UC-MSC治疗儿童造血干细胞移植后GVHD的疗效观察

何 洁，赵 晶，庞荣清，阮光萍，蔡学敏，朱向情，潘兴华

UC-MSC治疗儿童造血干细胞移植后GVHD的疗效观察

何 洁，赵 晶，庞荣清，阮光萍，蔡学敏，朱向情，潘兴华

目的观察脐带间充质干细胞（UC-MSC）治疗儿童造血干细胞移植后移植物抗宿主病（GVHD）的疗效。方法对1例造血干细胞移植后发生GVHD的患儿行UC-MSC治疗，共治疗7次，每次4×107个细胞（20 ml）。结果患儿在接受UCMSC治疗后获得部分缓解（PR）。 结论 UC-MSC对治疗儿童造血干细胞移植后的GVHD具有一定的疗效。

脐带；间充质干细胞；儿童；移植物抗宿主病；疗效

随着移植技术的进步，异基因造血干细胞移植(allogeneic hematopoietic stem cell transplantation，allo-HSCT)目前已成为治疗白血病的有效方法，移植后成功率增高，死亡率显著降低，但是与移植相关的并发症、尤其是移植物抗宿主病 (graft-versushost disease，GVHD)的发生会严重影响患者的生存质量。目前，慢性GVHD（cGVHD）除了应用免疫抑制剂外，仍无有效应对方法[1]。cGVHD的发病机制复杂，几乎影响到所有组织器官，临床表现多样化，其特征类似于自身免疫疾病及其他免疫疾病，如硬皮病、干燥综合征、免疫性血细胞减少症等。因此，寻求一种cGVHD的有效治疗方法是临床亟待解决的问题。脐带间充质干细胞(UC-MSC)免疫原性低，几乎可以影响免疫系统所有的细胞，具有免疫调节、免疫抑制作用，可有效的治疗GVDH[2]。Ringden等[3]报道，骨髓间充质干细胞能有效控制常规免疫抑制疗法无效的严重急性GVHD。随后脐带MSC也用于治疗成人GVHD[4]。本研究用脐带MSC治疗1例造血干细胞移植后发生GVHD的患儿，取得了较好的疗效，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 病例资料 患儿出生6个月时，因贫血在广州某大型医院行地贫基因检查确诊为“β-地中海贫血”，主要给予输注红细胞悬液以及不规则去铁治疗。患儿3岁时于2006年9月住我院血液科行脐血干细胞移植治疗，细胞植入后，患儿恢复自身造血。3个月后病情反复，治疗上主要给予输注红细胞悬液、去铁治疗。2012年7月患儿在我院血液科行allo-HSCT，供体为其胞弟。移植后1个月，患儿并发急性肝脏GVHD，给予甲泼尼松龙、环孢素等治疗后，胆红素、转氨酶明显下降；同年9月常规胸部CT检查提示肺部感染，考虑肺部真菌感染，给予伏立康锉抗感染治疗。2015年2月患儿常规检查提示胆红素、转氨酶升高，考虑肝脏GVHD反复，给予甲泼尼松龙治疗后，转氨酶、胆红素等逐渐减量，但是仍然存在皮肤及肝脏慢性GVHD。常规检查示转氨酶(ALT)278.4 U/L，总胆红素(TBIL)117.6 mmol/L，转肽酶(GGTL)2124 mmol/L，出现颈部、腹部皮肤色素沉积和脱屑。经院内会诊，经家属签字同意后，决定给予UC-MSC治疗，拟定UC-MSC治疗方案。

1.2 UC-MSC体外培养扩增 取足月妊娠剖宫产健康胎儿的脐带，以PBS充分冲洗血块后，用剪刀分割为直径约1～2 mm大小的组织块，移入1.5 ml EP管内，用眼科组织剪剪成糊状后，转移至培养瓶，加入含10%FBS的DMEM/F12培养液中，置于含有5%CO2、37℃饱和湿度培养箱中培养，细胞达80%汇合后，以0.2%的胰酶/EDTA消化，并按1∶3的比例传代。收集第3代细胞，经流式细胞仪检测细胞表型并确定为UC-MSC。

1.3 UC-MSC移植治疗 收集第3代处于对数生长期的细胞，按照1×106个细胞/kg体重剂量，每次治疗剂量UC-MSC悬液终体积为20 ml，细胞数量为4×107个。输注前检测细胞活性≥85%。采用静脉输注方式输入患儿体内，输注时间≤20 min，24 h内严密观察患儿生命体征。

患儿家属签署知情同意书，并且在征得医院伦理委员会的批准后，在原有免疫抑制治疗的基础上，实施UC-MSC治疗，每次1个治疗剂量，每2 w治疗1次，行7次治疗，治疗结束后评价疗效。

1.4 疗效评价 疗效判断标准：完全缓解(CR)：GVHD症状及体征消失；部分缓解(PR)：1个或多个受累器官临床症状及相关指标明显改善＞50%，并且其他器官症状无加重；疾病稳定(SD)：GVHD症状及体征无改变；疾病进展(PD)：治疗期间GVHD症状进行性加重。

2 结果

患儿于2015年2月12日开始接受UC-MSC输注，治疗期间未见明显不良反应，6月12日常规检查示 ALT 108 U/L，TBIL 29.5 mmol/L，GGTL＞1653 mmol/L；颈部皮肤色素减退，脱屑停止。治疗总评价为PR。

3 讨论

间充质干细胞(MSC)是具有自我更新和多向分化潜能，能生成脂肪细胞、成骨细胞、成软骨细胞、神经细胞和成肌细胞的非造血成体干细胞。研究证实，MSC不仅能通过分泌众多细胞因子，改善造血微环境，促进移植后造血功能的重建，而且具有低免疫原性和免疫调节的特性，可以避免和减轻宿主免疫应答，诱导特异性免疫耐受的形成[5]。对比其他来源的MSC，脐带来源的间充质干细胞有增殖能力强、取材不受限制、无伦理问题制约、可以大量扩增等优势，已经成为MSC治疗的最佳选择。

临床研究结果显示，MSC对于造血干细胞移植后重度GVHD具有预防效果[11-12]，但具体作用机制不清楚，一般认为是通过多种途径发挥免疫调节作用，作用于淋巴细胞，抑制淋巴细胞增殖，调节细胞因子、趋化因子分泌等[6]。但这些免疫调节效应是否适用于cGVHD，是否MSC的治疗与细胞剂量有关，是否可能诱发原发病复发或进展等尚不明确。目前对cGVHD仍没有有效的治疗方法，因此，MSC疗法成为难治性GVHD可以选择的有效措施之一。

本例在2012年7月接受allo-HSCT术后至今，一直服用免疫抑制剂，至2015年2月出现肝脏和皮肤cGVHD，按1×106个细胞/kg的剂量，连续7次输注，结果表明，临床疗效未PR，表明UC-MSC治疗有一定疗效，与文献报道相一致[7]。

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R 318.1

A

1004-0188（2016）12-1369-02

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2016-07-04）

国家科技支撑计划项目（2014BI01B0）；国家973计划项目（2012CB5181060）；云南省科技计划重点项目(2013CA005）

650032昆明,成都军区昆明总医院细胞生物治疗中心，干细胞与免疫细胞生物医药技术国家地方联合工程实验室,云南省细胞治疗技术转化医学重点实验室，云南省干细胞工程实验室，昆明市干细胞与再生医学研究重点实验室

庞荣清,E-mail:pangrq2000@aliyun.com；潘兴华，E-mail:xinghuapan@aliyun.com