市售蓝莓类产品的原花青素含量测定

陈安平，黄勇军，汪胜峰（浙江尖峰健康科技有限公司，浙江金华321000）



市售蓝莓类产品的原花青素含量测定

陈安平，黄勇军，汪胜峰
（浙江尖峰健康科技有限公司，浙江金华321000）

摘要：采用紫外分光光度法对市场上蓝莓类产品中原花青素含量进行测定，在546 nm处测定吸光度，试验表明原花青素在10μg/mL~150 μg/mL之间呈现良好的线性关系，认为以蓝莓为主要成分产品非常有必要标示原花青素含量，原花青素可以作为蓝莓类产品的质量控制指标。

关键词：蓝莓；原花青素；紫外分光光度法

原花青素（Proanthocyanidins，简称PC）是植物王国中广泛存在的一大类多酚类化合物的总称。这类化合物由不同数目的黄烷醇聚合而成，在无机酸存在和加热处理下能产生红色的花青素。原花青素具有极强的抗氧化活性，是一种良好的氧游离基清除剂和脂质过氧化抑制剂，具有很强的抗氧化活性和自由基清除功能[1]。原花青素在体内其抗氧化、清除自由基的能力是VE的50倍、VC的20倍，它能防治80多种因自由基引起的疾病，包括心脏病、关节炎等，还具有改善人体微循环功能[2]。与其它抗氧化剂不同的是，它能通过血脑屏障，直接保护大脑的神经系统[3]。目前，原花青素已广泛应用于食品、药品、化妆品等领域[4]。

蓝莓，起源于北美，多年生灌木小浆果果树，因果实呈蓝色，故称为蓝莓。果实中含有丰富的营养成分，被联合国粮农组织列为人类五大健康食品之一[5]。特别是花青素与原花青素，可促进视网膜细胞中视紫质的再生成，可预防重度近视眼及视网膜剥离，并可增进视力[6]。因为它的营养价值，市场上出现了很多以蓝莓为主要成分的食品。但由于质量标准定的过于粗糙，导致产品质量良莠不齐，好坏无从分辨。笔者采用紫外可见分光光度法分析测定市售以蓝莓类产品中原花青素的含量，并对蓝莓为主要成分及蓝莓为辅料的蓝莓味产品原花青素含量进行检测对比，通过检测原花青素含量控制市售蓝莓类产品质量的可行性进行初步探索。

1主要材料、仪器设备及原理

1.1主要材料

蓝莓凝胶糖果、蓝莓果酱、蓝莓草莓混合果汁、蓝莓果汁（含原花青素26 mg/1 000 mL）、蓝莓果汁（含原花青素3 mg/1 000 mL）、蓝莓饮品、野生蓝莓果肉饮料、蓝莓酒、蓝莓醋、蓝莓馅饼：市售；蓝莓凝胶糖果空白：根据蓝莓凝胶糖果中配方除去蓝莓成分制作。

原花青素标准品（纯度99.4 %）：天津尖峰天然产物研究开发有限公司；其它化学试剂均为国产分析纯试剂。

1.2仪器设备

1.3试验原理

原花青素是含有儿茶素和表儿茶素单元的聚合物。原花青素本身无色，但经过用热酸处理后，可以生成深红色的花青素离子，在546 nm处测定原花青素在水解过程中生成的花青素离子，吸光度与原花青素含量成正比，故可测定原花青素的含量[7]。

2　方法

2.1原花青素标准溶液的制备

精密称取原花青素对照品10 mg，用甲醇溶解定容至于10 mL，制成1 mg/mL原花青素标准溶液。

2.2试验溶液的制备

精密称取硫酸铁铵2.00 g，加2 moL/L盐酸溶液溶解并稀释至100 mL，摇匀，即为2.0 %硫酸铁铵溶液；于100 mL容量瓶中加入约2/3的正丁醇，精密加入盐酸5.0 mL，用正丁醇定容至刻度，即为5 %HCL/正丁醇溶液。

