HPLC波长切换法测定银花芒果片中芒果苷、橙皮苷含量

唐德智

摘要：目的 建立HPLC波长切换法测定银花芒果片中芒果苷、橙皮苷含量的方法。方法 采用Agilent ZORBAX Eclipse XDB-C18（4.6 mm×150 mm，5 ?m）色谱柱，流动相为甲醇-0.2%磷酸水溶液，梯度洗脱，流速为1.0 mL/min，柱温30 ℃，波长切换时间序列采样（0～20 min为258 nm，20～50 min为283 nm）。结果 芒果苷进样量在0.042～0.761 ?g 范围内线性关系良好（r=0.999 9），平均回收率为99.86%，RSD=1.5%（n=9）；橙皮苷进样量在0.076～1.361 ?g范围内线性关系良好（r=0.999 8），平均回收率为99.91%，RSD=0.7%（n=9）。结论 本方法简便、快捷、准确，可用于该制剂的质量控制。

关键词：银花芒果片；芒果苷；橙皮苷；波长切换法

DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2016.07.025

中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2016）07-0098-03

HPLC Wavelength Switching Simultaneous Determination for the Contents of Mangiferin and Hesperidin in Yinhua Mangguo Tablets TANG De-zhi （Guangxi Nanning Institute for Food and Drug Control， Nanning 530021， China）

Abstract： Objective To establish an HPLC method of wavelength switching simultaneous determination for the contents of mangiferin and hesperidin in Yinhua Mangguo Tablets. Methods Agilent ZORBAX Eclipse XDB-C18 （4.6 mm×150 mm， 5 ?m） column was used. The mobile phase was methanol-water containing 0.2% phosphoric acid with gradient elution mode at the flow rate of 1.0 mL/min； the detection wavelength was 258 nm （0–20 min） for mangiferin， 283 nm （20–50 min） for hesperidin. Results Mangiferin had a good linearity in the range of 0.042–0.761 ?g， and the average recovery was 99.86%， with RSD of 1.5% （n=9）. Hesperidin had a good linearity in the range of 0.076–1.361 ?g， and the average recovery was 99.91%， with RSD of 0.7% （n=9）. Conclusion The method is simple， accurate and reproducible， which can be used to the quality control of Yinhua Mangguo Tablets.

Key words： Yinhua Mangguo Tablets； mangiferin； hesperidin； wavelength switching

银花芒果片是由芒果叶、陈皮、蒲公英、桔梗、金银花、百部、甘草等制成的中药成方制剂，有疏风清热、止咳化痰的功效，临床用于外感风热所致的咽痛、喉痒、咳嗽、上呼吸道感染、急性支气管炎等症，收载于《国家中成药标准汇编内科肺系（二）分册》。现行质量标准为测定陈皮中的橙皮苷含量，但对处方中另一味主要药物芒果叶只有薄层鉴别实验，未进行定量测定，难以有效全面地反映制剂的质量。芒果叶具有止咳化痰的功效，芒果苷是其中的主要活性成分[1]。本试验选择芒果苷和橙皮苷为质量控制指标，采用HPLC波长切换法测定银花芒果片中芒果苷和橙皮苷的含量。

1 仪器与试药

Waters 2695高效液相色谱仪（美国沃特斯公司），S180H型超声波清洗器（德国Elma公司），XS205DU型电子分析天平（梅特勒-托利多仪器有限公司），UV-2550型紫外-可见分光光度计（日本岛津公司）。

芒果苷对照品（批号110607-200402）、橙皮苷对照品（批号110721-201316，纯度95.3%），中国食品药品检定研究院；银花芒果片（广西南珠制药有限公司，市售药品，规格0.5 g/片，批号20130915、20140501、20140601、20140624、20140802）；甲醇、磷酸为色谱纯，水为超纯水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：Agilent ZORBAX Eclipse XDB-C18（5 ?m，4.6 mm×150 mm）；流动相A为甲醇、B为0.2%磷酸水溶液，梯度洗脱（0～15 min，25%A；15～20 min，25%～35%A；20～50 min，35%A）；检测波长：0～20 min为258 nm（芒果苷），20～50 min为283 nm（橙皮苷）；流速：1.0 mL/min；柱温：30 ℃；进样量：10 ?L。

2.2 混合对照品溶液的制备

取芒果苷和橙皮苷对照品适量，精密称定，置同一50 mL棕色量瓶中，加甲醇制成1 mL含芒果苷84.6 ?g、橙皮苷151.2 ?g的混合对照品溶液，摇匀，即得。

2.3 供试品溶液的制备

取本品10片，除去包衣，研细，取约0.5 g，精密称定，置25 mL棕色量瓶中，加入50%甲醇约20 mL，超声处理（功率300 W，频率33 kHz）30 min，放冷，加50%甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，用0.45 ?m微孔滤膜过滤，即得。

2.4 阴性对照溶液的制备

按处方分别制备缺芒果叶、缺陈皮的阴性样品，按“2.3”项下方法制备，即得。

2.5 专属性试验

分别精密吸取上述对照品混合溶液的稀释液、供试品溶液和阴性对照溶液10 ?L，按上述色谱条件进样测定，结果阴性对照溶液在与供试品溶液中芒果苷和橙皮苷相同的保留时间处无干扰峰。色谱图见图1。

