UPLC-MS/MS法检测抗疲劳类保健品中4种化学药物

●周玉玲汤祝华康蕊姜海燕

UPLC-MS/MS法检测抗疲劳类保健品中4种化学药物

●周玉玲1汤祝华1康蕊1姜海燕2

目的 建立检测抗疲劳类保健品中4种非法添加化学药物的方法。 采用超高效液相色谱－质谱串联法（UPLC-MS/MS法），Acquity UPLC C18（1.7μm，2.1*50mm）色谱柱，乙腈－0.1%甲酸水为流动相，进行梯度洗脱，选择正离子反应监测扫描方式检测。育亨宾、达泊西汀、甲磺酸酚妥拉明、二乙氨基前他达拉非方法的平均回收率为97.8%、98.6%、102.6%、99.1%；RSD分别为1.2%、2.6%、1.9%、2.1%（RSD＜5%，n=6）。方法的线性范围均为1～50ng/mL，相关系数r 均为0.999。结果表明，该方法快速、简单、准确地检测出4种非法添加药物。

UPLC-MS/MS；非法添加；抗疲劳

目前，国家食品药品监督总局制定了保健食品中可能非法添加的物质名单（第一批），共11种化学物质。目前已有较成熟的HPLC-MS/ MS测定方法，而针对于以上11种以外的化学物质，如育亨宾、达泊西汀、甲磺酸酚妥拉明、二乙氨基前他达拉非等非法添加物，经营者公然宣称：“不属于国家相关政策禁止的范围”、“不会被检测出来”。因此，若这几种化学成分一旦被添加入保健食品，其隐蔽性和危害性不言而喻[1-10]。

1 仪器与试剂

Waters Vevo TQ-S型超高效液质联用仪，配有液相泵、自动进样器及二极管阵形列检测器。乙腈为色谱纯，水为超纯水。达泊西汀对照品购自武汉贝尔卡生物医药有限公司；盐酸育亨宾、甲磺酸酚妥拉明、二乙氨基前他达拉非对照品购自中国食品药品检定研究院，盐酸育亨宾,批号：520024－201401；甲磺酸酚妥拉明，批号：100110-201103；二乙氨基前他达拉非，批号：520043－201401。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：AcQuity UPLC C18（1.7μm，2.1*50mm），流动相：乙腈－0.1%甲酸水，流速0.3 ml/min，柱温：40℃，进样量1.0μl。

2.2 质谱条件

电喷雾离子源（ESI）正离子模式，采用多反应监测（MRM）扫描模式采集信号，毛细管电压：3.0KV，去溶剂温度：500℃。4种化学药物的母离子、子离子、锥孔电压、碰撞电压见表1

表1 4种化学药物的母离子、子离子、锥孔电压、碰撞电压

2.3 对照品储备溶液的制备

准确称取盐酸育亨宾、达泊西汀、甲磺酸酚妥拉明、二乙氨基前他达拉非对照品约10 mg，分别置5 mL容量瓶中，用乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀，得上述各对照标准储备液。

2.4 供试品溶液的制备

2.4.1 液体试样

准确吸取液体制剂5ml，置于25 ml容量瓶中，用乙腈定容至刻度，摇匀后经0.22μm微孔滤膜过滤，取滤液待测。

2.4.2 固体试样

准确称取固体剂粉末状（片剂去除包衣后粉碎研细，，胶囊去除囊壳取内容物研细混匀）约1g，置于25 ml容量瓶中，用15 ml乙腈超声30min，用乙腈定容至刻度，摇匀后经0.22μm微孔滤膜过滤，取滤液待测。

2.5 线性关系与检出限

吸取上述各对照标准储备液1mL置100 mL容量瓶中，用乙腈稀释至刻度线，摇匀，得育亨宾、达泊西汀、甲磺酸酚妥拉明、二乙氨基前他达拉非4种混合对照(以下称4种混合对照)标准混合中间液，浓度约为20 μg/ mL。

