食品中金黄色葡萄球菌定量检测方法的研究

王洪亮，程艳宇，王梦晓（天津市乳品食品监测中心，天津300381）



食品中金黄色葡萄球菌定量检测方法的研究

王洪亮，程艳宇，王梦晓
（天津市乳品食品监测中心，天津300381）

摘要：探讨一种金色葡萄球菌定量检测的操作方法。采用GB4789.10-2010《食品安全国家标准食品微生物学检验金黄色葡萄球菌检验》第二法Baird-Parker平板法，以接种量0.3、0.3、0.4mL和0.1 mL两种方法对同一浓度的金色葡萄球菌进行检测，将各数据进行记录对比分析。计数结果在10、100 CFU/mL和1 000 CFU/mL 3个数量级菌浓度上两种操作方法相近，其中接种量0.1mL的方法计数值较高，但是此方法操作简单，涂布均匀。在实际非仲裁检验过程中，经过方法验证，可以根据需要采用此方法，以减轻工作量。

关键词：食品安全；金黄色葡萄球菌；定量；方法比较

金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）属于葡萄球菌属，是一种重要的病原菌，是典型的革兰氏阳性菌，有较强的抵抗力。金黄色葡萄球菌营养要求不高，且有高度的耐盐性，容易污染肉类、水产品、乳品等食品，在世界各个国家中，由金黄色葡萄球菌引起的食物中毒在细菌性食物中毒中均占较大比例［1-2］，金黄色葡萄球菌引起的食物中毒已成为世界性的公共卫生问题。

目前关于食品中金黄色葡萄球菌的定量检测方法主要有Baird-Parker平板计数法［3］、MPN计数法［3］、测试纸片法［4］、显色培养基计数法等。由于国家的致病菌限量标准［5］中金色葡萄菌定量检测的方法都为Baird-Parker平板计数法，但是接种量为0.3、0.3、0.4 mL，涂布不容易均匀，耗时，工作量大。为了省时，减小工作量，对接种量0.1 mL的操作方法进行比较分析研究，添加非目标菌进行比较分析，同时比较研究了在食品中的应用。旨在探求一种适应食品微生物实验室检验要求的省时省力准确的方法，为食品检测方法的研究及应用积累一定的经验，为今后金黄色葡萄球菌的检测工作提供一定参考。

1　材料

1.1样品

生鲜乳和乳粉。

1.2培养基

营养琼脂、BHI肉汤、Baird-Parker琼脂基础、卵黄亚碲酸钾增菌剂、冻干血浆，革兰氏染色液：北京路桥技术股份有限公司。

1.3试验菌株

金黄色葡萄球菌（ATCC 25923）、表皮葡萄球菌（CMCC 26069）：广州环凯微生物科技有限公司。

1.4仪器设备

高压灭菌锅：日本雅马拓；隔水式恒温培养箱：上海一恒科技有限公司；麦氏比浊仪：法国梅理埃公司（bioMérieux，Inc）。

2　方法

2.1菌株和菌悬液的制备

取-20℃条件下保存于含10%脱脂奶粉的菌种，转种至BHI肉汤，36℃培养24 h，再转种至营养琼脂平板，36℃培养24 h，用0.85%生理盐水稀释。调节浊度为（1～2）个麦氏单位，相应的菌浓度大约为（3×108～6×108）CFU/mL，10倍连续稀释，分别制成10、102CFU/ mL和103CFU/mL数量级的纯菌液。

2.2无添加食品基质的试验

分别吸取1mL不同浓度的菌悬液以0.3、0.3、0.4mL接种量，分别加入3块Baird-Parker平板，和0.1 mL的接种量，加入到一块Baird-Parker平板，然后用无菌L棒涂布整个平板，注意不要触及平板边缘。使用前，如Baird-Parker平板表面有水珠，可放在25℃～50℃的培养箱里干燥，直到平板表面的水珠消失。

在通常情况下，涂布后，将平板静置10 min，如菌悬液不易吸收，可将平板放在培养箱（36±1）℃培养1 h；等菌悬液吸收后翻转平皿，倒置于培养箱，（36± 1）℃培养，45 h～48 h。表皮葡萄球菌作为阴性对照。

