禽流感-新城疫二联重组活疫苗（rLH5-6株）对产蛋鸡群免疫效果观察

朱雁，陈燕眉，杨元北，李长彬，陈英军，林成，杜明喜，王培永，陈绵旭，王冰，张萍

（江苏省徐州市铜山区畜牧兽医站，江苏 徐州 221007）

禽流感-新城疫二联重组活疫苗（rLH5-6株）对产蛋鸡群免疫效果观察

朱雁，陈燕眉，杨元北，李长彬，陈英军，林成，杜明喜，王培永，陈绵旭，王冰，张萍

（江苏省徐州市铜山区畜牧兽医站，江苏 徐州 221007）

本试验通过禽流感（AI）-新城疫（ND）二联重组活疫苗（rLH5-6株）以不同的免疫途径和免疫剂量单独使用以及分别和重组禽流感病毒H5亚型二价灭活疫苗（Re-6株+Re-7株）、鸡新城疫灭活疫苗联合使用，免疫产蛋鸡群，定期采样监测禽流感（H5-6株）及新城疫抗体效价，根据各试验组免疫抗体效价、持续时间及免疫抗体合格率，评价禽流感-新城疫二联重组活疫苗的免疫效果，确定加强免疫的时间间隔及适宜的免疫程序。试验结果表明，单独使用禽-新二联重组活疫苗免疫产蛋鸡群和单独使用禽流感二价灭活疫苗相比，禽流感HI平均抗体效价低（仅在3log2左右），但仍能产生有效的保护，新城疫平均抗体效价可达6～8log2，70%以上的免疫抗体合格率能维持2个月左右。禽－新二联重组活疫苗与禽流感二价灭活疫苗联合使用，和单独使用禽流感二价灭活疫苗相比，禽流感HI平均抗体效价有所提高，且维持时间较长，70%以上的免疫抗体合格率至少维持6个月，新城疫HI平均抗体效价稍低于单独使用禽－新二联重组活疫苗的平均抗体效价。禽－新二联重组活疫苗与新城疫灭活疫苗联合使用，和单独使用新城疫灭活疫苗相比，导致新城疫HI平均抗体有所降低，且70%以上的免疫抗体合格率仅能维持6个月左右，禽流感HI平均抗体效价与单独使用禽－新二联重组活疫苗相比，没有明显差异。禽－新二联重组活疫苗肌注免疫的效果优于饮水免疫，而不同免疫剂量，在免疫效果上没有明显差异。建议，对于产蛋鸡群，单独使用禽流感－新城疫二联重组活疫苗时，可每间隔2个月按说明书剂量进行一次饮水或肌注加强免疫，单独使用禽流感二价灭活疫苗时，可每间隔4个月按说明书剂量进行一次肌注加强免疫；对于产蛋鸡群禽流感免疫，禽－新二联重组活疫苗可联合使用禽流感二价灭活疫苗，每间隔6个月用禽流感二价灭活疫苗按说明书剂量进行一次加强免疫，期间每间隔2个月再单独使用禽－新二联重组活疫苗按说明书剂量进行一次饮水或肌注加强免疫；对于产蛋鸡群新城疫免疫，新城疫灭活疫苗不宜和禽－新二联重组活疫苗联合使用。

禽流感；新城疫；二联重组活疫苗；灭活疫苗；抗体效价；免疫效果

禽流感（AI）、新城疫（ND）是目前危害养鸡业发展的一类传染病，被我国列为强制免疫病种，使用疫苗免疫是主要的预防措施。本试验通过禽流感-新城疫二联重组活疫苗（rLH5-6株）（简称禽-新二联重组活疫苗）以不同的免疫途径和免疫剂量单独使用以及分别和重组禽流感病毒H5亚型二价灭活疫苗（Re-6株+Re-7株）（简称禽流感二价灭活疫苗）、鸡新城疫灭活疫苗联合使用，免疫产蛋鸡群，定期采样监测禽流感（H5Re-6株）及新城疫抗体效价，根据各试验组免疫抗体效价、持续时间及免疫抗体合格率，评价禽流感-新城疫二联重组活疫苗的免疫效果，确定加强免疫的时间间隔及适宜的免疫程序。

