大承气汤对过敏性哮喘小鼠肺组织形态及IgE水平的影响

钟大玲 吴佳佳 李根茂 葛东宇 吴珺 彭桂英

摘要：目的 观察大承气汤对过敏性哮喘小鼠肺组织形态学变化、肺指数、脾指数以及总IgE水平的影响，探讨其相关作用机制。方法 采用卵白蛋白致敏加激发的方式建立小鼠过敏性哮喘模型。将20只雌性C57BL/6小鼠随机分为正常组、模型组、大承气汤组和阳性药组，各给药组给予相应药物灌胃。测定各组小鼠肺指数、脾指数，ELISA测定血清IgE含量，HE染色进行病理观察。结果 与正常组比较，模型组小鼠肺指数增加，血清IgE含量明显升高（P<0.01），肺组织出现炎性病理改变；与模型组比较，大承气汤组和阳性药组小鼠肺指数明显降低（P<0.05），血清IgE含量明显降低（P<0.01），肺组织形态结构明显改善。结论 大承气汤对哮喘小鼠肺部炎症有抑制作用。

关键词：过敏性哮喘；肺肠同治；大承气汤；小鼠

DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2016.07.015

中图分类号：R285.5 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2016）07-0058-03

Effects of Dachengqi Decoction on Pulmonary Histology and Total IgE Levels in Mice with Allergic Asthma ZHONG Da-ling， WU Jia-jia， LI Gen-mao， GE Dong-yu， WU Jun， PENG Gui-ying （School of Basic Medical Sciences， Beijing University of Chinese Medicine， Beijing 100029， China）

Abstract： Objective To explore the effects of Dachengqi Decoction on morphological changes， lung and spleen indexes， and total IgE levels of mice with allergic asthma； To discuss it relevant mechanism of action. Methods The method of OVA sensitization and provocation was used to establish allergic asthma mice models. 20 C57BL/6 mice were randomly divided into control group， model group， Dachengqi Decoction group and dexamethasone positive group. Each medication group was given relevant medicine for gavage. Lung and spleen indexes in each group were detected. The total IgE levels in serum of mice were detected by ELISA， and HE staining was used to conduct pathological observation. Results Compared with control group， the lung index and level of IgE in model group increased significantly and pulmonary histological results showed abundant inflammatory cells infiltrated in the bronchus； compared with the model group， the lung index as well as the levels of IgE decreased significantly in the Dachengqi Decoction and dexamethasone positive group （P<0.05）， and the lung tissue organization form was improved significantly. Conclusion Dachengqi Decoction has inhibiting effects on pulmonary inflammation of mice with asthma.

Key words： allergic asthma； treatment of lung and large intestine； Dachengqi Decoction； mice

基金项目：国家自然科学基金面上项目（81473656）；北京中医药大学创新团队项目（2011-CXTD-04）

通讯作者：彭桂英，E-mail：edweiss@163.com

支气管哮喘是一种以淋巴细胞、嗜酸性粒细胞和肥大细胞反应为主的慢性气道炎症性疾病，严重影响日常生活，给患者个人、家庭和社会带来沉重的经济负担。目前西医对哮喘的治疗，主要是通过吸入糖皮质激素抑制气道炎症，以及使用支气管舒张剂缓解支气管收缩，长期使用不良反应大。因此，寻找新的方法防治哮喘具有重要意义。肺肠理论是脏腑相合理论的重要内容之一，临床上一直用以指导肺部疾病的治疗，尤其是在慢性阻塞性肺疾病和哮喘的治疗上具有较好的疗效[1-2]。本研究以大承气汤为方药，以过敏性哮喘小鼠为动物模型，以肺组织形态学、肺脾指数及IgE水平为切入点，探究“肺肠同治”法的科学内涵。

1 实验材料

1.1 动物

健康SPF级C57BL/6小鼠20只，雌性，鼠龄6～8周，体质量18～20 g，北京维通利华实验动物技术有限公司，合格证号SCXK（京）2012-0001。饲养于北京中医药大学动物房屏障系统，温度（25±1）℃，湿度40%～60%，自由饮食、饮水。

