CD4+CD25+CD127-调节性T细胞在维吾尔族和汉族晚期非小细胞肺癌患者外周血中的表达及其临床意义

段惠洁,卡哈尔江·阿不都外力,周　欣

(新疆医科大学附属肿瘤医院,新疆 乌鲁木齐 830011)



CD4+CD25+CD127-调节性T细胞在维吾尔族和汉族晚期非小细胞肺癌患者外周血中的表达及其临床意义

段惠洁,卡哈尔江·阿不都外力,周欣

(新疆医科大学附属肿瘤医院,新疆 乌鲁木齐 830011)

[摘要]目的探讨维吾尔族和汉族晚期非小细胞肺癌患者外周血中CD4+CD25+CD127-调节性T细胞(Treg)的表达及临床意义。方法采用流式细胞术测定58例Ⅲb、Ⅳ期非小细胞肺癌患者和20例健康人外周血中CD4+CD25+CD127-Treg的水平并进行比较，并进一步比较分析维吾尔族和汉族肺癌患者间外周血中CD4+CD25+CD127-Treg的水平。结果肺癌患者外周血中CD4+CD25+CD127-Treg占CD4+T细胞的百分率显著高于健康人(P<0.05)。维吾尔族与汉族肺癌患者外周血中CD4+CD25+CD127-Treg占CD4+T细胞的百分率比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论肺癌患者中异常增高的Treg细胞抑制了机体正常的抗肿瘤免疫效应，并与肺癌的进展有关，但在不同民族的晚期非小细胞肺癌患者中尚未观察到Treg细胞水平存在差异。

[关键词]非小细胞肺癌；调节性T细胞；流式细胞术；CD4+CD25+CD127-

调节性T细胞( Regulatory T cells,Treg)是一群具有免疫抑制和调节功能的CD4+T淋巴细胞，根据CD4+T淋巴细胞表面表达的不同可分成3个亚群，CD4+CD25+CD127-是其中的一个亚群。近些年研究发现，CD127-是一个与Treg相关性较好的抗原，并且有检测简单、经济、准确等优点，因而现在一般用CD4+CD25+CD127-来代表调节性 T 细胞，可以去除高表达CD25+的效应性T细胞，真实准确地反映机体内CD4+CD25+Treg的水平[1]。自Sakaguchi等[2-3]首次提出CD4+CD25+Treg的概念以来，愈来愈多的研究和发现证实Treg在生理和病理状态下均具有重要的免疫调节作用[2]。尤其在病理情况下，由于Treg的免疫负调节作用增强，反而促进肿瘤的生长，抑制抗肿瘤免疫效应[4]。本研究通过对维吾尔族和汉族晚期非小细胞肺癌患者血浆中Treg淋巴细胞亚群的检测，分析Treg水平在不同民族之间的表达有无差异，同时探讨Treg对晚期肺癌患者免疫功能的影响及临床意义。现将结果报道如下。

1临床资料

1.1一般资料选择2014年4月—2015年4月在本院经细胞学或组织学确诊的未经手术和任何治疗的Ⅲb、Ⅳ期非小细胞肺癌患者58例作为肺癌组，年龄32～79(63.93±8.71)岁。其中汉族30例，男16例，女14例；年龄32～79(63.37±10.35)岁；鳞癌10例，腺癌 20例；Ⅲb期6例，Ⅳ期24例。维吾尔族28例，男21例，女7例；年龄46～79(64.54±6.66)岁；鳞癌7例，腺癌 21例；Ⅲb期5例，Ⅳ期23例。所有患者排除自身免疫性疾病，采血前未接受过化疗、放疗、手术、免疫抑制剂和其他对免疫系统有影响的药物治疗，无其他内科合并症。同期选择本院门诊体检血常规、 胸片和腹部B超、 心电图、 尿常规均无异常的健康人20例作为健康组，男12例，女8例；年龄47～75(62.28±9.46 )岁。

