荧光原位杂交法应用于胃癌Her-2基因检测及其临床意义

2016-06-15 14:51吴颖虹王仁杰柳万江贾志红张珏
当代医学 2016年22期
关键词:原位杂交符合率标本

吴颖虹 王仁杰 柳万江 贾志红 张珏

荧光原位杂交法应用于胃癌Her-2基因检测及其临床意义

吴颖虹 王仁杰 柳万江 贾志红 张珏

目的 探讨荧光原位杂交法(FISH)应用于胃癌Her-2基因检测及其临床意义。方法 选取54例胃癌组织标本,采用免疫组化法(IHC)及FISH对标本中胃癌Her-2蛋白表达与基因扩增情况进行测定,并比较测定结果。结果 (1)FISH测定结果:14例表现为标本扩增,40例表现为标本无扩增,Her-2基因扩增率为25.93%;(2)IHC测定结果:10例Her-2表达为+++,8例Her-2表达为++,16例Her-2表达为+,20例Her-2表达为0,Her-2蛋白表达率为18.52%;(3)扩增符合率:Her-2蛋白表达为0时,Her-2扩增符合率为5.00%;Her-2蛋白表达为+时,Her-2扩增符合率为6.67%;Her-2蛋白表达为++时,Her-2扩增符合率为37.50%;Her-2蛋白表达为+++时,Her-2扩增符合率为90.00%;总符合率为25.93%,且呈现为正相关(P<0.05)。结论 在胃癌筛查中,可将IHC作为初步筛查手段,而针对晚期胃癌患者则建议行FISH检测,以便进一步了解Her-2基因状态,为临床靶向治疗提供明确信息。

胃癌;Her-2基因;荧光原位杂交法;免疫组化法

胃癌是近几年来发病率较高的一种肿瘤疾病,并以每年新发

100余万的速度递增,而在新发病例中超过42%的病例为中国病例,加之其较高的死亡率,如今,我国已成为了胃癌发病率和死亡率均较高的国家[1]。随着对胃癌发病原因、机制等研究的深入,人类表皮生长因子受体2(Her-2)随之成为了胃癌靶向治疗的新焦点,Her-2是位于人类染色体17q12-21.3上的原癌基因,是表皮生长因子受体(EGFR)家族中非常重要的成员之一,其在细胞分化、生长以及增殖中均有参与,为此,Her-2基因表达有无表达,直接关系着胃癌靶向治疗药物的选择,特别是靶向性基因治疗。故对胃癌Her-2基因进行测定,了解其表达情况,对临床治疗、预后判断有着重要意义。鉴于此,本科室在课题研究中,采用免疫组化法(IHC)及荧光原位杂交法(FISH)对胃癌Her-2基因进行测定,并分析其临床意义。现将有关情况报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 本研究胃癌组织标本均来自江西省景德镇市第二人民医院2013年1月~2015年12月接诊的54例胃癌手术患者,其中女21例,男33例,患者年龄55~73岁,平均年龄(65.23±2.15)岁。所有患者术前均未行放化疗治疗。

1.2 方法

1.2.1 FISH 取17号染色体着丝粒(CEP17),可将其标记为绿色,并将Her-2基因标记为红色。具体操作步骤为:取组织切片,依次对其进行脱蜡,无水酒精中室温10min去除二甲苯,梯度酒精脱水后,纯化水煮沸处理20min,室温晾干,在37℃条件下,行200mg/L胃蛋白酶反应,持续消化进行5~15min,多次SSC洗涤,再依次梯度酒精脱水,向其中加入探针混合液

10μL,85℃杂交仪行5min变性处理,37℃环境下行过夜杂交处理。采用0.3%NP-40/0.4×SSC66℃处理1min,采用

0.11 %NP-40/2×SSC室温环境下行1min处理,采用乙醇进行3min洗片处理,对其进行干燥处理,放置到10μLDAPI复染剂中进行复染处理,封片,静置于避光处,20min后取出,放置于荧光显微镜下观察。

1.2.2 IHC 取胃癌病理组织标本,采用中性甲醛固定,行常规石蜡包埋处理,切片,厚度4μm,运用IHCEliVision Plus二步法行染色处理,放置于高倍显微镜下观察10个视野,并将Her-2蛋白表达定位在细胞膜,阳性反应物呈现为棕黄色颗粒状。

1.3 评价标准

1.3.1 FISH评价标准 经荧光显微镜下对60个细胞进行计数,并对Ratio值进行统计,若Ratio值低于1.8即可视为阴性,这表明该样本并不存在Her-2基因扩增;若Ratio值控制在1.8~2.2范围内,则将细胞计数增加到100个或者再次进行FISH实验,并根据结果进行判定;若Ratio值超过2.2即可视为阳性,这表明该样本中存在Her-2基因扩增;若观察发现,红色信号点呈现为成簇扩增,同样也表明该样本为Her-2基因扩增阳性。

1.3.2 IHC评价标准 (1)0/阴性:细胞膜均未染色或者<10%肿瘤细胞膜染色;(2)+/阴性:肿瘤细胞超过10%,细胞膜表现不完整,且呈现为弱染色;(3)++/不确定:肿瘤细胞超过10%,细胞膜表现轻度到中度完整;(4)+++/阳性:肿瘤细胞超过10%,细胞膜表现非常完整,且呈现为强染色。