1 材料与方法

1.1材料

1.1.1 试验疫苗禽流感-新城疫二联重组活疫苗（rLH5-6株），哈尔滨维科生物技术开发公司生产，批号2014042；重组禽流感病毒H5亚型二价灭活疫苗（Re-6株+Re-7株），哈尔滨维科生物技术开发公司生产，批号201423；鸡新城疫灭活疫苗，扬州威克生物工程有限公司生产，批号1409038。

1.1.2 试验鸡群由铜山区助农养鸡专业合作社提供，120日龄左右的临开产蛋鸡群，存栏1万只，取2000只，随机分成10组，每组200只，试验前随机采集20只血样，经HI试验监测H5亚型（Re-6株）禽流感抗体，群体免疫抗体合格率≤70%时进行试验，其余未参试鸡群仍按本场免疫程序实施免疫。该鸡群禽流感前期免疫程序为14日龄禽-新二联重组活疫苗2羽份滴鼻点眼，35日龄禽-新二联重组活疫苗3羽份饮水，65日龄禽流感二价灭活疫苗0.5mL肌注免疫。对于未参试鸡群禽流感的免疫，110日龄禽流感二价灭活疫苗0.5mL肌注免疫，以后每间隔4个月用禽流感二价灭活疫苗0.5mL肌注免疫一次。试验前免疫抗体监测结果见表1。

表1 试验前禽流感（H5Re-6株）、新城疫免疫抗体监测结果（抗体效价平均值（-log2）/免疫抗体合格率%

1.1.3 1%的鸡红细胞悬液、抗原及阳性血清用3.8%的枸橼酸钠作为抗凝剂，采集健康成年公鸡新鲜血液，用生理盐水离心洗涤3次，取红细胞配成1%的悬液，现配现用。禽流感H5亚型Re-6株标准抗原，哈尔滨维科生物技术开发公司生产批号2014006；新城疫标准抗原，批号20140603、阳性血清，批号20140701、禽流感H9亚型标准抗原，批号20140406、阳性血清，批号20140312，均为青岛立见诊断技术发展中心生产。

1.1.4 HI试验根据禽流感、新城疫监测技术规范，采用β微量法进行HI试验。

1.2 方法

1.2.1 试验分组试验分组情况见表2。

表2 试验分组情况

1.2.2 免疫抗体监测及判定标准试验开始后每15d进行一次采样，每组随机翅静脉采集20只鸡血样，分离血清，-20℃保存备用。使用同一批试剂进行HI试验，监测抗体效价，确定免疫抗体持续时间及加强免疫的时间间隔。禽-新二联重组活疫苗H5-6株免疫抗体效价≥23判定为合格，重组禽流感二价灭活疫苗Re-6株免疫抗体效价≥24判定为合格；新城疫免疫抗体效价≥25判定为合格。鸡群免疫抗体合格率≥70%判定为免疫合格。

2 试验结果（见表3）

表3 试验后禽流感（AI）、新城疫（ND）HI抗体监测结果（抗体效价平均值（-log2）/免疫抗体合格率%

表3 续

3 小结与讨论

3.1 由监测结果可以看出，单独使用禽流感－新城疫二联重组活疫苗的第1、2、3、4组，禽流感HI平均抗体效价仅在3log2左右或低于3log2，70%以上的免疫抗体合格率仅能维持2个月左右，新城疫平均抗体效价可达6～8log2，70%以上的免疫抗体合格率至少能维持2个月；但肌注免疫的第3、4组优于饮水免疫的第1、2组，而饮水免疫使用方便，省工省时；用法相同的第1组和第2组、第3和第4组，虽然疫苗使用剂量不同，但免疫效果没有明显差异；而单独使用禽流感二价灭活疫苗的第5组，禽流感HI平均抗体效价可达到8log2以上，且70%以上的免疫抗体合格率维持时间较长，在6个月左右，90%以上的免疫抗体合格率至少能维持4个月。有报道，禽－新二联重组活疫苗，虽不能产生高滴度的抗体应答，但能够抵御相同亚型禽流感病毒的攻击，保护效果达到或优于灭火苗。本试验中单独使用禽－新二联重组活疫苗的1、2、3、4组和单独使用禽流感二价灭活疫苗的第5组相比，虽然抗体效价明显较低，但整个试验期各组均未出现感染发病的情况，在一定意义上说明仍能提供有效的保护，与以上报道相符，限于试验条件，未能进行攻毒试验，有待进一步试验证明。同时，通过本试验也进一步验证了活疫苗和灭活疫苗各自的特性。

