重症患者外周血T淋巴细胞亚群免疫分型的检测与临床意义

贾正友（云南省楚雄彝族自治州人民医院检验科，云南 楚雄 675000）

重症患者外周血T淋巴细胞亚群免疫分型的检测与临床意义

贾正友*
（云南省楚雄彝族自治州人民医院检验科，云南 楚雄 675000）

目的 探讨外周血T淋巴细胞亚群免疫分型在重症患者中的变化及临床意义。方法 收集2014年1月至2015年5月我院重症加强医疗病房（ICU）的住院患者100例为观察组，并选择同期健康体检人员50例为健康对照组，采用流式细胞仪分别检测两组人员的外周血T淋巴细胞亚群数量（绝对计数）和百分数。另将观察组按序贯器官衰竭评估（SOFA）标准，分为重症组（SOFA＜3分）和危重症组（SOFA≥3分）进行比较，并进行统计分析。结果 观察组外周血CD3+T淋巴细胞（简称CD3+）、CD3+CD4+T淋巴细胞数量（简称CD4+）、CD3+CD8+T淋巴细胞数量（简称CD8+）、CD4+%、CD4+/CD8+比值明显低于健康对照组，差异均具有统计学意义（P＜0.01）；而外周血CD+%明显高于健康对照组，差异有统计学意义（P＜0.01）。重症组和危重症组比较，危重症组CD+、CD+细胞数量、CD+%、CD+/83444CD8+比值明显低于重症组，差异均具有统计学意义（P＜0.01）；而CD4+%明显高于重症组，差异有统计学意义（P＜0.01）；CD8+变化不明显（P＞0.05）。结论 重症加强医疗病房（ICU）患者存在外周血T淋巴细胞水平异常，表明患者机体免疫功能存在障碍，且免疫功能状态与病情危重程度有关。尽早检测ICU患者外周血T淋巴细胞数量，对于ICU患者病情的早期诊断、评估及指导临床治疗具有较好的临床意义。

T淋巴细胞亚群；绝对计数；重症患者；免疫功能

［Abstract］Objective To investigate the changes of T lymphocyte subsets in the peripheral blood and its clinical significance in the patients with severe. Methods Collected in January 2014 to May 2015 in our hospital intensive care unit （ICU）， 100 cases of hospitalized patients as the observation group and select healthy persons 50 cases as healthy control group by flow cytometry were detected two groups of researchers in peripheral blood T lymphocyte subsets （absolute count） and percentage. The observation group according to the standard of the sequential organ failure assessment （SOFA）， for the severe group （SOFA score ＜ 3 of 65 cases） and the critically ill patients group （SOFA score≥ 3 of 35 cases） were compared and statistical analysis. Results The observation group peripheral blood CD3+T lymphocytes （CD3+）， CD3+CD4+T lymphocyte number （CD4+）， CD3+CD8+T lymphocyte number （CD8+）， CD4+，CD4+/CD8+ratio was significantly lower than that in healthy control group， the difference is statistically significant （P＜0.01）； peripheral blood CD8+% was significantly higher than that in the normal control group， the difference is statistically significant （P＜0.01）. Severe group and critically ill group， critical group of disorders of CD3+， CD4+cell number， CD4+， CD4+/CD8+ratio was significantly lower than that of the severe group， there were significant differences，with statistical significance （P＜0.05）； and CD4+were significantly higher than those in the severe group， the difference is statistically significant （P＜0.01）；CD8+change is not obvious （P＞0.05）. Conclusions The abnormal levels of peripheral blood T lymphocytes in the patients with severe enhanced medical wards （ICU） indicated that the immune function of the patients was impaired， and the immune function state was related to the severity of the disease. Early detection of T lymphocyte number in patients with ICU， the early diagnosis， assessment and clinical treatment of ICU patients with disease has good clinical significance.

［Key words］T lymphocyte subsets； Absolute count； Severe patients； Immunity

重症加强医疗病房（ICU）患者极大部分都是病因复杂，病情变化较快，大多存在由一开始的单一器官、系统功能异常和障碍转向多器官、多系统的功能异常和障碍。多器官功能障碍综合征（MODS）和多器官功能衰竭（MOF）以及脓毒血症是ICU患者的常见而且危重的并发症，MOF病死率可高达60%～94%［1］。近年来的许多研究表明免疫系统功能的状态在ICU患者整个疾病的发生、发展与转归中起到了重要的作用［2］。本文通过研究检测ICU患者外周血T淋巴细胞亚群数量水平，旨在探讨ICU患者的免疫功能变化和疾病的发生、发展之间的关系，为临床提供诊断和治疗的依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料：选择2014年1月至2015年5月本院ICU的住院患者100例，其中男62例，女38例；年龄21～88岁，平均年龄（62.5±10.5）岁。所有病例均排除自身免疫性疾病和免疫缺陷性疾病，并且近期也未使用过影响免疫系统功能的药物。选择同期本院健康体检者50例为健康对照组，其中男29例，女21例；年龄23～79岁，平均年龄（60.3±11.6）岁。两组在年龄及性别构成比差异上无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。

1.2 仪器与试剂：流式细胞仪为美国BD公司的FACSCalibur三色单平台仪器，检测试剂

CD4-FITC/CD8-PE/CD3-PerCP抗体、TrucountTM计数管、FACS （10X）溶血素、四色荧光标准微球也来自于BD公司，并严格按照使用说明书使用。所有检测项目均严格执行室内质量控制，质控品来自于BECKMAN COULTER（贝克曼）公司。