1.2 药物及制备

大承气汤（大黄12 g，枳实12 g，厚朴24 g，芒硝9 g）饮片均购自北京同仁堂总店，按人体质量药量换算小鼠给药量为19 g/kg。药物浸泡30 min后，先武火煎煮10 min，再文火煎煮20 min，煎煮2次，合并煎液，将所得药液用双层纱布过滤，浓缩至浓度为1.9 g原药材/mL，4 ℃冰箱储存备用。地塞米松片，天津力生制药有限股份有限公司，批次20140706。

1.3 主要试剂与仪器

IgE ELISA Kit（Bio legend），批号PD201123；卵白蛋白（OVA，Sigma-Aldrich），批号SLBK1339V；PBS（Invitrogen），批号1627690；氢氧化铝凝胶（Pierce），批号B192991。医用雾化器（PARI Turbo BOY N），5415型高速离心机（德国Eppendorf公司），酶标仪DNM- 96021（瑞士Tecan公司），光学显微镜（Olympus Co）。

2 实验方法

2.1 分组、造模和给药

实验小鼠饲养7 d后，随机分为正常组、模型组、大承气汤组和阳性药组，每组5只。参照文献[3]方法，采用OVA致敏激发方式构建哮喘小鼠模型。第0、14日每只小鼠腹腔注射含20 ?g OVA和2 mg氢氧化铝的凝胶混悬液0.2 mL，第21～25日将其置10 cm×20 cm×30 cm自制雾化箱中，用含1%OVA溶液8 mL雾化吸入激发，每次30 min，每日1次。

大承气汤组给予大承气汤药液灌胃，阳性药组给予地塞米松（5 mg/kg）药液灌胃，模型组和正常组给予PBS灌胃。灌胃体积0.2 mL/只。各组于末次雾化12 h后取材。

2.2 血清总IgE含量测定

眼球取血，室温静置2 h后，离心收集上清，分装后冻存于-20 ℃冰箱。ELISA检测总IgE含量，严格按照试剂盒说明操作。

2.3 肺指数和脾指数测定

称重后，脱颈处死小鼠，打开胸腔取出肺脏，摘除气管、肺门淋巴结等组织，吸干肺脏表面血液，称取肺脏质量。同时打开腹腔，取出脾脏，吸干表面液体，称取脾脏质量。计算出肺指数（小鼠肺质量÷小鼠体质量×100%）和脾指数（小鼠脾质量÷小鼠体质量×100%）。

2.4 肺组织病理观察

选取左肺上叶组织快速置于10%甲醛溶液中固定，常规石蜡包埋、切片、HE染色，镜下拍照。

3 统计学方法

采用SPSS20.0统计软件进行分析。实验数据以—x±s表示，组间比较采用方差分析。P<0.05表示差异有统计学意义。

4 结果

4.1 一般状况

正常组小鼠体质量稳定，毛色顺滑有光泽，活动自如；模型组小鼠实验过程中出现抓耳挠鼻、狂躁不安、喘息、呼吸急促、弓背等表现；经药物治疗后，上述症状均减轻、且持续时间较短。

4.2 大承气汤对模型小鼠肺指数、脾指数及血清IgE含量的影响

与正常组比较，模型组小鼠肺指数、脾指数和血清IgE含量增高（P<0.01）；与模型组比较，大承气汤组肺指数降低、脾指数升高（P<0.05），阳性药组肺指数和脾指数均降低（P<0.01），大承气汤组和阳性药组IgE含量降低（P<0.01）。结果见表1。

4.3 病理观察结果

正常组小鼠肺泡结构完整、清晰，呈现正常肺组织形态；模型组可见大量炎症细胞浸润且出现黏液栓，周围组织水肿，上皮损伤且纤维化，气道平滑肌肥大、增生；大承气汤组和阳性药组可见支气管及血管周围炎症细胞浸润减少，周围组织水肿减轻，气道上皮损伤、纤维化及基底膜增厚等减轻。结果见图1。

