涎腺黏液表皮样癌中信号传导和转录激活因子3、血管内皮生长因子的表达及临床意义

安　峰，何薇薇，林媛媛，刘　博，段晓瑾

(1.河北北方学院附属第一医院口腔科，河北 张家口 075000；

2.河北北方学院附属第一医院病理科，河北 张家口 075000；

3.河北医科大学第四医院病案室，河北 石家庄 050011)

·论著·

涎腺黏液表皮样癌中信号传导和转录激活因子3、血管内皮生长因子的表达及临床意义

安峰1，何薇薇1，林媛媛2，刘博2，段晓瑾3

(1.河北北方学院附属第一医院口腔科，河北 张家口 075000；

2.河北北方学院附属第一医院病理科，河北 张家口 075000；

3.河北医科大学第四医院病案室，河北 石家庄 050011)

[摘要]目的探讨信号传导和转录激活因子3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)、血管内皮生长因子(vascular endothelial gravth factor,VEGF)在涎腺黏液表皮样癌( mucoepidermoid carcinoma,MEC)中表达的临床意义。方法应用免疫组织化学SP法，分别检测STAT3、VEGF在20例正常涎腺组织、20例良性多形性腺瘤(salivary pleomorphic adenoma，SPA)及82例MEC中的表达情况。结果MEC组STAT3、VEGF表达均高于正常涎腺组和SPA组(P<0.05)；在MEC组中病理分级Ⅲ级患者 STAT3和VEGF表达阳性率高于病理分级Ⅰ级患者(P<0.05)； TNM分期Ⅲ+Ⅳ期患者STAT3和VEGF表达阳性率高于TNM分期Ⅰ+Ⅱ 期患者(P<0.05)；有淋巴转移患者 STAT3和VEGF表达阳性率高于无淋巴转移患者(P<0.05)。结论STAT3和VEGF共同参与MEC的发生发展，可为判断涎腺MEC 的预后提供参考。

[关键词]涎腺肿瘤；STAT3转录因子；血管内皮生长因子类

doi:10.3969/j.issn.1007-3205.2015.05.014

涎腺黏液表皮样癌(mucoepidermoid carcinoma,MEC)是一种常见于儿童和成人的涎腺肿瘤，镜下由黏液细胞、中间细胞及表皮样细胞构成，约占涎腺恶性肿瘤的29.6%，好发于腮腺。2005年WHO曾采用Auclair等[1]提出的方法按照细胞分化程度、囊内成分、神经浸润、坏死、间变等情况综合评分将其分为低度、中度及高度恶性3种级别。这3种分化级别提示了不同的肿瘤发展进程及预后[2]，相对应的具体治疗方案也不同。治疗方案主要还是采取手术方式，术后生存率较高；但如果出现复发、转移的患者，则预后较差。在促进肿瘤分化、复发的机制中，微血管生成占据了重要一环。而信号传导和转录激活因子3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)便具有促进肿瘤细胞生长分化、血管增殖的功能[3]。以前的研究中我们注意到人体实体肿瘤细胞中都检测到高水平的STAT3，并参与了肿瘤细胞的增殖、抗凋亡和血管生成系统。本研究应用免疫组织化学链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连接(streptavidin-perosidase,SP)法分别检测STAT3和VEGF 在MEC中的表达，探讨二者在MEC发生发展中的生物学作用，以及与临床特征之间的关系。

1材料与方法

1.1一般资料收集1985—2011年间河北北方学院附属第一医院病理科经手术切除的MEC石蜡标本共82例，并选取20例涎腺良性多形性腺瘤(salivary pleomorphic adenoma，SPA)及其周围正常涎腺组织作对照。MEC组男性32例，女性50例，年龄19~80岁，平均(54.67±4.90)岁，其中18例有淋巴结转移；均为首次发病，无术前放疗或化疗病史；参照WHO(2005)MEC的组织学标准对其进行量化分级：Ⅰ级28例，Ⅱ级34例，Ⅲ级20例；按照国际抗癌联盟临床TNM分期法：Ⅰ+Ⅱ期59例，Ⅲ+Ⅳ期23例。SPA组男性7例，女性13例，年龄24~68岁，平均(51.90±9.48)岁。正常涎腺与SPA组来源于同一组病例。3组性别、年龄差异均无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。

