荞麦花叶黄酮对糖尿病GK大鼠肾脏的影响

涂画 陈雪品 成曦爽 石亚静 高翔 郭兰 齐亚娟 韩淑英

摘要：文章探讨了荞麦花叶黄酮对糖尿病GK大鼠肾组织的保护作用及其机制，并以GK大鼠为糖尿病模型，将GK大鼠随机分为模型组（MC）、FBFL组（FBFL），另设同源Wistar大鼠为正常组（NC），结果表明：FBFL对糖尿病GK大鼠肾脏具有保护作用，可能是由于FBFL的降血糖作用或是由于其降低肾系数，降低血中尿酸、尿素、肌酐的水平，减缓了对肾组织损伤。

关键词：荞麦花叶黄酮；糖尿病；肾病；GK大鼠；Wistar大鼠 文献标识码：A

中图分类号：R285 文章编号：1009-2374（2016）17-0058-02 DOI：10.13535/j.cnki.11-4406/n.2016.17.027

糖尿病肾病是糖尿病常见的并发症，是微血管病变的一种，发病机制尚不清楚，一般认为是由于高血糖增加肾脏的血流量导致肾小球滤过率增高所致。前期研究表明，荞麦花叶黄酮可以降血糖、血脂改善胰岛素抵抗，上调IRS-2、PI3K蛋白表达等作用。因此，本实验以GK大鼠为糖尿病模型，通过血糖变化、肾系数、各项生化指标以及肾组织行HE染色观察FBFL对肾脏的影响。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 动物。22只雄性SPF级糖尿病GK大鼠[购自上海斯莱克斯实验动物责任有限公司，许可证号：SCXK（沪）2012-0002]，体重310～340g，24～25周龄；10只雄性同源SPF级Wistar大鼠[购自北京华阜康生物科技股份有限公司，许可证号：SCXK（京）2014-0002]为正常对照组（NC），体重320～340g，20～22周龄。

1.1.2 药物与试剂。荞麦花叶为甜荞麦子粒收割后自然干燥的花叶（来自内蒙古通辽市库伦旗），FBFL的制备见参考文献[4]；芦丁对照品（中国食品药品检定研究院，批号0080-9705）。

1.1.3 主要仪器。电子天平（型号FA2104N，上海菁海仪器有限公司）；恒温箱（型号TO-2123，上海尚域环境仪器有限公司）；高速低温离心机（型号5180R，德国Eppendorf公司）；TU-1810紫外可见分光光度计（北京普析通用仪器有限公司）；全自动生化仪；其他实验器材及实验用品由河北省慢性疾病重实验室和唐山市慢性病临床基础研究重点实验室提供。

1.2 方法

1.2.1 动物模型的确定、分组及给药。挑选大鼠随机血糖及糖负荷2小时血糖均高于11.1mmol·L-1，即认为已形成糖尿病；剔除2只随机血糖未达到糖尿病标准的GK大鼠，将剩下的20只随机分为两组，分别为模型组（MC）、FBFL组（FBFL）；另外10只Wistar大鼠设为正常组（NC）。NC与MC灌胃纯净水10ml·kg-1；FBFL灌胃剂量为FBFL的水溶液100mg·kg-1；均于华北理工大学动物实验中心SPF级屏障实验室饲养与实验，以每笼5只进行饲养。各组均在上午9∶00～10∶00点灌胃给药，每天1次，连续6W。

1.2.2 血糖测定。给药后30min后，用罗氏血糖仪尾静脉取血测定血糖，每周一次。

1.2.3 肾功能指标检测。灌胃给药6W后，大鼠禁食12h，用10%水合氯醛以3mL/kg剂量腹腔注射麻醉大鼠，经腹主动脉取血，放置2h后4℃2000r/min离心20min，吸取上清，用本实验全自动生化仪测血清中尿酸（UA）、尿素（UREA）、肌酐（CREA）。

1.2.4 肾系数的测定。取双侧肾脏，用滤纸吸干表面残留血液，称重。肾系数（%）=两侧肾重和（g）/体重（g）×100%。

1.2.5 肾组织病理学检查。取部分肾组织浸泡于4%多聚甲醛中，固定24h。用于石蜡包埋、切片肾组织石蜡切片4μm常规脱蜡入水，行HE染色。光镜下观察肾组织病理改变。

