@163.com

2014-01-03）