妊娠女性荧光定量检测高危HPV感染情况及基因型分析

解放军第306医院妇产科 (北京 100101)

党艳丽　王　莉　马晓旗△



妊娠女性荧光定量检测高危HPV感染情况及基因型分析

解放军第306医院妇产科 (北京 100101)

党艳丽王莉马晓旗△

摘要目的：应用荧光定量PCR反应(FQ- PCR)技术检测北京地区妊娠中期不同年龄女性高危人乳头瘤病毒(HPV)感染情况，了解基因型别分布情况。 方法：采用FQ- PCR方法对2030例妊娠中期女性进行15种高危型HPV型别分析。 结果：北京地区妊娠中期女性HPV感染率为10.79%，其中高危型HPV-52、HPV-58、HPV-51、HPV-16感染率最高,占15种HPV型别检出型别的百分率依次为23.29%、15.53%、14.16%、13.70%。6个年龄组感染率最高依次为小于20岁、20～24岁、40岁以上，分别为20.00%、15.85%、13.63%。 结论：北京地区妊娠中期女性高危型HPV感染较为普遍，HPV-52、HPV-58、HPV-51、HPV-16型别感染最为多见。低龄段妊娠期女性感染率最高，应加强随访。

主题词乳头状瘤病毒感染妊娠中期妊娠，高危基因分型技术

人乳头状瘤病毒(HPV)是常见的一种性传播疾病的病原体，分为高危型HPV及低危型HPV，其中高危型HPV已被证实与宫颈癌密切相关。高危型HPV(癌相关型，HRHPV)主要包括HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59等型别，尤其HPV16、HPV18是女性宫颈癌发病的重要型别。HPV越来越受到重视，有学者提出以高危HPV检测作为宫颈癌筛查的首选方案[1]。妊娠期是人体的特殊时期，HPV感染的影响和处理是非常重要的问题。为此，我们用荧光定量PCR反应(FQ - PCR)技术对近1年来我院妊娠中期女性标本进行分析，以了解妊娠期高危HPV感染情况，现报告如下。

资料和方法

1标本与采集收集2015年5月到2016年4月在我院妇产科门诊就诊筛查HPV的中期妊娠女性2030例，年龄18～47岁。采集前先用棉拭子将宫颈口的分泌物沾除，再将宫颈刷伸入宫颈内1～2cm处，顺时针旋转5圈，收集宫颈口及颈管的脱落上皮细胞，取出宫颈刷，将其放入标有编号的取样管中，取样管内已加有专用细胞保存液，拧紧瓶盖，标本保存后，4℃存放，并在1周内检测。

2方法采用上海之江生物科技股份有限公司生产的“高危型HPV分型核酸测定试剂盒(荧光PCR照试剂盒)标注的操作流程提取患者宫颈脱落细胞DNA，每份标本构建4个PCR反应体系(4个反应体系所包含15种高危型别包括HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、66、68、82分型)。同时在 SLAN96R 实时荧光PCR扩增仪上进行扩增，扩增条件如下：除垢 37℃ 5 min；预变性94℃ 1min；95℃ 5s → 60℃ 30 s循环 40次，于60℃处收集荧光信号。反应结束后，由电脑自动分析 ,最终根据每个样本4个体系的结果情况综合判读HPV具体型别。有两种或两种以上型别显色阳性者认定为多重感染，P⟨0.05认为差异有统计学意义。

3统计学方法采用 SAS9.0统计学软件，进行χ2检验，P⟨0.05认为差异有统计学意义。

结果

1HPV高危型检测结果妊娠中期筛查人数2030例，15种高危型基因分型检测阳性219例，阳性率10.79%，其中单纯感染177例，占妊娠期总感染者8.72%,二重型别感染33例，占妊娠期总感染率者1.63%，三重型别感染8例，占妊娠期总感染率者0.4%，四重型别感染1例，占妊娠期总感染率者0.05%。

2HPV感染率与妊娠年龄关系小于19岁感染率最高，达到20%；20～24岁感染率其次，达到15.85%，再次是大于40岁组，为13.65%。各年龄段经χ2检验，差异无统计学意义(P>0.05)，见表1。

