宁波市设施蔬菜灰霉病菌对2种杀菌剂的抗性检测

谌江华，姚红燕，王丽丽，柴伟纲，孙梅梅（浙江宁波市农业科学研究院，315040)



宁波市设施蔬菜灰霉病菌对2种杀菌剂的抗性检测

谌江华，姚红燕，王丽丽，柴伟纲，孙梅梅
（浙江宁波市农业科学研究院，315040)

摘要：为明确宁波市设施蔬菜灰霉病菌的抗药性现状，采用菌丝生长速率法测定了宁波市6个不同地区共46个菌株对腐霉利和嘧霉胺2种常规防治药剂的抗药性。试验结果表明，测试的灰霉病菌对腐霉利已产生了很高的抗性，整体抗性频率为80.43%，高抗频率为22.84%，对嘧霉胺的抗性则相对较低，整体抗性频率为34.78%，高抗频率为1.67%；不同地区间灰霉病菌的抗药性差异较大，6个地区以镇海的抗药性最为严重，慈溪、鄞州两地的抗药性则相对较轻。结果还发现，部分灰霉病菌株对腐霉利和嘧菌胺2种杀菌剂产生了双重抗性，镇海的双重抗性频率最高，达到了60%。为此，在设施蔬菜生产上应合理更换并交替使用与此2种药剂无交互抗性的药剂，以有效控制灰霉病。

关键词：设施蔬菜；灰霉病菌；腐霉利；嘧霉胺；抗药性

谌江华（1981-），男，农艺师，硕士，主要从事农作物病虫害综合防控技术研究与推广工作，E-mail：jhchen20@163.com

灰霉病病原菌为灰葡萄孢（Botrytis cinerea Pers.)，可为害黄瓜、番茄、茄子、甜椒、韭菜、莴苣、洋葱等多种蔬菜作物，发生范围广，为害十分严重，给蔬菜生产造成了很大损失[1]。近年来，该病在宁波市设施蔬菜产区发生普遍。目前控制该病害仍以化学药剂防治为主，但因灰霉病菌具有繁殖速率高、遗传变异大和适合度高等特性[2]，长期连续大量用药使得灰霉病菌对多种主要防治药剂产生了抗药性，甚至出现了多重抗药性[3，4]。腐霉利和嘧霉胺是宁波市在蔬菜生产上用于防治灰霉病的主要常规防治药剂，随着这2种药剂的连续大量频繁使用，灰霉病菌对二者产生不同程度的抗性，防治效果逐年下降。灰霉病菌的抗药性检测是一项普通的日常性工作，但其对后续的病害防治用药指导具有十分重要的作用，虽然已经有不少类似的研究，但是不同地区的病菌抗药性不同。即便同一地区，随着时间的发展，病菌的抗药性也会发生变化。本研究的目的在于通过对当前宁波地区灰霉病菌对腐霉利和嘧霉胺2种杀菌剂的抗药性的检测，以明确宁波市当前灰霉病菌的抗药性现状，为设施蔬菜灰霉病的田间用药和综合防治提供理论依据。

1　材料与方法

1.1试验材料

①供试菌株a.菌株采集与分离。从宁波市慈溪、镇海、鄞州、宁海、象山、奉化6地设施蔬菜上采集并分离纯化得到灰霉病菌株46个，用PDA斜面培养基保存到4℃冰箱中备用。

b.敏感菌株。黄瓜灰霉病菌，来源于浙江省化工研究院。

②供试药剂与培养基a.供试药剂。50%腐霉利可湿性粉剂，商品名速克灵，日本住友化学工业株式会社生产；40%嘧霉胺悬浮剂，商品名施佳乐，拜耳作物科学公司生产。

b.培养基。菌株分离培养和腐霉利抗药性测定采用PDA培养基，嘧霉胺测定培养基按Chapenland 等[5]的方法：葡萄糖10g、琼脂15g、KH2PO42g、K2HPO41.5g、MgSO4·7H2O5g、（NH4)2SO41g，加水至1000mL。