1.2主要仪器及试剂采用美国Beckman公司流式细胞仪，日本日立公司7600-120E全自动生化仪，KDC-1042离心机，CHA-S恒温振荡器。购自eBioscience公司荧光素标记鼠抗人单克隆抗体(FITC-CD4、APC-CD25、PE-CD127)，Beckman公司红细胞裂解液，APC、PE和FITC标记的小鼠IgG同型对照，Fix/Perm 试剂盒。

1.3实验方法采集所有受试者外周静脉血，用枸橼酸钠(EDTA)抗凝，进行CD4+CD25+CD127-Treg检测。样品测定管中各加入100 μL抗凝血，然后每管中加入相应的抗体(FITC-CD4、APC-CD25、PE-CD127)各10 μL，振荡混匀，室温避光孵育15 min，同型空白对照测定管中不加抗体。各管加入红细胞裂解液500 μL，振荡混匀，室温避光10 min，再加入PBS缓冲液1 mL，2 000 r/min离心5 min弃上清液，加入PBS缓冲液500 μL混匀后，流式细胞仪检测样本。Cellquest软件收获细胞并进行分析数据，记录CD4+CD25+CD127-Treg占CD4+T细胞的百分率。

2结果

2.1肺癌组与健康组外周血中CD4+CD25+CD127-Treg检测结果比较肺癌组外周血中CD4+CD25+CD127-Treg占CD4+T细胞的百分率为(2.374±1.208)%，健康组外周血中CD4+CD25+CD127-Treg占CD4+T细胞百分率为 (0.410±0.232)%，2组比较差异有统计学意义(P<0.05)。见图1。

图1　健康组外周血CD4+CD25+CD127-Treg占

2.2维吾尔族肺癌与汉族肺癌患者外周血中CD4+CD25+CD127-Treg检测结果比较维吾尔族肺癌患者外周血中CD4+CD25+CD127-Treg占CD4+T细胞的百分率为 (2.354±1.157)%，汉族肺癌患者外周血中CD4+CD25+CD127-Treg占CD4+T细胞的百分率为 (2.393±1.273)%，二者比较差异无统计学意义(P>0.05)。 见图2及图3。

图2　汉族肺癌患者外周血CD4+CD25+CD127-Treg占

图3　维吾尔族肺癌患者外周血CD4+CD25+CD127-Treg占

3讨论

肺癌是目前世界上最为常见的肿瘤之一，在我国，逐年升高的发病率和病死率使其居于恶性肿瘤首位[5]。近年随着肺癌治疗水平的不断提高，在手术、化疗、放疗以及靶向治疗等的综合治疗手段下，晚期非小细胞肺癌患者的生存期较前有所延长，但是总的治疗效果仍不尽如人意。研究显示，机体的免疫功能与肺癌的发生发展有密切关系，当患者的免疫功能低下或受抑制时，肺癌的发病率增高；而在体内肿瘤进行性生长时，患者的免疫功能受抑制，两者互为因果。同时，肺癌细胞有逃避免疫监视的机制，肺癌的发生与机体免疫抑制状态密切相关[6]。有研究证实Treg在机体中发挥了重要的免疫抑制作用，无论在免疫性疾病中还是在肺癌的发生发展中[7]。

本研究结果显示肺癌组患者外周血中CD4+CD25+CD127-Treg水平明显高于健康组，这与国内外学者相关报道一致，且分期越晚Treg水平越高[8-9]。另有研究报道，在胃癌、食管癌、卵巢癌等多种实体瘤患者外周血中CD4+CD25+CD127-Treg水平也较健康人有明显升高[10-11]。