2.6 线性关系考察

精密吸取“2.2”项下混合对照品溶液0.5、1.0、3.0、5.0、7.0、9.0 mL，分别置10 mL棕色量瓶中，加甲醇定容，摇匀，按上述色谱条件进样测定。以对照品进样量对峰面积进行线性回归，得回归方程：芒果苷Y=4.235×106X-8.429×104，r=0.999 9（n=6）；橙皮苷Y=1.718×106X-2.427×105，r=0.999 8（n=6）。结果表明，芒果苷在0.042～0.761 ?g、橙皮苷在0.076～1.361 ?g范围内线性关系良好。

2.7 精密度试验

取“2.2”项下混合对照品溶液，按上述色谱条件，连续测定6次，结果芒果苷与橙皮苷峰面积的RSD分别为1.3%、1.5%，表明精密度良好。

2.8 稳定性试验

取同一批号（20140601）的供试品溶液，按上述色谱条件，分别在0、1、2、4、8、12、24 h进样测定，结果芒果苷与橙皮苷的峰面积RSD分别为1.6%、1.3%，表明供试品溶液在24 h内稳定。

2.9 重复性试验

取同一批号样品（20140601）0.5 g，精密称定6份，分别制备供试品溶液，按上述色谱条件测定，测得样品中芒果苷平均含量为2.09 mg/g（RSD=1.2%），橙皮苷平均含量为3.74 mg/g（RSD=1.3%），表明该方法重复性良好。

2.10 加样回收率试验

精取称取已测定含量的同一批样品（批号20140601）0.25 g，共9份，置25 mL棕色量瓶中，分别精密加入混合对照品溶液（芒果苷0.106 6 mg/mL，橙皮苷0.191 4 mg/mL）4.0、5.0、6.0 mL，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，测定并计算回收率。结果芒果苷和橙皮苷的平均回收率分别为99.86%、99.91%，RSD分别为1.5%、0.7%，见表1、表2。

2.11 样品测定

取5个批号银花芒果片粉末，每批平行3份，精密称定，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，按上述色谱条件测定峰面积，计算样品中芒果苷和橙皮苷的含量，结果见表4。

3 讨论

现行质量标准中仅对陈皮中的橙皮苷进行了定量测定，而无处方中另一主要药物芒果叶的含量测定方法。芒果叶具有止咳化痰的功效，其功效与银花芒果片疏风清热、止咳化痰的功效相一致。为有效保障药品质量，有必要对芒果叶的含量进行定量控制。本试验采用HPLC波长切换法同时测定银花芒果片中芒果苷和橙皮苷2种成分的含量，方法简便、结果准确，可用于银花芒果片的质量控制。

试验过程中对供试品溶液的处理方法进行了考察。采用甲醇索氏提取、加热回流及超声振荡提取，结果表明，超声振荡提取效果较好；再分别以乙醇、甲醇、30%甲醇、50%甲醇、70%甲醇作为提取溶剂，采用超声振荡法对供试品进行提取，并对超声振荡时间进行考察。结果表明，以50%甲醇超声提取30 min效果最好。

本试验分别取芒果苷和橙皮苷的对照品溶液，在200～400 nm波长范围内进行紫外光谱扫描，结果显示芒果苷和橙皮苷分别在258 nm和283 nm处有最大吸收。为保证各成分在检测波长处有最大吸收，本试验采用HPLC波长切换方法，选择在各自最大吸收波长处同时测定芒果苷和橙皮苷的含量。

本试验曾参考药典及相关文献中芒果苷和橙皮苷的含量测定方法[2-6]，采用等度洗脱法，分离结果均不理想，故考虑梯度洗脱。试验中分别考察了甲醇-磷酸水溶液、乙腈-磷酸水溶液等多种流动相体系，结果发现采用甲醇-0.2%磷酸水溶液进行梯度洗脱时，能使各成分获得较好分离。

参考文献：

[1] 邓家刚，郑作文，曾春晖.芒果苷的药效学实验研究[J].中医药学刊， 2002，7（12）：37-39.

[2] 黄海滨，李学坚，梁秋云.RP-HPLC法测定芒果叶中芒果苷的含量[J].中国中药杂志，2003，28（9）：839-841.

[3] 冯旭，王胜波，邓家刚，等.高效液相色谱法同时测定芒果叶中芒果苷与高芒果苷的含量[J].中成药，2008，30（10）：1504-1506.

[4] 皱登峰，高雅，张可峰.不同品种芒果叶中芒果苷含量的测定[J].安徽农业科学，2010，38（6）：2947-2498.

[5] 国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部[M].北京：中国医药科技出版社，2010：176-177.

[6] 杨道纳，蔡天进，刘金来，等.HPLC测定中医滋补膏方中橙皮苷含量[J].中国现代应用药学，2013，30（5）：511-513.

（收稿日期：2015-08-25）

（修回日期：2015-09-13；编辑：陈静）