1.2试验方法

灰霉病菌的抗药性测定采用FAO推荐的菌落直径法（菌丝生长速率法)，即测定抑制菌丝生长50%时杀菌剂的有效抑制中浓度（EC50)，分别测定敏感菌和各地菌株的EC50。各菌株先在PDA平板上活化培养5 d，然后在同一圆周上取直径0.5 cm的菌丝块并转移到含系列质量浓度的培养基平板中央，25℃恒温箱中黑暗培养3 d后测量各菌落直径（cm)，取平均值计算药剂对菌丝生长的抑制率（%)。利用DPS软件[7]，通过浓度对数值（)与抑制率几率值（)之间的线性回归关系，求出毒力回归方程和有效抑制中浓度（EC50)。依据纪明山等[7]的判定方法根据各地菌株EC50值与敏感菌EC50值的倍数进行抗性水平判定，即测试菌株的EC50值为敏感菌株的5倍以下为敏感（S)，5～10倍为低抗（LR)，10～40倍为中抗（MR)，40倍以上为高抗（HR)。根据判定结果分析各地菌株抗性频率、抗性表型比例及同时对两种药剂产生抗性的双重抗性频率，抗性频率（%)=抗性菌株数/总菌株数×100%；抗性表型比例（%)=各抗性表型菌株数/总菌株数×100%；双重抗性频率（%)=双重抗性菌株数/决菌株数×100%。

2　结果与分析

2.1灰霉病菌对腐霉利和嘧霉胺的抗性频率

从图1可以看出，所测定的设施蔬菜灰霉病菌对腐霉利和嘧霉胺均产生了不同程度的抗药性，其中对腐霉利已产生了严重的抗性，其抗性频率达到50%以上，而对嘧霉胺的抗性频率则相对较低，除镇海菌株达到60%外，其余各地抗性频率均在40%以下。从不同的地区菌株抗性频率差异来看，镇海区灰霉病菌株对2种杀菌剂的抗性频率均最高，慈溪菌株对腐霉利的抗性频率最低，而宁海菌株对嘧霉胺的抗性频率最低，仅为16.67%。

2.2灰霉病菌对腐霉利和嘧霉胺的抗性水平

从图2可以看出，6个地区灰霉病菌对腐霉利均产生了高抗菌株，高抗频率均在10%以上，其中镇海的高抗频率最高，达40%；其次为奉化菌株，高抗频率为28.6%。慈溪菌株的抗性水平则较低，其高抗频率较低，而敏感频率则最高。

从图3可以看出，宁波市设施蔬菜灰霉病菌对嘧霉胺的整体抗性水平比较低。除镇海菌株产生了高抗菌株外，其余均未出现高抗菌株，且敏感频率均在60%以上。6个地区灰霉菌株中，宁海菌株对嘧霉胺的抗性水平最低，检测未发现有中高抗菌株，敏感菌株占比达83.3%。

2.3灰霉病菌对腐霉利和嘧霉胺的双重抗性

从图4可以看出，测定的宁波6地设施蔬菜灰霉病菌均有菌株对腐霉利和嘧霉胺同时产生了抗性，即双重抗性，其中以镇海菌株的双重抗性频率最高，达到60%；其次为象山菌株；而慈溪菌株则最低，其双重抗性频率为14.29%。

图1　不同地区灰霉病菌对2种杀菌剂的抗性频率

图2　不同地区灰霉病菌对腐霉利的抗性水平

图3　不同地区灰霉病菌对嘧霉胺的抗性水平

图4　不同地区灰霉病菌对2种杀菌剂的双重抗性

3　讨论与结论

通过菌丝生长速率法测定了宁波市设施蔬菜灰霉病菌对常规防治药剂腐霉利和嘧霉胺的抗药性，结果表明，测定的灰霉病菌对腐霉利和嘧霉胺均已产生了不同程度的抗性，其中对腐霉利的抗性十分严重，整体抗性频率为80.43%，高抗菌株频率为22.84%；对嘧霉胺的抗性则相对较轻，整体抗性频率为34.78%，高抗菌株频率为1.67%。且各地灰霉病菌中均已有菌株对2种药剂产生了双重抗性，平均双重抗性频率为32.61%。同时，不同地区灰霉病菌的抗药性差异较大，6个地区中以镇海的抗药性最为严重，抗性频率和高抗频率均最高，而慈溪、鄞州两地则相对较轻。