1.2方法选用鼠抗人STAT3和VEGF的单克隆抗体，利用免疫组织化学SP法进行染色。每种抗体均采取阳性(已知阳性标本)及阴性(PBS代替一抗)对照。

1.3结果判断以细胞浆及胞膜有棕黄色颗粒为阳性，按照10个高倍视野内阳性细胞百分数及染色强度的评分相加进行综合评分。阳性率0分： ≤5%；1分：>5%～25%；2分：>25%~50%；3分：>51%~75%；4分：>75%。染色强度0分：无着色；1分：淡黄色；2分：棕黄色；3分：棕褐色。0~3分为阴性，≥4分为阳性，所有染色结果均由2位资深医师进行阅片判读。

1.4统计学方法应用SPSS19.0统计软件进行数据处理。计数资料用百分率表示，组间比较采用χ2检验；相关性采用Spearman等级相关分析。P<0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.13组STAT3和VEGF表达比较STAT3和VEGF阳性颗粒均集中在细胞浆和(或)细胞膜，多呈均匀着色，偶尔呈小颗粒状(图1~6)。MEC组STAT3、VEGF表达均高于正常涎腺组和SPA组(P<0.05)，而SPA组与正常涎腺组差异无统计学意义(P>0.05)，见表1。

表1　3组STAT3和VEGF表达比较Table 1　Expression of STAT3 and VEGF among three groups　(例数，%)

*P<0.05与正常涎腺组比较#P<0.05与SPA组比较(χ2检验)

2.2MEC组不同病理特征中 STAT3和VEGF的表达在MEC组中病理分级Ⅲ级患者STAT3和VEGF表达阳性率高于病理分级Ⅰ+Ⅱ级患者(P<0.05)； TNM分期Ⅲ+Ⅳ期患者STAT3和VEGF表达阳性率高于TNM分期Ⅰ+Ⅱ 期患者(P<0.05)；有淋巴转移患者 STAT3和VEGF表达阳性率高于无淋巴转移患者(P<0.05)；不同性别和年龄MEC患者之间 STAT3和VEGF表达阳性率差异无统计学意义(P>0.05)。见表2。

表2　MEC中不同病理特征STAT3和VEGF的表达Table 2　Pathological features of STAT3 and VEGF in mucoepidermoid carcinoma　(例数，%)

2.3相关性分析MEC组中STAT3与VEGF表达呈正相关(rs=0.226，P<0.05)。

3讨论

MEC是口腔颌面部常见的涎腺恶性肿瘤之一，经临床研究分析，不同的病理组织学分级提示不同的生物学行为，且预后差异较大。低分化型较高分化型更易侵袭周围组织并发生转移，生存率也更低。肿瘤的影响因素很多，其中肿瘤内血管增殖占据了重要的部分。不同肿瘤的生长浸润以及向远处转移都将依赖于肿瘤内新生性血管的形成[4]。肿瘤本身的毛细血管内皮细胞在各种促血管生成因子作用下发生了一系列复杂的过程，涉及多种细胞因子和生长因子，如VEGF[5]即是其中关键性的组成部分。而STAT3则会直接影响VEGF的形成，促进肿瘤内血管的增殖[6]。

STAT3属于信号转导与转录激活因子家族(STATs)[7]，在细胞因子和生长因子的作用下，具有促进肿瘤细胞生长分化、血管增殖的功能，并参与到肿瘤的免疫逃逸，为肿瘤的侵袭转移提供了帮助，已被认为是一种癌基因。现今很多研究证实在恶性肿瘤如胃癌、肝癌[6]、白血病、涎腺样囊性癌中，STAT3都具有与新生血管相关的高表达。本研究结果显示，STAT3在正常涎腺组织、SPA、MEC中的阳性表达率分别为5.0%、10.0%、36.6%，MEC组的STAT3阳性表达率高于正常涎腺和SPA组(P<0.05)；镜下可发现在肿瘤性新生血管丰富的区域如肿瘤浸润边缘区，STAT3阳性细胞数量多且更加聚集，相反血管相对较少的肿瘤中心区域，其阳性细胞数量少且分散。说明MEC中STAT3的过表达能够促进肿瘤血管的增殖，为肿瘤的生长进化以及浸润转移提供了营养及途径。有研究也证实肿瘤细胞中STAT3的过表达，能够诱导血管生长因子VEGF的表达，促进肿瘤的生长和肿瘤的浸润[8]。