吸取4种混合对照标准混合中间液0.5 mL置100 mL容量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度线，摇匀，得4种混合对照标准混合使用液，浓度约为100 ng/ mL。

分别吸取4种混合对照标准混合使用液0.1 mL、0.5mL、1mL、2mL、5 mL分别置于10 mL容量瓶，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，得系列标准混合曲线。

4种化学药物线性关系

2.6 精密度试验

用浓度为10 ng/ mL的4种混合对照液，连续进样6次，记录峰面积。结果表明，育亨宾、达泊西汀、甲磺酸酚妥拉明、二乙氨基前他达拉非峰面积的RSD分别为1.2%、2.6%、1.9%、2.1%。

2.7 回收率试验

取不含待测物的保健品样品，加入上述4种混合对照液，计算回收率。结果表明，育亨宾、达泊西汀、甲磺酸酚妥拉明、二乙氨基前他达拉非的平均回收率为97.8%、98.6%、102.6%、99.1%。

2.8 样品测定

取样品适量，按2.4中方法制成供试品溶液，进样测定，与上述4种化学药物的色谱峰和质荷比进行比较，结果未发现市售137批抗疲劳保健品检出以上四种化学物质，说明海南市场中抗疲劳类保健品质量情况较好。

3 结论

由于高效液相色谱法的灵敏度有限，无法准确地进行测定。且在抗疲劳保健品中，一是可能各组分含量均为少量，达不到液相的检出限，容易蒙混过关。二是由于液相方法组份多时，峰分不开，耗时长等，开发简单、快捷的质谱方法，便于监督保健品质量，为百姓的生活提供安全保障。建立超高效液相-质谱联用方法，对抗疲劳保健品育亨宾、达泊西汀、甲磺酸酚妥拉明、二乙氨基前他达拉非4种非法添加化学物质进行测定，达到有效的监控。

（作者单位：1海南省食品检验检测中心，海南省实验动物中心；2海口市第四中学高中部）

[1]王静文，黄湘鹭，曹进等.超高效液相色谱法同时测定减肥类保健食品中 非法添加的 25 种药物[J]. 色谱, 2014,2(32)：151-156.

[2]胡婷婷，芦春梅、杨璐等.HPLC-MS/MS法检测抗疲劳类保健食品中达泊西汀[J]. 中国卫生检验杂志, 2015,5(10)：1528-1529.

[3]宁霄, 张伟清, 王钢力等.HPLC-MS/MS法检测抗疲劳保健食品中非法添加的8种壮阳类化合物[J]. 农产品加工, 2015,6(6)：45-47.

[4]黄朝辉，蔡丹丹，陈仲益等.保健食品中他达拉非类似物去甲他达拉非的检测研究[J]. 中国药学杂志, 2015,2(4)：371-374.

[5]张剑，罗进，耿萌辉等.反相高效液相色谱法同时测定壮阳类保健品中 达泊西汀和4种PDE5抑制剂[J]理化检验-理化分册, 2014,50(3)：323-325.

[6]万春花，魏强，龙洲雄等.高效液相色谱同时检测保健食品 中五种违禁的性功能药物成分[J]食品科技, 2008,34(3)：275-279.

[7]宁霄, 张伟清, 王钢力等.保健食品中非法添加药物检测现状及筛查策略研究[J]. 食品安全质量检测学报, 2015,5(5)：1876-1881.

[8]向智敏，张骊，祝明等.HPLC和LC-MS/MS法鉴定锁固精丸中非法添加的西地那非衍生物[J].中国现代应用药学, 2010,2(27)：167-169.

[9]曲晓宇，董雷，张四喜等.HPLC-MS/MS法同时检测抗疲劳药物及保健品中非法添加的7种壮阳类化学药物[J].药品监督, 2010,2(27)：3129-3130.

[10]董永成，杜士明，陈永顺等.中在药及保健品非法添加化学成分的类型、危害及对策[J].时珍国医国药, 2006,17(8)：1601-1602.