5 讨论

在“肺与大肠相表里”理论的指导下，近年来学者对肺肠轴进行了较深入的研究，进一步阐明了肺与大肠相表里的分子水平机制，并逐渐发现中医药治疗过敏性哮喘相关炎性疾病有其独特的方药和理法。徐氏等[4]研究表明，大承气汤对过敏性哮喘小鼠有明显的治疗作用。因此，本课题以过敏性哮喘小鼠为动物模型，大承气汤为方药，挖掘“肺肠同治”的科学实验证据。大承气汤首载于《伤寒论》，由大黄、芒硝、枳实、厚朴4味药组成，具有攻下实热、消除痞满之功，主治阳明腑实证，是“肺肠同治”法的代表方。方中大黄与芒硝泻腑通便，大便通畅，大肠传导功能正常，则有助于肺气宣降；枳实、厚朴相须为用，既能行气破滞散结，又能降肺气以平喘消痰。诸药合用，畅通气机，泻下实热，荡涤燥结，相得益彰。

本实验结果显示，过敏性哮喘小鼠发作期出现明显的呼吸喘促、狂躁、打喷嚏及频繁挠鼻，而给予大承气汤治疗后上述症状均有所改善。模型组小鼠肺组织出现大量炎症细胞浸润，支气管上皮损伤甚至纤维化、增生，而大承气汤治疗后肺组织形态明显好转。刘氏等[5]发现仅以芒硝刺激大肠，有助于改善气道通气并抑制哮喘小鼠肺部炎症，这更进一步证实了本结果的可靠性。

此外，本研究发现大承气汤能有效降低哮喘小鼠肺指数，这从另一个角度印证了其减轻肺部炎症的效果，与其他文献报道一致[6]。而大承气汤治疗后哮喘小鼠脾指数不降反而上升，推测其前述抑制炎症作用可能与促进淋巴细胞向不同方向分化有关，而非抑制淋巴细胞的增殖。同时，我们还发现大承气汤能显著降低哮喘小鼠总IgE含量，这与国内其他学者使用从肠治肺或肺肠合治法能显著降低哮喘小鼠血清中总IgE含量的实验结果一致[5，7]。考虑到IgE是过敏性哮喘发生过程中重要的介导因素，其含量的增加与过敏性哮喘的发生发展密切相关[8]，而现代免疫学研究发现，IgE的产生与2型辅助性T淋巴细胞产生的白细胞介素-4（IL-4）密切相关[9]，实际上我们发现大承气汤同样可以降低哮喘小鼠支气管肺泡灌洗液中IL-4的水平。这进一步证实大承气汤可能通过降低哮喘小鼠IgE含量，从而减轻肥大细胞的脱颗粒反应，导致哮喘小鼠肺部炎症程度的缓解。这同时表明“肺肠同治”法的可行性。

综上所述，大承气汤能够通过降低过敏性哮喘小鼠血清IgE的含量，改善哮喘小鼠肺指数的升高。本研究为“肺肠同治”法提供了详实可靠的实验依据。然而，大承气汤引起哮喘小鼠脾指数升高从另一个侧面提示我们需要进一步研究其具体的机制。

参考文献：

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[5] 刘妙，郑丰杰，高誉珊，等.“从肠论治”对哮喘小鼠BALF炎症细胞及血清IgE含量的影响[J].世界中医药，2015，10（1）：26-29.

[6] 胡亚涛.大承气汤辨治脂多糖致小鼠急性肺损伤的基础作用[J].时珍国医国药，2014，25（11）：2632-2633.

[7] 白亚辉，陈辉，杨宇.肺肠合治法对哮喘小鼠血清总IgE影响的实验研究[J].中华中医药学刊，2007，25（6）：1131-1133.

[8] SANITAS K， DELIMPOURA V， ZERVAS E，et al. Anti-IgE treatment， airway inflammation and remodeling in severe allergic asthma： current knowledge and future perspectives[J]. Eur Respir Rev， 2015，24（138）：594-601.

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（收稿日期：2015-12-24；编辑：华强）