3HPV高危型型别分布在妊娠中期筛查中， 15种型别感染率由高到低分布为HPV52(51例，23.29%)、58HPV(34例，15.53%)、51HPV(31例，14.16%)、16HPV(30例，13.70%)、39HPV(24例，10.96%)、56HPV(19例，8.68%)、18HPV(15例，6.85%)、59HPV(14例，6.39%)、66HPV(14例，6.39%)、31HPV(13例，5.94%)、68HPV(12例，5.48%)、33HPV(6例，2.74%)、45HPV(4例，1.83%)、35HPV(2例，0.91%)、82HPV(2例，0.91%)(多种重复感染型别重复计数)，见表2。

4HPV16、HPV18在妊娠中期感染率HPV16、HPV18在妊娠中期177例单一感染分别为22例(12.43%)、10例(5.65%)，共计32例(18.08%)；在42例重复感染中HPV16、HPV18感染分别为8例(19.05%)、5例(11.90%)，共计13例(30.95%)，见表3。

表1　妊娠中期女性宫颈HPV感染年龄分布

注：各年龄组之间感染率比较，P>0.05(P=0.5575)；其中，小于20岁组例数5例不计入统计

表2　HPV型别在妊娠中期感染分布

注：本检测中单一感染177例，二重感染33例，三重感染8例，四重感染1例

表3　HPV16、HPV18在妊娠中期感染情况

讨论

HPV感染已被公认为是引起宫颈癌及宫颈上皮内瘤病变的主要原因，HPV检测在宫颈癌筛查中的作用已无可非议。单纯HPV阳性不代表宫颈癌的发生，但是能有效地判断宫颈癌发病的风险。子宫颈的癌前病变(CIN)到癌是个相对较长时间的过程，即宫颈感染HPV→CIN→原位癌→早期浸润癌→浸润癌，整个病理过程要经过10年左右的时间。近年来，人乳头瘤患病率呈上升趋势，且趋于年轻化。据研究，约50%～90%的HPV感染可在感染后数月至2年内被免疫系统清除，感染的平均持续时间为8～12个月。如果在间隔1年以上的时间连续两次检测出同一高危型HPV被认为是持续感染，只有慢性持续高危型HPV感染最终演变为宫颈癌。

不同文献显示对于妊娠期HPV感染阳性率报道也不一致，可能于地区差异、不同人群有关[2]，认为妊娠期感染率明显增高，同时年龄小于25岁，更容易感染[3]。在我们本次研究的2030名北京地区孕妇中，HPV检出率为10.79%，而且HPV感染率在25岁以下高达20%及15.85%。虽然组间无统计学差异(P=0.5575)，但低龄年龄段阳性率明显高于其他年龄段，表明需进一步重视年轻女性的HPV感染。在HPV型别检测中最常见的型别是HPV52，HPV16型别位于第4位，HPV18型别位于第7位。除了对HPV16、HPV18型别重视，HPV52型的感染率也需要给予重点关注和研究。在重复感染中HPV16、18型感染率更高，因而更应注重重复感染。由于妊娠期盆腔外生殖器血运丰富，胎盘分泌大量的绒毛膜促性腺激素、雌激素、孕激素、胎盘生乳素等抑制免疫反应，使母体出现免疫耐受或免疫反应无应答，且胎儿宫内发育过程中也可产生大量胚胎抗原抑制母体的免疫反应。因此，妊娠女性可能新感染HPV或者HPV感染的女性会加重感染程度，而这些仍需进一步证实。另一个需要关注的是新生儿的结局，虽然有文献报道妊娠中期HPV感染对新生儿预后影响相对较小[4]，但妊娠期HPV的高感染率对新生儿也需要继续关注。

参考文献

[1]Huh WK, Ault KA, Chelmow D,etal. Use of primary high-risk huma papillomavirus testing for cervical cancer screening: Interim clinical guidance[J]. Gynecol Oncol,2015,136(2):178-182.

[2]Uribarren-Berrueta O, Sánchez-Corona J, Montoya-Fuentes H,etal.Presence of HPV DNA in placenta and cervix of pregnant mexican women[J].Arch Gynecol Obstet,2012,285(1)：55-60.

[3] Liu P, Xu L, Sun Y,etal.The prevalence and risk of human papillomavirus infection in pregnant women[J].Epidemiology and Infection，2014,142(8)，1567-1578.

[4]Tenti P, Zappatore R, Migliora R,etal.Perinatal transmission of human papillomavirus from gravidas with latent infections[J]. Obstet Gynecol, 1999,93:475-479.

(收稿:2016-05-04)

【中图分类号】R714.2

【文献标识码】A

doi：10.3969/j.issn.1000-7377.2016.07.41

△ 西北妇女儿童医院医学检验中心