我国是一个多民族聚集的国家，不同民族的遗传背景在大致相似的基础上又各有地方特色。 Torcia等[12]研究报道，在非洲西部弗拉尼和莫西斯两种不同民族中，外周血Treg在弗拉尼族中呈现低表达，而在莫西斯民族中则相反，故因此导致弗拉尼族对疟疾的低敏性，增加了该民族的抗感染性疾病的能力，该研究显示不同民族间外周血Treg的表达存在着差异。在新疆的众多少数民族中，以维吾尔族人口数目居首。维吾尔族在饮食习惯、身体素质、遗传基因等诸多因素上均与汉族有所不同，而针对维吾尔族晚期非小细胞肺癌患者的Treg水平的研究还相对较少，并缺乏民族间的对照研究。本研究发现，晚期非小细胞肺癌患者中，维吾尔族和汉族肺癌患者外周血中CD4+CD25+CD127-Treg占CD4+T细胞的百分率比较差异无统计学意义。可能因本研究病例数较少，尚不能全面反映两民族之间的差异，还有待进一步大样本量临床研究加以证实。

综上所述，晚期肺癌患者体内CD4+CD25+CD127-Treg占CD4+T细胞的比例显著升高，使免疫负调节作用增强，抑制了机体的抗肿瘤免疫效应，介导了肿瘤免疫逃逸，可促进肿瘤的生长。因此，针对患者体内异常升高的Treg数量和功能进行干预，或许可作为机体抗肿瘤免疫治疗的一种方法。在维、汉两个不同民族间进行对照研究，有助于了解不同民族之间免疫状态的异同，进一步更好地指导临床治疗决策，帮助临床医师进行更精准的预后判断。并针对两民族间不同的免疫状态，适时进行免疫干预治疗，提高晚期非小细胞肺癌的生存率，为临床治疗提供参考依据，为更多患者带来益处。

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[3]Sakaguchi S，Sakanguchi N，Asano M，et al. Immunological self-tolerance maintained by activated T cells expressing IL-2 receptor alpha-chains(CD25).Breakdown of a single mechanism of self-tolerance causes various autoimmune disease[J]. J Immunol，1995，155(3)：1151-1164

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Expression of CD4+CD25+CD127-regulatory T cells and clinical significance in peripheral blood in the Uygur and Han patients with advanced non-small cell lung cancer

DUAN Huijie, KAHAR Jiang·ABUDU Waili, ZHOU Xin

(The Affiliated Tumor Hospital of Xinjiang Medical University, Urumqi 830011, Xinjiang, China)

Abstract:Objective It is to investigate the expression and clinical significance of CD4+CD25+CD127- regulatory T cells (Treg) in peripheral blood in the Uygur and Han patients with advanced non-small cell lung cancer. Methods The levels of CD4+CD25+CD127- Treg in peripheral blood of 58 patients with advanced non-small cell lung cancer and 20 healthy subjects were detected by flow cytometry and compared between the two groups. Then the levels of CD4+CD25+CD127- Treg in the Uygur and Han patients were compared and analyzed. Results The percentage of CD4+CD25+CD127- Treg in peripheral blood of patients with lung cancer was significantly higher than that of healthy people (P<0.05). There was no significant difference in the percentage of CD4+CD25+CD127- Treg in peripheral blood between the Uygur and Han patients with non-small lung cancer (P>0.05). Conclusion The abnormally increased Treg cells in lung cancer patients can inhibit the immune response of body to tumor, and it is related to the progress of lung cancer. There was no significant difference in the level of Treg cells in patients with advanced non-small cell lung cancer in different nationalities.

Key words:non-small cell lung cancer; regulatory T cells; flow cytometry; CD4+CD25+CD127-

[收稿日期]2015-09-01

[中图分类号]R734.2

[文献标识码]A

[文章编号]1008-8849(2016)09-0929-03

doi:10.3969/j.issn.1008-8849.2016.09.006

[基金项目]新疆医科大学创新基金项目(XJC201399)

[作者简介]段惠洁，女，主治医师，硕士，研究方向为肿瘤的临床诊断与治疗。[通信作者]周欣，E-mail：yutianjinzhong@126.com