1.4 统计学方法 本研究数据均以统计学软件SPSS15.0进行分析处理,运用Kendall行相关性分析,以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 FISH检测结果 54例胃癌患者胃癌组织中,14例表现为标本扩增,40例表现为标本无扩增,Her-2基因扩增率为25.93%(14/54)。

2.2 IHC检测结果 54例胃癌患者胃癌组织中,10例标本测定结果Her-2表达为+++,8例标本测定结果Her-2表达为++,16例标本测定结果Her-2表达为+,20例标本测定结果Her-2表达为0,Her-2蛋白表达率为18.52%(10/54)。

2.3 FISH与IHC测定结果比较 Her-2蛋白表达为0时,Her-2扩增符合率为5.00%(1/20);Her-2蛋白表达为+时,Her-2扩增符合率为6.67%(1/15);Her-2蛋白表达为++时,Her-2扩增符合率为37.50%;Her-2蛋白表达为+++时,Her-2扩增符合率为90.00%。两种方法检测结果总符合率为25.93%(14/54),且呈现为正相关(r=0.761,P<0.05)。见表1。

表1 FISH基因扩增与IHC蛋白表达扩增结果比较(n)

3 讨论

随着医学技术的快速发展,分子生物学技术也日渐成熟,并在生命科学领域得到了广泛运用,在帮助人类进一步了解细胞生活活动中发挥了重要作用[2]。随着对细胞生长、分化、增殖以及癌变等认识的逐渐深入,关于参与其变化的调节分子机制的研究也随之增多,这使得本研究从更新的角度和层面了解胃癌的病变和发展过程,同时也将分子生物学技术逐渐发展到了肿瘤临床诊断、预后判断等方面[3]。

自1987年首次报到Her-2过表达的预后意义以来,Her-2基因成为了临床应用较为广泛的肿瘤标记物[4]。当人体Her-2基因呈现为大量扩增时,必然会导致蛋白产物P185呈现为过表达,从而致使Her-2受体异源二聚体形成数量快速增多,致使细胞内酪氨酸激酶的活性呈现为快速增多,并致使酪氨酸自身磷酸化,致使多种信号转导途径快速激活,出现细胞大量增殖的情况,引起癌变反应[5]。在卵巢癌、肺腺癌以及乳腺癌等恶性肿瘤疾病中,Her-2蛋白或者基因扩增均呈现为过表达。有文献报道表示[6],在胃癌中,Her-2基因扩增阳性率为7.1%~42.6%,而过表达率为6.8%~34%。而Her-2基因非常容易接近抗体,故将其作为肿瘤免疫治疗靶位是目前学界公认观点。

目前,在Her-2检测中,主要采用FISH与IHC两种方法,其中IHC由于其操作简单方便,且成本低廉,同时通过显微镜能够观察到肿瘤组织中Her-2阳性变化,故被视为Her-2检测的首选方法。但IHC在检测中极易受到各方面因素的干扰,并且方法相对较为间接,故其准确性和稳定性有待进一步考察[7]。FISH是一种分子遗传学检测技术,作为分子生物学技术中逐渐成熟起来的新技术,FISH是一种用于胃癌诊断的分子水平分析技术,其主要通过细胞表型、组织病理学和基因型三方面的结合,来实现对肿瘤疾病的诊断,具有较高灵敏度、准确性和稳定性,其测定结果更为客观[8]。根据本研究结果显示,FISH检测Her-2基因扩增率为25.93%,该结果表明,FISH在Her-2基因扩增阳性率明显更高,且呈现为正相关。

综上所述,在胃癌Her-2状态筛查中,FISH与IHC均具有一定的临床应用价值,能够客观、准确地反应出Her-2状态,但实际运用中,建议将IHC作为初步筛选方法,针对晚期胃癌患者则建议采用FISH作进一步检查。

[1] 阳帅,张小丽,李亚菲,等.胃癌中HER2蛋白表达及基因扩增的临床意义[J].慢性病学杂志,2015,16(3):277-280.

[2] 王凤华,李玉军.荧光原位杂交检测胃癌HER2基因扩增应用价值探讨[J].社区医学杂志,2013,10(8):51-52.

[3] 赵亚娟,刘海芳,朱献斐,等.胃腺癌组织HER-2/neu基因表达及其临床意义[J].中华肿瘤防治杂志,2010,16(5):357-359.

[4] 李明新,于忠和,范晋楠.实时荧光PCR检测胃癌石蜡组织中Her-2表达的研究[J].医学综述,2012,18(9):1418-1420.

[5] 钟山,余英豪,黄红浪,等.荧光原位杂交法对胃癌组织HER-2基因状态的检测[J].世界华人消化杂志,2011,18(2):132-137.

[6] 苏静,杨郁,马晓龙,等.荧光原位杂交检测乳腺癌人表皮生长因子受体2基因扩增及与临床病理特征的关系[J].北京大学学报(医学版),2011,52(2):199-203.

[7] 眭维国,欧明林,陈洁晶,等.荧光原位杂交法与免疫组织化学法检测乳腺癌HER-2基因扩增及蛋白表达的对比研究[J].实验与检验医学,2010,27(1):16-18,46.

[8] 何中元,王桂芝,秦文华.胃癌组织HER-2基因的检测用于靶向治疗[J].医药论坛杂志,2014,34(9):36-37.

10.3969/j.issn.1009-4393.2016.22.011

景德镇市级科技计划项目(20152SFZC050)

江西 333000 江西省景德镇市第二人民医院病理科 (吴颖虹王仁杰 柳万江 贾志红 张珏)

王仁杰 E-mail:wlj3526@126.com

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