高效液相色谱法测定氯霉素水杨酸酊中2组分含量

祝文兵，彭芳玲，田　静，张　晶，刘红艳

高效液相色谱法测定氯霉素水杨酸酊中2组分含量

祝文兵，彭芳玲，田静，张晶，刘红艳

[摘要]目的建立高效液相色谱法同时测定氯霉素水杨酸酊中2组分的含量。方法色谱柱为Agilent Zorbax Eclipse XDB柱(4.6 mm×150 mm，5 μm)，流动相：乙腈-0.01 mol/L庚烷磺酸钠缓冲溶液(23∶77，内含0.5%三乙胺、0.68%磷酸二氢钾，用磷酸调pH 值为2.5)，流速1.0 mL/min，检测波长为277 nm。结果氯霉素、水杨酸分别在0.020 96~0.419 2 mg/mL (r=0.999 9)、0.096 8~1.936 mg/mL (r=0.999 9)浓度范围内线性关系良好。平均回收率分别为100.86%、100.46%，RSD分别为0.68%、0.69%。结论本方法简便、快速、准确，可作为氯霉素水杨酸酊的质量控制方法。

[关键词]氯霉素水杨酸酊；氯霉素；水杨酸；高效液相色谱法；含量测定

[Abstract]ObjectiveTo establish an HPLC method for the determination of two components in lvmeisushuiyangsuan tincture simultaneously.MethodsThe chromatographic conditions were as follows: Agilent Zorbax Eclipse XDB column (4.6 mm×150 mm,5 μm),acetonitrile and 0.01 mol/L sodium 1-heptanesulfonate (23∶77,included 0.5% triethylamine,0.68% KH2PO4and adjusted pH to 2.5 with phosphoric acid) as mobile phase,the flow rate was 1.0 mL/min,the detection wavelength was 277 nm.ResultsThe linear range of chloramphenicol and salicylic acid were respectively 0.020 96~0.419 2 mg/mL (r=0.999 9),0.096 8~1.936 mg/mL (r=0.999 9).The average recovery rates were 100.86% and 100.46%,and the RSD were 0.68% and 0.69%.ConclusionThe method is simple,rapid and accurate.It can be used for the quality control of lvmeisushuiyangsuan tincture.

收稿日期：2015-04-08

通信作者*

DOI:10.14053/j.cnki.ppcr.201510028

HPLC determination of two components in chloramphenicol salicylic acid tinctureZHU Wen-bing,PENG Fang-ling,TIAN Jing,ZHANG Jing,LIU Hong-yan (Hunan Children's Hospital,Changsha 410007,China)

Key words：Chloramphenicol salicylic acid tincture;Chloramphenicol;Salicylic acid;HPLC;Content determination

0引言

氯霉素水杨酸酊为我院自制制剂，主要由氯霉素和水杨酸组成，具有抗菌及软化角质作用，用于毛囊炎、头皮糠疹、脂溢性皮炎等症。该品种的原质量标准中氯霉素的含量采用分光光度法分别测定，水杨酸的含量采用滴定法测定，操作繁琐且结果准确性不高，误差大。已有高效液相色谱法同时测定制剂中氯霉素和水杨酸的含量的报道[1-10]，本文建立用高效液相色谱法同时测定氯霉素水杨酸酊中氯霉素和水杨酸的含量方法，操作简便，测定结果准确，可作为氯霉素水杨酸酊新的质量控制标准。

1仪器与试药

Agilent 1260系列高效液相色谱仪(安捷伦科技有限公司，配四元泵、自动进样器、VWD检测器)；十万分之一电子天平(SHIMADZU AUW220D)；氯霉素标准品(中国药品生物制品检定所，批号：130555-201301)；水杨酸标准品(中国药品生物制品检定所，批号：100106-201211)；氯霉素水杨酸酊(自制，规格：100 mL。含量：氯霉素5 mg/mL，水杨酸20 mg/mL)，批号：20140710、20140917、20141114)；乙腈(色谱纯)；磷酸二氢钾、庚烷磺酸钠、磷酸(分析纯)；水为超纯水。

2方法与结果

2.1色谱条件色谱柱：Agilent Zorbax Eclipse XDB (4.6 mm×150 mm，5 μm)；流动相：乙腈-0.01 mol/L庚烷磺酸钠缓冲溶液(取磷酸二氢钾6.8 g，用0.01 mol/L庚烷磺酸钠溶解并稀释至1 000 mL，再加三乙胺5 mL，用磷酸调节pH值至2.5，23∶77)；流速：1.0 mL/min；检测波长：277 nm；柱温：25 ℃；进样量：20 μL。在上述色谱条件下，对照品及样品中氯霉素和水杨酸均能完全分离。色谱图见图1。

