复方丹参片中非法添加的三七茎叶的检测探究

冯伟旭

哈药集团世一堂制药厂 150000

复方丹参片中非法添加的三七茎叶的检测探究

冯伟旭

哈药集团世一堂制药厂 150000

目的：为了检测复方丹参片中是否添加了三七茎叶，建立检测三七茎叶的方法。方法：用薄层色谱（TCL）的方法进行检查，使用高效液相色谱（HPLC）进行验证。结果：薄层色谱法与高效液相色谱法结果一致。结论：使用的这两种方法都比较准确、检验效率高、可重复进行实验，可以使用这两种方法进行复方丹参片中非法添加的三七茎叶的检测。

复方丹参片；非法添加；三七茎叶；检测研究

复方丹参片是治疗心血管病经常使用的处方药，这种复方丹参片中的成分有三七、丹参、冰片。三七是比较传统的珍贵药材，是经过多年成长的草本植物，三七并不是所有的部分都要入药，只有根和根茎可以入药，三七根是非常难得到的资源，与三七根相似的是三七茎叶，三七茎叶比三七根更容易得到，在价格上也就相对便宜，而且不易区分，这一特点就给一些不法分子可乘之机，使用三七茎叶来制作复方丹参片，因此，要使用薄层色谱法对复方丹参片中是否加入三七茎叶进行判断，用高效液相色谱法进行验证。

一、仪器与试药

Agilent1200型高效液相色谱仪；Millipore超纯水器；CamagReprostar3型薄层数码成像系统；薄层硅胶G板（烟台工业研究所）；乙腈（色谱纯），水（超纯水），其余试剂为分析纯；三七对照药材（批号为120941－200304），三七茎叶皂苷对照品（批号为0781－200201），三七皂苷R1对照品（批号为0745－200109），人参皂苷Rg1对照品（批号为 110703－200726），人参皂苷Rb1对照品（批号为110704－200420），人参皂苷Rb3对照品（批号为111686－200501）均由中国药品生物制品检定所提供；复方丹参片（A厂，批号为C8A032；B厂，批号070817；C厂，批号为8121177；D厂，批号为070501；E厂，批号为071003；F厂，批号为080322）。

二、方法与结果

（一）薄层色谱法

取复方丹参片5片，将丹参片的包衣除去，将里面的药碾碎，在碾碎的药中加入140mL乙醚，进行5min的超声处理，使用甲醇－水－冰醋酸，比例是46∶54∶1，ZorbaxSB－C18柱（250mm ×4.6mm，5μm），因为这种色谱柱的分离度好，保存的时间也比较适中，因此选择这种色谱柱。

试验中考察了流动相甲醇－水－冰醋酸，比例是50∶50∶1，乙腈（0.2%）—磷酸溶液，20∶80、甲醇－水－冰醋酸（46∶54∶1）对供试品预测定峰分离度的影响，其中流动相甲醇－水－冰醋酸（46∶54∶1）分离度好，保留一定的时间，在试品预测峰出峰后，在60min内就会出现杂质峰，这样会对样品的测试产生影响，为了不对样品的测试有影响，因此要采用梯度洗脱的方法。

将碾碎的丹参片用溶剂滤，溶剂蒸发，药渣加甲醇 25mL，加热回流15min，放冷，将滤液蒸干，把残渣加水25mL，微热使溶解，用水饱和的正丁醇25mL振摇提取，取正丁醇提取液，用氨试液25mL洗涤，再用正丁醇饱和的水洗涤2次，每次25mL，正丁醇液浓缩至干，残渣加甲醇1mL使溶解，作为供试品溶液；另取三七对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液；再取三七皂苷R1对照品、人参皂苷Rb1对照品、人参皂苷Rg1对照品、三七茎叶皂分别加甲醇制成每1mL含三七皂苷R11mg、人参皂苷Rb11mg、人参皂苷Rg11mg、三七茎叶10mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述6种溶液各1～3μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇－醋酸－水（4∶1∶5）放置分层的上层溶液为展开剂展开，展距15cm以上，将其取出，晾干，在上面喷上硫酸乙醇溶液（1→10），110℃下加热直到斑点出现的更加的清晰。在与三七茎叶皂苷对照品色谱相应位置上，显示不一致的斑点（E，F）；样品6，9色谱图中，在与三七茎叶皂苷对照品色谱相应位置上，显示完全一致的斑点。说明样品5，78，10，11不含三七茎叶皂苷，而样品6，9含三七茎叶皂苷。

（二）高效液相色谱法

1.色谱条件与系统适应性试验

以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，水为流动相B，按规定洗脱，检测波长为203nm。

2.溶液制备

溶液制备取人参皂苷Rb3对照品适量，精密称定，加甲醇制成1g/L的溶液；取人参皂苷Rg1对照品、人参皂苷Rb1对照品及三七皂苷R1对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1mL含人参皂苷Rg10.25mg、人参皂苷Rb10.30mg及三七皂苷R10.05mg的混合对照品溶液。取本品20片，除去包衣，研细，取约1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇 25mL，密塞，称定质量，超声处理（功率480W，频率40kHz）30min，放冷，再称定质量，用甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液。

3.测定法

分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10μL，注入到液相色谱仪里就可以了。经过测定法进行测试，薄层色谱法没有检测出复方丹参片里含有三七茎叶的成分，但是使用高效液相色谱法就检测出了人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1及三七皂苷R1，没有出现人参皂苷Rb3，与三七药材的高效液相色谱图进行比较，结果是一致的。

4.结果

使用薄层色谱法没有检测出三七茎叶皂苷的成分，使用高效液相色谱法也没有出现人参皂苷Rg1及三七皂苷R1对照品相对应的色谱峰，有与人参皂苷 Rb1对照品的色谱峰保留的时间相同，但峰高较三七药材低，有与人参皂苷Rb3对照品保留时间相同的色谱峰，这与三七茎叶高效液相色谱图一致。如图所示：

图1 高效液相色谱图

三、讨论

对于是否在复方丹参片中掺加三七茎叶的检测，主要是使用三七茎叶皂苷作为对比物的，如果检查出来的斑点与三七茎叶皂苷一致，那么检查结果就是复方丹参片里含有三七茎叶的成分，这时复方丹参片就是不合格产品。这次试验采用的是高效液相色谱法，是利用三七茎叶中的三七茎叶皂苷人参皂苷Rb3，通过实验，结果与薄层色谱法是一致的，这种现象说明三七茎叶皂苷的检出率与重现性非常好，利用这种方法检测复方丹参片中是否含有三七茎叶成分是合理的。

复方丹参片的主要成分中使用的是三七根或者根茎，但是三七的根是很难得到的，因为三七需要很长的生长年限才能使用，这时三七的药用效果才比较好，因此三七的根千金难求。这时很多不法分子就想出了使用相似药物三七茎叶来充当三七的根，三七茎叶的价格便宜，容易获得，使现在很多的复方丹参片中都有三七茎叶成分，因此医学研究者研究出了薄层色谱法来进行三七茎叶的研究，三七茎叶的的主要成分就是三七茎叶皂苷，因此就是对三七茎叶皂苷的检测，用高效液相色谱法进行进行检测，先进行实验，在对实验结果进行检测，两者结合，使实验结果更加的准确，这种方法是可行的。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[M].北京:化学工业出版社，2005:527.

[2]刘，韩金玉，常贺英，等.三七茎叶提取物中人参皂苷Rb3的分离指纹图谱[J].天津大学学报，2006，39（10）:1151.

R286

A

1672-5018（2016）11-213-02