平行5次试验，观察典型生长情况，记录数据并分析比较。

2.3添加食品基质的试验

生鲜乳在高压121℃，5 min灭菌后，添加菌悬液分别制成10、100CFU/mL和1000 CFU/mL数量级的样品。按“2.2”方法培养，判读，计数，记录数据并分析比较。

3　结果与分析

3.1无添加食品基质的试验

选用10、100 CFU/mL和1 000 CFU/mL数量级浓度的纯菌液，检验结果见表1。

表1　两种操作方法检测10、100 CFU/mL和1 000 CFU/mL数量级浓度金色葡萄球菌悬液的结果Table 1 Results of the two methods in determining the number of level concentration of S.aureus in the concentration of 10，100 CFU/mL和1 000 CFU/mL

续表1　两种操作方法检测10、100 CFU/mL和1 000 CFU/mL数量级浓度金色葡萄球菌悬液的结果Continue table 1 Results of the two methods in determining the number of level concentration of S.aureus in the concentration of 10，100 CFU/mL和1 000 CFU/mL

2种操作方法检测数据平均值结果相近，其中接种量0.1 mL的方法计数值较高。

3.2添加食品基质的试验

选用10、100 CFU/mL和1 000 CFU/mL数量级菌浓度的生鲜乳样品，检验结果见表2。

表2　两种操作方法检测10、100 CFU/mL和1 000 CFU/mL数量级浓度金色葡萄球菌生鲜乳样品的结果Table 2 Results of the two methods in determining the number of level concentration of S.aureus fresh milk sample in the concentration of 10，100 CFU/mL和1 000 CFU/mL

续表2　两种操作方法检测10、100 CFU/mL和1 000 CFU/mL数量级浓度金色葡萄球菌生鲜乳样品的结果Continue table 2 Results of the two methods in determining the number of level concentration of S.aureus fresh milk sample in the concentration of 10，100 CFU/mL和1 000 CFU/mL

2种操作方法检测数据平均值结果相近，其中接种量0.1 mL的方法计数值较高。

4　结论与讨论

计数结果在10、100 CFU/mL和1 000 CFU/mL 3个数量级菌浓度两种操作方法相近，其中接种量0.1 mL的方法计数值较高，但是此方法操作简单，涂布均匀。对非仲裁检验单位有十分重要的实际意义，在实际非仲裁检验过程中，经过方法验证，可以根据需要采用此方法，以减轻工作量。同时对金色葡萄球菌定量检验积累一些经验及参考。

参考文献：

［1］李自然，施春雷，宋明辉，等．上海市食源性金黄色葡萄球菌分布状况［J］．食品科学，2013，34（1）：268-271

［2］陈广全，张惠媛，曾静．食品安全检测培训教材微生物检验［M］．北京：中国标准出版社，2010：351-352

［3］中华人民共和国卫生部．GB 4789.10-2010食品安全国家标准食品微生物学检验金黄色葡萄球菌检验［S］．北京：中国标准出版社，2010

［4］中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局．SN/T 1895-2007食品中金黄色葡萄球菌的快速计数法PetfifllmTM测试片法［S］．北京：中国标准出版社，2007

［5］中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会．GB 29921-2013食品安全国家标准食品中致病菌限量［S］．北京：中国标准出版社，2013

Study on Quantitative Detection Method of Staphylococcus Aureus in Food

WANG Hong-liang，CHENG Yan-yu，WANG Meng-xiao
（Dairy and Food Monitoring Center，Tianjin 300381，China）

Abstract：To explore a method for quantitative detection of Staphylococcus aureus. By GB 4789.10-2010＜National food safety standard Food microbiological examination：Staphylococcus aureus＞，the second method Baird Parker plate method，with two methods of inoculation of 0.3，0.3，0.4 mL and 0.1 mL of the same concentration of Staphylococcus aureus were detected，the data recording and comparison analysis. The results of the 10，100 CFU/mL and 1 000 CFU/mL three number of level concentration of the two methods of operation were similar，and the amount of 0.1 mL was higher，but this method was simple，and the coating was uniform. In theprocess of actual non arbitration inspection，verified by method，this method can be used according to the need to reduce the amount of work.

Key words：food safety；Staphylococcus aureus；determination；comparison method

DOI：10.3969/j.issn.1005-6521.2016.09.044

作者简介：王洪亮（1981—），男（汉），工程师，硕士，从事食品微生物检验研究。

收稿日期：2016-03-08