1.2.6 统计学分析。应用SPSS17.0处理数据。结果以±s表示，组间比较采用方差分析，两两比较使用LSD法，P<0.05表示具有统计学意义。

2 结果

2.1 一般状态及随机血糖的变化

MC、H-FBFL组大鼠较NC组明显出现多饮、多食、多尿症状；体型瘦小，毛色暗沉无光。MC的血糖高于NC随机血糖一倍多，平均值达到13.38mmol/L，NC、MC各时间段血糖水平无明显变化，于第4周开始，FBFL组随机血糖低于模型组（P<0.01），并且随着用药时间延长，血糖水平降低更明显，说明FBFL有能降低GK大鼠血糖的作用。如表1所示。

2.2 肾系数、血清生化指标检测

MC、FBFL组GK大鼠肾系数与NC组存在显著性差异（P<0.01），FBFL组肾系数低于MC组，存在显著性差异（P<0.05）；GK大鼠UA、UREA、CREA均与NC组存在显著性差异（P<0.01），FBFL组的UA、UREA、CREA均低于MC组（P<0.01）。如表2所示。

2.3 HE染色

NC大鼠肾组织细胞形态、结构完整，肾小球饱满、规则，肾小管排列整齐紧密，肾小管上皮细胞形态正常；与NC相比，MC肾小球出现不同程度的萎缩现象，肾小管上皮细胞横切面空洞，细胞核缺失，肾小管之间间隙大，且可见空泡样水肿，部分肾间质可见细胞纤维化；与MC相比，FBFL组肾小球饱满，肾小管上皮细胞结构完整，细胞紧密，少见水肿现象，未见肾间质纤维化。

3 讨论

2型糖尿病（T2DM）是机体胰岛素功能减退或胰岛素抵抗所引起的高糖、高脂一种代谢紊乱疾病，老年人为高发病率者。近期研究表明，糖尿病所致的肾功能障碍占到30%，是糖尿病最常见的并发症之一。血清中生化指标尿素、肌酐是临床广泛使用于肾小球滤过的功能指标，由于肾脏有强大代偿功能在肾脏损伤的早期并没有明显变化，一旦其测定结果超出正常参考范围就可能已经出现不可逆转的严重损伤。病程中GK大鼠伴有高血糖的同时，出现肾系数的增大，血清中尿素、尿酸、肌酐值增高以此可以说明，糖尿病GK大鼠病程中伴有糖尿病肾病的发生，但FBFL对其有抑制作用，降低肾系数，降低血尿素、尿酸和肌酐水平，因此FBFL对GK大鼠糖尿病肾病具有保护作用。

肾脏HE染色可见，与正常对照组相比较，模型组肾小球出现不同程度的萎缩现象，肾小管上皮细胞空泡变性明显，细胞核缺失，动脉管壁明显增厚，水肿现象明显；与MC相比，FBFL组肾小球饱满，肾小管上皮细胞结构完整，细胞紧密，动脉管壁厚度正常，少见水肿现象，未见肾间质纤维化，说明FBFL能减缓糖尿病对肾组织的损害程度。

本研究采用的GK大鼠是被国际上公认的典型非肥胖型2型糖尿病模型，平时表现为多饮多食多尿症状，通过灌胃给药干预后，发现FBFL能够降低GK大鼠血糖，且随时间延长血糖下降明显，此外实验还证明了FBFL能降低血中肌酐尿素尿酸的产生，减轻糖尿病所引起的肾组织的损伤。因此FBFL对肾脏具有保护作用，可能是由于FBFL的降血糖作用抑制了高血糖、肌酐、尿素和尿酸对肾组织的损害，或是由于FBFL具有保护GK大鼠肾组织的作用，减少水肿及纤维化现象，从而减少了糖尿病肾病发生的几率。

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作者简介：涂画（1994-），女，湖南岳阳人，华北理工大学药学院学生，研究方向：中药药学；韩淑英（1959-），女，华北理工大学基础医学院教授，硕士生导师，硕士，研究方向：中药防治糖尿病及心血管疾病。

（责任编辑：王 波）