VEGF是最为重要的一种血管刺激因子，它在人类很多恶性肿瘤细胞中都呈高表达状态，如乳腺癌、肺癌、卵巢癌[9]等。它的阳性表达部位较为广泛，可以出现在肿瘤细胞、间质细胞和部分血管内皮细胞中。肿瘤细胞可以通过分泌VEGF来刺激其邻近血管的内皮细胞分裂增殖和转化迁移[10]。这种新生的幼稚血管具有结构和功能上的缺陷，导致血管通透性增加，进一步促进肿瘤细胞的增殖和转移。并且它还能参加到免疫系统中使肿瘤细胞逃避免疫监控。本研究结果显示，VEGF在正常涎腺组织、SPA、MEC中的阳性表达率分别为10.0%、25.0%、73.2%，MEC组VEGF阳性表达率高于正常涎腺和SPA组(P<0.05)；它的阳性表达区主要集中在肿瘤细胞的胞浆及胞膜上，且这些阳性表达显著的肿瘤细胞更多集中于肿瘤边缘，即与周围组织的交界浸润处。表明肿瘤细胞通过分泌VEGF作用于附近的血管内皮细胞，从而影响其生长与功能。

多年的研究已经发现，VEGF的启动子上具有STAT3的结合位点序列，这种STAT3的反应元件可以导致VFGF的异常活化，促进肿瘤的生长和转移[11-12]。本研究结果也显示这两者间呈正相关关系(P<0.05)，在MEC中相互影响，与其预后密切相关。表明它们通过不同的影响方式，促进肿瘤及其所需血管的生长，并共同影响了机体的免疫系统，使肿瘤细胞逃脱机体的免疫监控，加大了肿瘤的复发和转移率[13]。

综上所述，STAT3、VEGF在MEC中的表达明显高于正常涎腺及SPA组，提示二者是MEC发生发展的重要原因之一。通过对这二者联合表达的研究，可以对MEC的预后进行评估。(本文图见封三)

[参考文献]

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(本文编辑：许卓文)

[收稿日期]2015-03-09；[修回日期]2015-04-10

[基金项目]张家口市科学技术研究与发展指导计划项目

[作者简介]安峰(1962-)，男，河北涿鹿人，河北北方学院附属

[中图分类号]R739.87

[文献标志码]A

[文章编号]1007-3205(2015)05-0540-04

Expression of signal transducer and activator of transcription 3 and vascular endothelial
growth factor in mucoepidermoid carcinoma and clinical significance

AN Feng1,HE Wei-wei1,LIN Yuan-yuan2,LIU Bo2，DUAN Xiao-jin3

(1.Department of Stomatology,the First Affiliated Hospital of Hebei North College,Hebei Province,

Zhangjiakou 075000，China;2.Department of Pathology,the First Affiliated Hospital of Hebei North

College,Hebei Province,Zhangjiakou 075000，China；3.Medical Record Room,the Fourth Hospital

of Hebei Medical University,Shijiazhuang 050011,China)

[Abstract]ObjectiveTo study the expression and clinical significance of signal transducer and activator of transcription 3(STAT3) and vascular endothelial growth factor(VEGF) in mucoepidermoid carcinoma of salivary glands.MethodsThe immunohistochemical method SP was used to detect the expression of STAT3 and VEGF in 20 cases of normal salivary gland tissue,20 cases of salivary pleomorphic adenoma(SPA) and 82 cases of mucoepidermoid carcinoma(MEC).ResultsThe expression of STAT3 and VEGF in MEC group were higher than those of normal salivary gland group and SPA group(P<0.05);in MEC group,STAT3 and VEGF expression of pathological grade level Ⅲpatients were higher than those of pathological grade levelⅠpatients(P<0.05 );STAT3 and VEGF expression of TNM stage Ⅲ + Ⅳ patients were higher than those of TNM stage Ⅰ+Ⅱ patients(P<0.05);STAT3 and VEGF expression of lymph node metastasis in patients were higher than in patients without lymph node metastasis(P<0.05).ConclusionSTAT3 and VEGF participated in the occurrence and development of MEC and should also be considered as significant indicators of prognosis in salivary gland MEC.

[Key words]salivary gland neoplasm;STAT3 transcription factor;vascular endothelial growth factors

(11110012D)； 河北北方学院自然科学面上项目(2013010)

第一医院主任医师，从事口腔颌面外科疾病诊治研究。