7-ACA细菌内毒素检查方法探析

杨帅

哈药集团制药总厂 150000

7-ACA细菌内毒素检查方法探析

杨帅

哈药集团制药总厂 150000

要建立药用的中间体7-ACA细菌内毒素检查方法。本文是按照2010年的中国药典中的附录进行的本次试验分析，根据分析判定相应的结果。研究结果表明了供试品溶液的浓度，如果浓度是1.25mg/ml的时候，就说明对细菌内毒素的检查是没有任何的干扰的，使用药用中间体7-ACA的检查方法是可行的。

7-ACA；细菌内毒素；检查方法

药用中间体7-ACA是一种头孢类的抗生素前身，这种头孢类的抗生素是合成的，没有将细菌内的毒素进行有效的去除。内毒素就是一种威胁着人体生命安全的一种致病的因子，只要很少的内毒素就会引起生物或者是病理作用，因此现在7-ACA细菌内毒素的检查并且进行有效的控制，已经成为了研究的重点。本文的研究中，考虑到7-ACA的PH比较低，仅仅在3.0～5.0之间，但是细菌内毒素比较适合的PH值是在6.0～8.0之间，因此就需要进行供试品的调节，需要调节到6.0～8.0之间，之后才能够开始进行检测。

一、材料

药用中间体 7-ACA，这一药品的批号分别是 691312017、691312018和691312019。

鲎试剂1，这一试剂是TAL1，批号是1302130，是由湛江博康海洋生物有限责任公司制造的。

鲎试剂2，TAL2，湛江安度斯生物有限公司。

细菌内毒素工作标准品（CSE，中国食品药品生物检定院，批号为150601-201176，规格为100EU/支）。

细菌内毒素检测用水和碳酸钠。

二、方法和结果

（一）鲎试剂的灵敏度复核

在本次试验中使用的是2010年版本的中国药典中的第二部的附录进行的7-ACA细菌内毒素检查方法的研究，在试验的过程中，要求灵敏度要在 0.5～2.0λ之间，具体的试验结果如表 1所示：

表1：鲎试剂灵敏度实验结果

（二）供试品中细菌内毒素限制的确定

在本次产品中使用的是药用中间体，从成品的注射剂上来说，使用的是通用量，通用量是在1h内输入的药量不能够超过1.2g，在计算的过程中使用的是通用的量，也就是说 M=1.2g/（60kg·h）=20mg/（kg·h）。使用的计算公式也是有着具体的要求的，具体的计算公式是L=K/M，在本次试验中，具体的计算公式是：L=K/M=5EU/（kg·h）/20mg/（kg·h）=0.25EU/mg。

（三）供试品有效的稀释浓度

在本次试验中，使用的是鲎试剂，这一试剂的灵敏度是0.125EU/ml，最大的有效的稀释倍数是（MVD）=1，这时的C就是λ/L=（0.125EU/mL）/（0.25EU/mg）=0.5mg/mL。

（四）供试品干扰预实验

称取药用中间体7-ACA（批号为1312017）约100mg，用1%的无热原碳酸钠溶液溶解，制成40mg/mL的溶液，再加细菌内毒素检查用水按表2浓度稀释成供试品管（NPC）和含有2λ浓度细菌内毒素的供试品阳性对照管（PPC）。

取2个不同厂家的鲎试剂，分别置上述NPC和PPC中进行反应，每个浓度分别平行做 2支，另分别做阴性对照管（NC）和阳性对照管（PC）各2支，于37±1℃保温（60±2）min。则7-ACA干扰预实验结果见表2。

