Mini VIDAS与国标法检测金黄色葡萄球菌的比较及其在食物中毒中的应用

□ 梁兰英 许 娟 陈仕超 佛山市三水区疾病预防控制中心



Mini VIDAS与国标法检测金黄色葡萄球菌的比较及其在食物中毒中的应用

□ 梁兰英 许 娟 陈仕超 佛山市三水区疾病预防控制中心

摘 要：笔者使用Mini VIDAS方法和GB4789.10-2010第一法检测金黄色葡萄球菌，并对二者进行比较。GB4789.10-2010第一法（国标法），只检验金黄色葡萄球菌，对可疑食物中毒样品或产生葡萄球菌肠毒素的金黄色葡萄球菌菌株的鉴定，应检验其肠毒素。利用Mini VIDAS检测金黄色葡萄球菌肠毒素与检测金黄色葡萄球菌致病菌相比较，从检测时间、检出率、中毒判断等方面来说明检测肠毒素的重要性。Mini VIDAS检测金黄色葡萄球菌肠毒素检测时间一般为25.5小时，最快只需要90分钟，而GB4789.10-2010第一法检测金黄色葡萄球菌平均检测时间为78小时，而且检出率较前者低。可见，Mini VIDAS能在较短时间内直接检出金黄色葡萄球菌肠毒素，并克服了食物中毒时致病菌已死，无法检出，造成判断失误的弊端。

关键词：Mini VIDAS；金黄色葡萄球菌；肠毒素

金黄色葡萄球菌广泛分布于自然界中，人和动物都有较高的带菌率。金黄色葡萄球菌食物中毒致病因素主要是肠毒素，肠毒素可耐受100℃煮沸30 m in而不被破坏，并能抵抗胃肠道中蛋白酶的水解作用，易造成食物中毒。据美国CDC网站报告，由金黄色葡萄球菌引起的食物中毒占整个细菌性食物中毒的33%。近年来，我国也发生了多起金黄色葡萄球菌引起的食物中毒事故，给广大人民群众的身体健康带来危害。现行检测金黄色葡萄球菌方法，从选择性增菌到分离培养、形态学分析、血浆凝固酶等生化试验整个鉴定过程一般需要78小时，而Mini VIDAS直接检测金黄色葡萄球产生的肠毒素，检品只需要简单处理或增菌后即可直接上机测定，整个过程一般只需25.5小时，最快90分钟可得出结果，而且避免了由金黄色葡萄球引起的食物中毒。由于金黄色葡萄球在食物加工或加热过程中被消灭，因而无法检出，但在被灭前已产生肠毒素，导致食物中毒检测时错判漏判。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 检材来源

食物中毒采样检材100份，其中剩余食物46份，呕吐物30份，肛拭24份。另外，市售食品477份。

1.1.2 仪器设备和培养基

Mini VIDAS及配套试剂是由法国生物梅里埃公司出品。其他试剂及培养基是由北京陆桥试剂公司生产，均在有效期内使用。

1.2 方法

①Mini VIDAS方法。

②GB4789.10-2010第一法。

2 结果

用GB4789.10-2010第一法检测金黄色葡萄菌，总检材577份，检出金黄色葡萄球菌77份，检出率为13%。用Mini VIDAS检测金黄色葡萄球肠毒素Cutoff值是0.13，阳性检材结果为3.17～4.11，总检材577份，金黄色葡萄球肠毒素阳性103份，检出率为18%。结果见表1、2、3和4。

3 讨论

如表1所示，现行的标准检验方法GB4789.10-20 10第一法检验程序是样品处理→选择性增菌→分离培养→形态学分析→肉汤增菌→血浆凝固酶试验，整个鉴定过程耗时长且繁琐，而用Mini VIDAS直接检测样品中金黄色葡萄球肠毒素，样品只需简单处理或增菌后就可直接上机测定，整个过程一般只需25.5 h，最快90 min即可获得结果，在日常检验工作中，很大程度上代替了烦琐的手工操作。在食物中毒中，金黄色葡萄球引起的食物中毒最早和最主要的症状是呕吐，利用Mini VIDAS对呕吐物进行检测，它能有效缩短对食物中毒的诊断时间，为防止事态扩大和救治病人提供有效方法，为监督执法提供有力依据。

如表2所示，在食物中毒的检材中Mini VIDAS检出率明显高于国标法，因为在金黄色葡萄球菌引起的食物中毒中，其致病因素是肠毒素，Mini VIDAS法检测的正是肠毒素。在食物中毒检材中，活菌的检出受诸多条件的影响，如检材的采集量，受污染程度，送检时间等，均可能出现假阴性，而肠毒素比较稳定，Mini VIDAS检出灵敏度高，所以Mini VIDAS法在食物中毒检测中具有优势。在市售食物中，速冻米面制品、肉及肉制品、面包糕点检出率较高，因为肠毒素主要存在于含蛋白质丰富、水份多，同时含有一定淀粉的食物中。所以，在食品安全风险监测过程中，有必要进行针对性采样，从而加强对疾病的预防和控制，以达到保障人民群众身体健康的目的。

表1 两法检测时间比较

表2 两法检出率比较

表3 加标加热试验

表4 金黄色葡萄球菌落特征及生化反应结果

肠毒素耐热性强，必须加热到100℃维持2小时才能够破坏其毒素。表3试验表明金黄色葡萄球菌产生的肠毒素比金黄色葡萄球菌耐热。在食物中毒的实例中，曾有过中毒特征、临床症状及流行病学等方面都与金黄色葡萄球菌引起的食物中毒非常相似，但在可疑食物中未检出金黄色葡萄球菌，而用Mini VIDAS检测同一份样品却检测出金黄色葡萄球菌肠毒素。所以，利用Mini VIDAS能更大可能地检出致病因子。这可能是由于食物在生产过程中已被金黄色葡萄球菌污染，并在适宜的条件下产生肠毒素，人们在食用这些食物前虽然都加热煮熟，但金黄色葡萄球菌被消灭，而肠毒素还在，所以仍会引起食物中毒。

用GB4789.10- 201 0第一法检测金黄色葡萄球菌，其结果鉴定依据是金黄色葡萄球菌在各种选择性培养基的菌落特征及生化反应，但菌落特征及生化反应常常受诸多客观因素影响，如血平板不新鲜，则溶血现象消失或不明显；Bair- Paiker平板如果不新鲜或配制不当，则透明环不出现或延迟出现；血浆凝固酶试验所用菌液必须是新鲜的，否则会出现假阴性。而用Mini VIDAS直接检测金黄色葡萄球肠毒素，则不受上述条件限制，只要样品中存在金黄色葡萄球菌肠毒素，其浓度大于Cutoff值，就能得出阳性结果。

4 结语

随着社会的发展，人们的生活节奏不断加快。成品或半成品的食物越来越普及，食品安全越来越受到人们的重视，而由于金黄色葡萄球菌在自然界的广泛存在，由它引起的食物中毒也是国内外常见的细菌性食物中毒之一，所以，要普及使用Mini VIDAS法检测金黄色葡萄球菌的肠毒素，特别在食物中毒事件中更显其优势和重要性。

参考文献

［1］孟昭赫.食品卫生检验方法注解微生物学部分［M］.北京：人民卫生出版社，1990.

［2］王秀茹.预防医学微生物学及检验技术［M］.北京：人民卫生出版社，2002.

基金编号：佛山市医学科技攻关项目（编号：2014AB001275）。