3.2 禽－新二联重组活疫苗与禽流感二价灭活疫苗联合使用的第6、7组，和单独使用禽流感二价灭活疫苗的第5组相比，禽流感HI平均抗体效价有所提高，且70%以上的免疫抗体合格率至少维持6个月，而单独使用禽流感二价灭活疫苗的第5组，禽流感70%以上的免疫抗体合格率仅能维持6个月左右，这可能与活疫苗激发机体的免疫应答有关；新城疫HI平均抗体效价似乎稍低于单独使用禽－新二联重组活疫苗的第1、2、3、4组，但没有明显差异，这与有关报道禽流感二价灭活疫苗与禽－新二联重组活疫苗联合使用，可抑制机体对新城疫的免疫应答相符，但具体机制尚不明确；而禽－新二联重组活疫苗肌注免疫的第7组，禽流感HI平均抗体效价优于饮水免疫的第6组，但没有明显差异。

3.3 禽－新二联重组活疫苗与新城疫灭活疫苗联合使用的第8、9组，和单独使用新城疫灭活疫苗的第10组相比，新城疫HI平均抗体效价似乎有所降低，且70%以上的免疫抗体合格率仅能维持6个月左右，而单独使用新城疫灭活疫苗的第10组，70%以上的免疫抗体合格率至少能维持6个月，这可能与禽流感疫苗抑制机体对新城疫疫苗的免疫应答有关；禽流感HI平均抗体效价与单独使用禽－新二联重组活疫苗的1、2、3、4组相比，没有明显差异；而禽－新二联重组活疫苗肌注免疫的第9组，新城疫HI平均抗体效价稍低于饮水免疫第8组，但没有明显差异。

3.4 我们曾在其他鸡场进行重复试验，取得一致的结果。

4 结论

4.1 单独使用禽－新二联重组活疫苗免疫产蛋鸡群和单独使用禽流感二价灭活疫苗相比，禽流感HI平均抗体效价较低，仅在3log2左右，但仍能产生有效的保护；新城疫平均抗体效价可达6～8log2，70%以上的免疫抗体合格率能维持2个月左右；且肌注免疫的效果优于饮水免疫，但饮水免疫使用方便，省工省时；而同一种疫苗，相同的免疫方法不同使用剂量，免疫效果没有明显差异。建议，对于产蛋鸡群，单独使用禽－新二联重组活疫苗时，每间隔2个月按说明书剂量进行一次饮水或肌注加强免疫；单独使用禽流感二价灭活疫苗时，每间隔4个月按说明书剂量进行一次加强免疫。

4.2 禽－新二联重组活疫苗与禽流感二价灭活疫苗联合使用，和单独使用禽流感二价灭活疫苗相比，禽流感HI平均抗体效价有所提高，且维持时间较长，70%以上的免疫抗体合格率至少维持6个月，新城疫HI平均抗体效价则稍低于单独使用禽－新二联重组活疫苗的平均抗体效价，但差异不明显，禽－新二联重组活疫苗肌肉注射免疫与禽流感二价灭活疫苗联合使用的效果优于饮水免疫，但没有明显差异。建议，对于产蛋鸡群禽流感免疫，禽－新二联重组活疫苗可联合使用禽流感二价灭活疫苗，每间隔6个月按说明书剂量进行一次加强免疫，期间每间隔2个月再单独使用禽－新二联重组活疫苗按说明书剂量进行一次饮水或肌注加强免疫。

4.3 禽－新二联重组活疫苗与新城疫灭活疫苗联合使用，和单独使用新城疫灭活疫苗相比，导致新城疫HI平均抗体效价有所降低，且70%以上的免疫抗体合格率仅能维持6个月左右，禽流感HI平均抗体效价与单独使用禽－新二联重组活疫苗相比，没有明显差异，而禽－新二联重组活疫苗肌注免疫时，导致新城疫HI平均抗体效价稍低于饮水免疫，但没有明显差异。建议，对于产蛋鸡群新城疫免疫，新城疫灭活疫苗不宜和禽－新二联重组活疫苗联合使用。

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10．3969/J.ISSN．1671-6027．2015．08.025