2.3供试品溶液的制备

档案管理及保护部门的工作人员专业素养较差，档案管理部门在进行档案管理及保护时，没有选取有专业能力的工作人员，招聘的工作人员并没有相关的工作经验也没有学习过专门的档案管理及保护知识。这样的现象不仅是对档案保护的不负责，也是对档案信息安全的不负责。

精密称取蓝莓凝胶糖果、蓝莓凝胶糖果空白2 g，加温水熔化定容至10 mL，精密吸取1 mL，用甲醇稀释定容至10 mL。野生蓝莓果肉饮料、蓝莓草莓混合果汁，离心取上清液，用甲醇稀释；蓝莓果汁、蓝莓饮品、蓝莓醋用甲醇稀释；蓝莓果酱、蓝莓馅饼用甲醇搅拌后离心，取上清液甲醇稀释。

2.4标准曲线的制作

分别精密吸取原花青素标准溶液0.1、0.25、0.5、1.0、1.5 mL于10 mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀。分别精密吸取上述溶液1 mL，加入6 mL 5 %盐酸/正丁醇溶液、0.2 mL 2.0 %硫酸铁铵溶液置具塞试管中，将试管瓶口密塞，置沸水浴中精确加热40 min，冰浴冷却15 min；用1 mL甲醇、6 mL 5 %盐酸/正丁醇溶液和0.2 mL 2.0 %硫酸铁铵溶液做空白，于546 nm波长处测定吸光度。

2.5供试品中原花青素含量的测定

取供试品溶液各1 mL，以空白试剂为参比，按上述标准曲线的测定法，分别测定其吸光度值，计算样品中原花青素的含量。

3　结果

3.1标准曲线回归方程建立

用紫外分光光度计，以试剂空白参比，在546 nm波长处测定对照品溶液吸光度。

以吸光度为纵坐标，原花青素浓度为横坐标，绘制标准曲线见图1。

图1原花青素标准曲线Fig.1 The standard curve of the Procyanidines

得其线性回归方程式Y=3.594 2X+0.027，R2= 0.999 2，相关系数r=0.9996，表明原花青素在10μg/mL~ 150 μg/mL的范围内呈良好的线性关系。

3.2凝胶糖果空白原花青素测定结果

按上述原花青素含量测定方法，同时做3个重复测定，经测定吸光度值分别为0.012、0.009、0.011，凝胶糖果空白为根据蓝莓凝胶糖果中的其它成分定制，因此蓝莓凝胶糖果中的其它成分，对原花青素检测基本无干扰，本方法检测专属性强。

3.3稳定性试验

取蓝莓凝胶糖果测试溶液，以空白试剂为参比，按上述标准曲线的测定法，每隔10 min测定1次吸光度，观测其稳定性，结果表明在显色60 min时间内吸光度稳定，结果见表1。

表1稳定性试验结果Table 1 The result of stability experimentation

3.4精密度试验

精密吸取标准溶液（100 μg/mL）1 mL进行精密度试验，连续进行6次测定其吸光度，得RSD=0.61 %，RSD＜5 %，表明精密度好，结果见表2。

表2精密度试验结果Table 2 The result of precision experimentation

3.5重复性试验

取同一批次蓝莓凝胶糖果，配制6份供试品溶液，与标准曲线绘制测定方法相同，由标准曲线计算试样中原花青素的含量，检验该测定方法的重现性，得RSD=1.03 %，RSD＜5 %，表明重复性较好，结果见表3。

表3重复性试验结果Table 3 The result of reproducibility experimentation

3.6回收率试验

取蓝莓凝胶糖果4 g，加温水20 mL制成0.2 g/mL蓝莓凝胶糖果溶液；取上述溶液1 mL 5份，分别加入0.1、0.2、0.3、0.4、0.5 mL的浓度为1 mg/mL原花青素标准溶液，加甲醇溶解定容至10 mL。与标准曲线绘制测定方法相同，分别测定其吸光度，计算回收率，结果见表4，样品平均回收率均为101.43 %，RSD为1.74 %。