表2：7-ACA干扰预实验结果

由表2可见，药用中间体在浓度＞1.25mg/mL时对2个厂家鲎试剂会产生干扰作用；浓度≤1.25mg/mL时对2个厂家鲎试剂均无干扰作用。

（五）供试品干扰试验

根据预实验，将浓度为1.25mg/mL的供试品溶液进行干扰实验，实验结果见表3。

表3：7-ACA浓度为1.25mg/mL时干扰实验结果

由表3可见，3批供试品浓度为1.25mg/mL时，Et均在0.5～2Es范围内，可认为在此浓度下供试品对鲎试剂无干扰作用。

（六）样品检测

取3批7-ACA样品稀释至0.5mg/mL（即最低有效浓度），以灵敏度0.125EU/mL的TAL进行检测，菌符合规定。

三、讨论

7-ACA细菌内毒素的检查的方法是非常重要的，因为只有将细菌内毒素的检查方法了解透彻，才能够根据具体的方法，对细菌内毒素进行有效的控制，否则这种毒素就会危及到人体的安全，对人们的生命产生严重的威胁。要想将7-ACA细菌内毒素的研制方法科学的研究出来，就要对7-ACA有着了解。7-ACA就是7-氨基头孢烷酸，这是一种比较常见的头孢母核，在7-ACA里有两个活性的基团，在活性基团上需要连接不同的侧链，在这样的情况下，就构成了头孢类的抗生素，这种头孢类的抗生素在性质上也有着一定的差异，例如头孢呋辛、头孢三嗪等。

头孢菌素类的抗身素在使用的过程中是极为重要的，在发展速度上也比较惊人，已经被很多的医学研究者所重视，现在临床上经常使用的，头孢菌素有很多中，大约达到了50种以上，在临床中京杭使用的也达到了 30种以上，因此我们一定要重视7-ACA的研究，尤其是7-ACA细菌内毒素的检查的方法。在本次试验中使用的7-ACA就是由头孢菌素C裂解形成的，首先头孢菌通过发酵获得头孢菌素C。在裂解的过程中，使用的是酶法和化学法来获得粗品的研究，使用化学反应进行头孢菌素C锌盐的生产，在比较极端的环境下需要进行降温处理，使用的化学药品也是有毒有害的化学药品，经过这样的环节处理之后，人体使用之后就会带来很大的危害，需要得到我们的重视。使用酶法进行裂解是不会涉及到重金属的，在裂解的过程中，获得的粗品质量也比较好，污染小，裂解设备占地面积也比较小，因此在使用的过程中，一定要引起我们的注意。否则产生较大的环境污染，这样与国家对药品行业的要求是违背的。

7-ACA，中文名称7-氨基头孢烷，化学名称为3-乙酰氧甲基-5-硫-7-氨基-8-氧-1-氮杂二环辛-2-烯-2羧酸。是玉米浆通过头孢菌发酵得到的头孢菌素C，头孢菌素C在酰胺键处水解得到7-AcA，它是生产头V，头孢哌酮等半合抗类产品的重要中间体。7-ACA是头孢菌素关键性中间体，已成为当今国际抗生素市场的主角，按销售额计，以头孢菌素和青霉素为主的β-内酰胺类抗生素发展最快，约占世界抗生素市场的 70%。7-ACA是通过头孢菌素C裂解而成。豆油是在生产7-ACA过程中的一步，通过吸收豆油中的营养有益成分，可以养大细菌，再通过酶法生产出7-ACA中间体。

国内厂家采用化学法生产的主要原因是：国内不具有酶的生产能力，只能依靠进口酶，它的价格较高，使得酶法生产7-ACA成本与化学法相当，而在色泽外观上略逊于化学法，因此国内采用酶法技术的很少。从目前的国内主要生产厂家来看，化学法对环境污染严重以及职工劳动保护问题没有有效的治理措施，其经济效益在很大程度上是以牺牲环境和健康为代价获取的。

试验结果表明，药用中间体7-ACA用1%的碳酸钠调节pH后，稀释到适宜的浓度进行细菌内毒素检测对鲎试剂无干扰作用，可检测限值为 0.1EU/mg及以上，可以保证细菌内毒素被有效检出。

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R927.2

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1672-5018（2016）10-035-02