腐霉利和嘧霉胺在防治蔬菜灰霉病上已连续使用多年，特别是近年来宁波市各地设施蔬菜灰霉病发生严重，这2种药剂频繁大量使用，且腐霉利常作为设施蔬菜防治灰霉病的烟熏剂大量连续使用，导致灰霉病菌的抗药性迅速上升。一般来说，高抗菌株频率达20%以上，就说明药剂已没有使用价值[8]。本试验检测出的腐霉利高抗菌株比例达22.84%，表明该药剂已不适合在宁波市设施蔬菜灰霉病的防治。因此，为了更好地有效控制设施蔬菜灰霉病，降低经济损失，应根据不同地区的抗药性水平积极采取相应措施，合理更换并交替使用与此2种药剂无交互抗性的药剂。

参考文献

[1]丁中，刘峰，王会利，等.番茄灰霉菌的多重抗药性研究[J].山东农业大学学报：自然科学版，2001，32（4)：452-456.

[2]赵晓军，任璐，周建波，等.山西省蔬菜灰霉病菌对嘧霉胺的抗药性检测[J].植物保护，2012，38（5)：120-123.

[3]刘波，叶钟音，刘经芬，等.对多菌灵、速克灵具多重抗性的灰霉病菌菌株性质的研究[J].南京农业大学学报，1994，16（3)：50-54.

[4]纪明山，程根武，张益先，等.灰霉病菌对多菌灵和乙霉威抗性研究[J].沈阳农业大学学报，1998，29（3)：213-216.

[5]Chapeland F,Fritz R,Lanen C,et al.Inheritance and mechanisms of resistance to Ani1inopyrimidine fungicides in Botrytis cinerea(Botryotinia fuckeliana)[J].Pestic Biochem Physiol,1999(64):85- 100.

[6]唐启义，冯明光.实用统计分析及其DPS数据处理系统[M].北京：科学出版社，2002：43-62.

[7]纪明山，祁之秋，赵平，等.番茄灰霉病菌对嘧霉胺的抗药性试验[J].沈阳农业大学学报，2002（5)：345-347.

[8]郝永娟，霍建飞，高苇，等.天津地区番茄灰霉病菌对常用杀菌剂的抗性检测及治理对策[J].天津农业科学，2015，21 （10)：87-92.

Resistance Detection of Botrytis cinerea to Two Fungicides on Protected Vegetables of Ningbo City

CHEN Jianghua,YAO Hongyan,WANG Lili,CHAI Weigang,SUN Meimei(
Ningbo Academy of Agricultural Sciences,Zhejiang 315040)

Abstract:For understanding the status of fungicide resistance of Botrytis cinerea from protected vegetables,we determined the resistance of 46 isolates collected from 6 different areas of Ningbo to two conventional fungicides procymidone and pyrimethanil,by using mycelium growth rate method.The results showed that,B.cinerea from protected vegetables was highly resistance to procymidone,with the total resistance frequency of 80.43% and high-level resistance frequency of 22.84%.The resistance to pyrimethanil was relatively low,with the total resistance frequency of 34.78% and high-level resistance frequency of 1.67%.B.cinerea collected from different areas had greatly different fungicide resistance,and the resistance of Zhenhai was most seriously among the 6 areas,while the resistance of Cixi and Yinzhou was lighter relatively.The results also showed that,some isolates had double -resistance to procymidone and pyrimethanil.The double-resistance of Zhenhai was the highest with the frequency of 60%.Therefore,we should reasonably change and alternatively use the fungicides having no interaction resistance with procymidone and pyrimethanil in greenhouse vegetable production for effective control ofB.cinerea .

Key words:Protected vegetables;Botrytis cinerea ;Procymidone;Pyrimethanil;Fungicide resistance

收稿日期：2015-12-11

基金项目：宁波市农科教结合项目（2014NK34）

DOI:10.3865/j.issn.1001-3547.2016.04.032

中图分类号：S436.3

文献标识码：A

文章编号：1001-3547（2016)04-0082-03