2.2溶液的制备

2.2.1对照品溶液的配制精密称取氯霉素对照品13.1 mg和水杨酸对照品60.5 mg，置25 mL量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，得到含氯霉素0.524 mg/mL和水杨酸2.42 mg/mL的对照品溶液，备用。

2.2.2供试品溶液的配制精密吸取本品1 mL，置于50 mL容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45 μm)滤过，即得。

2.2.3空白样品的制备按其质量标准中处方比例和样品制备工艺不加氯霉素、水杨酸制成空白样品，按“2.2.2”项下方法制备成空白样品溶液，即得。

2.3干扰性试验精密量取对照品、供试品溶液和空白样品溶液，按“2.1”项下色谱条件进行测定，记录色谱图(见图1)，可见空白样品在HPLC图谱上氯霉素、水杨酸相应位置无峰，表明其他组分对测定无干扰。

图1　氯霉素和水杨酸HPLC图

2.4线性关系考察精密量取对照品溶液1.0、2.0、4.0、8.0、20.0 mL于25 mL容量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45 μm)滤过，滤液按“2.1”项下色谱条件测定，以浓度X(mg/mL)为横坐标、峰面积Y为纵坐标，进行线性回归，得氯霉素和水杨酸的回归方程分别为：氯霉素：Y=28 194.2 X+55.00 (r=0.999 9)，水杨酸：Y=9 729.3 X-1.4 (r=0.999 9)，线性范围分别为0.020 96~0.419 2 mg/mL，0.096 8~1.936 mg/mL。

2.5精密度试验取对照品溶液5 mL于10 mL容量瓶中，用流动相稀释至刻度，按“2.1”色谱条件重复进样6次，测定峰面积，氯霉素和水杨酸的RSD分别为0.37%和0.64%(n=6)。

2.6稳定性试验精密量取同一样品(批号：20140917)，按“2.3”项下供试品溶液的配制方法制成供试品溶液，在室温下分别于0、1、2、4、8和12 h进样，记录氯霉素和水杨酸的峰面积，结果供试品溶液氯霉素和水杨酸的峰面积RSD分别为1.24%和1.41%，表明供试品溶液至少在12 h内稳定。

2.7重现性试验精密量取同一样品(批号：20140917)6份，按“2.3”项下供试品溶液的配制方法分别测定氯霉素和水杨酸峰面积，测得氯霉素和水杨酸的浓度分别为5.14、19.65 mg/mL，RSD分别为0.61%、0.83%，结果表明本法重现性好。

2.8回收率试验精密量取已知浓度的样品(批号：20140917) 1 mL，共6份，分别置于25 mL容量瓶中，精密加入对照品溶液8 mL，用流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，进样，测定峰面积并计算含量，结果见表1。

表1　氯霉素及水杨酸回收率测定结果(n=6)

2.9样品测定取不同批次的3批样品，每个批次5份，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件进行含量测定，结果见表2。

3讨论

氯霉素水杨酸酊经我院临床使用多年，治疗脂溢性皮炎等症，疗效确切。原质量标准采用分光光度法测定氯霉素的含量，采用滴定法测定水杨酸的含量，步骤繁琐，准确性低，难以满足目前形势下对医院制剂质量控制的要求。相比于原质量标准，本实验建立高效液相色谱法同时测定氯霉素水杨酸酊中氯霉素和水杨酸的含量，减少了操作环节，实验过程短，干扰因素少，专属性强，误差小，测定结果更加准确，可有效控制本品的质量。

表2　氯霉素及水杨酸含量测定结果(n=5)

笔者在实验初期曾选用乙腈-水、乙腈-磷酸盐缓冲液以及甲醇-磷酸盐缓冲液作为流动相进行试验，效果不理想，两组分分离不完全且色谱峰峰型差。在波长选用时，先后用230 nm和300 nm作为本法的吸收波长，但在两波长处两组分吸收强度差别都较大，而在277 nm处，氯霉素和水杨酸两者吸收值较高且相近，能很好地满足氯霉素和水杨酸的检测需求，提高了本实验对两者含量测定的灵敏度和准确性。

本方法精密度高，稳定性和重现性好，可作为氯霉素水杨酸酊的制剂质量控制。

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·临床药学·

作者单位：1.大连大学附属中山医院药剂科，大连 116001；2.青岛大学医学院附属医院，青岛 266003