表4回收率试验结果Table 4 The result of recovery rate experimentation

3.7方法的检出限和定量限

重复测定空白试剂吸光度20次，计算空白试剂吸光度平均值为0.006；取1 mg/mL原花青素标准溶液1 mL，用甲醇稀释制成10 ug/mL低浓度贮备液；取上述溶液8、4、2、1、0.5 mL于10 mL量瓶中，制成一系列低浓度原花青素标准溶液，与标准曲线绘制测定方法相同，分别测定其吸光度；取3倍、10倍空白试剂吸光度值的浓度作为方法的检出限和定量限，并重复测定3次，结果见表5，原花青素的检测限为4 μg/mL，定量限为10 μg/mL。

表5方法检出限和定量限实验结果Table 5 The result of LOD and LOQ experimentation

3.8蓝莓类产品原花青素含量测定

精密吸取样品溶液1 mL，与标准曲线绘制测定方法相同，由标准曲线计算试样中原花青素的含量。各产品的原花青素检测结果见表6。

表6各产品原花青素检测结果Table 6 The Proanthocyanidins content in blueberry products

各产品原花青素含量检测结果见图2。

图2原花青素含量Fig.2 Concentration of PC

4　结论

通过试验可知，原花青素浓度在10 μg/mL~150μg/mL范围内，用紫外分光光度法测定蓝莓类产品中原花青素含量，适宜于蓝莓类产品中的原花青素测定。用该法检测蓝莓类产品试验结果表明，以蓝莓为主要成分的蓝莓类产品原花青素检出较高，蓝莓凝胶糖果的原花青素含量最高为3.64 mg/g；而以蓝莓为辅的蓝莓味产品原花青素检出很低，蓝莓醋的原花青素检出最低为0.03 mg/mL。因此，认为蓝莓为主要成分产品非常有必要标示原花青素含量，通过检测原花青素含量作为蓝莓类产品的质量控制指标是可行的。

参考文献：

[1]羊芹,杜泓璇,马尧,等.柳树叶的原花青素的抗氧化性研究[J].西南大学学报(自然科学版),2009,32(6):106-110

[2] Bakowska A,Kucharska A Z,Oszmianski J.The effects of heating,UV irradiation,and storage on stability of the anthocyanin-polyphenol copigment complex[J]. Food Chemistry,2003(81):349-355

[3]胡雅馨,李京,惠伯棣.蓝莓果实中主要营养及花青素成分的研究[J].食品科学,2006,27(10):601-602

[4]张妍,吴秀香.原花青素研究进展[J].中药药理与临床,2011,27(6): 114-115

[5]聂飞,韦吉梅,文光琴.蓝莓的经济价值及其在我国产业化发展中的前景探讨[J].贵州农业科学,2007,35(1): 117-119

[6]赵秀玲.蓝莓的成分与保健功能的研究进展[J].中国野生植物资源,2011,30(6):22

[7]黄雨三.保健食品检验与评价技术规范实施手册[M].北京:清华同方电子出版社,2003:1214-1215

The Determination of Proanthocyanidins Content in Blueberry Products on the Market

CHEN An-ping，HUANG Yong-jun，WANG Sheng-feng
（Zhejiang Jianfeng Health Tech. Co.，Ltd.，Jinhua 321000，Zhejiang，China）

Abstract：To determine the content of（Proanthocyanidins）in blueberry products on the market by ultraviolet spectroscopy，absorbencies of samples were detected at 546 nm，the result indicated that there was a good linear relationship between the absorbency and the content of PC in the range of 10 μg/mL-150 μg/mL. It's suggested to label the content of PC and use it as a key indicator for blueberry products.

Key words：blueberry；proanthocyanidins；ultraviolet spectroscopy

收稿日期：2015-03-10

DOI：10.3969/j.issn.1005-6521.2016.01.041

作者简介：陈安平（1984—），女（汉），工程师，硕士，主要从事保健食品、药品的质量控制。