1.3 方法：两组均采用相同的样本处理及检测方法，采集清晨空腹肘静脉血2.0 mL，加入含有EDTA-K2抗凝的专用真空采集管中，充分混匀抗凝。分别在TrucountTM计数管中加入CD3-FITC/CD4-APC/CD8-PE抗体20 μL，用反向加样法准确加入抗凝全血50 μL，充分混匀，室温避光放置15～20 min后再加入450 μL专用FACS（10X）溶血剂，混匀，室温放置15 min后上机运行Multiset程序检测获取数据，处理好的样本在2 h内检测完毕。

表1 观察组与健康对照组CD3+（cell/μL）、CD4+（cell/μL）、CD8+（cell/μL）、CD4+/CD8+、CD4+%、CD8+%水平比较（±s）

表1 观察组与健康对照组CD3+（cell/μL）、CD4+（cell/μL）、CD8+（cell/μL）、CD4+/CD8+、CD4+%、CD8+%水平比较（±s）

注：*与健康对照组比较，差异具有极显著意义（P＜0.01）

CD8+（cell/μL）　　（cell/μL）　　（cell/μL）　　（%）　　（%）观察组　100　662±381*　321±169*　330±205*　1.25±0.67*　48.39±9.54*　47.63±12.70*对照组　50　1523±385　868±242　594±170　1.53±0.39　56.67±5.84　38.75±5.55 F值　0.000　2.351　2.816　14.463　23.023　30.657 P值　0.000　0.000　0.000　0.007　0.001　0.000组别　例数　CD3+CD4+CD8++CD4+/CD8+CD4

表2 重症组与危重症组CD3+（cell/μL）、CD4+（cell/μL）、CD8+（cell/μL）、CD4+/CD8+、CD4+%、CD8+%水平比较（±s）

表2 重症组与危重症组CD3+（cell/μL）、CD4+（cell/μL）、CD8+（cell/μL）、CD4+/CD8+、CD4+%、CD8+%水平比较（±s）

注：*与重症组比较，差异具有极显著意义P＜0.01

（cell/μL）　　（cell/μL）　　（cell/μL）　　（%）　　（%）重症组　65　739±388　381±169　344±256　1.42±0.69　54.00±12.13　43.84±12.28危重症组　35　525±329*　213±105*　304±236　0.95±0.51*　45.20±12.35*　53.20±11.71* F值　0.559　7.028　0.095　4.921　0.451　0.025 P值　0.007　0.000　0.429　0.001　0.001　0.000组别　例数　CD3+CD4+CD8+++CD4+/CD8CD4+ CD8

1.4 统计学处理：采用SPSS20.0软件对数据进行统计学分析，计量资料采用均数±标准差（±s）表示，组间统计比较采用方差分析和t检验，以P＜0.05为差别有统计学意义。

2 结 果

2.1 观察组与健康对照组比较，观察组外周血CD3+、CD4+、CD8+T淋巴细胞数量、CD4+%、CD4+/CD8+明显低于健康对照组，差异均具有极显著意义（P＜0.01）；而外周血CD8+%明显高于健康对照组，差异具有极显著意义（P＜0.01）。见表1。

2.2 将观察组按序贯器官衰竭评估（SOFA）标准，分为重症组（SOFA＜3分）和危重症组（SOFA评分≥3分）。两组比较，危重症组外周血CD3+、CD4+T淋巴细胞数量、CD4+%、CD4+/CD8+明显低于重症组，差异具有统计学意义（P＜0.01）；CD8+T淋巴细胞变化不明显（P＞0.05）；而CD8+%明显高于重症组，差异均有统计学意义（P＜0.01）。见表2。

3 讨 论

重症加强医疗病房（ICU）的住院患者，常常由于重大的创（烧）伤、手术操作、恶性肿瘤、出血、缺血缺氧、休克、急性中毒等非感染因素和多种病原微生物感染引发的脓毒血症所引起。患者病因错综复杂，病情危重且变化较快，患者机体往往处于一个急性应激状态，主要表现为蓝斑-交感-肾上腺髓质系统和下丘脑-垂体-肾上腺皮质系统兴奋，肾上腺糖皮质激素分泌旺盛。如果这种应激状态过于强烈而且持续时间较长，就会引起机体代谢和器官功能的变化以及组织器官的损伤。甚至会引发多器官功能障碍综合征（MODS）和多器官功能衰竭（MOF）。此时，患者机体就会发生一系列的病理生理变化，包括心血管系统、消化系统、凝血系统、免疫系统等方面的变化，而免疫系统功能的状况和ICU患者疾病的发生、发展与转归密切相关［3］。MODS/MOF是重症患者死亡的主要原因之一，因此，研究ICU患者的免疫功能状况，对于患者的病情判断以及指导治疗就显得尤为重要。

外周血中T淋巴细胞来源于骨髓，在胸腺中发育成熟。T细胞（抗原）受体与CD3分子复合物（TCR-CD3）是T淋巴细胞的特有标志。T淋巴细胞具有高度的异质性，根据其表面标志和功能特性，可以分为CD3+CD4+的辅助性T淋巴细胞（CD4+Th）和CD3+CD8+的抑制性T淋巴细胞（CTL）。CD4+T淋巴细胞在调节免疫系统中对免疫反应的启动、最终表现形式和强弱起着关键作用。CD4+Th细胞在初始阶段接受抗原刺激后，继续分化为分泌型的Th细胞亚群：Th1细胞、Th2细胞、Th3细胞和Th17细胞。Th1细胞能分泌γ-干扰素（IFN-γ）、肿瘤坏死因子（TNF）、白细胞介素-2（IF-2）。Th1细胞的主要功能是增强吞噬细胞介导的抗感染、抗肿瘤免疫，在细胞免疫应答中发挥重要作用，在病理情况下，Th1细胞还参与迟发型的超敏反应和器官特异性自身免疫性疾病。Th2细胞分泌一些细胞因子（IF-4、IF-5、IF-6、IF-10及IF-13），Th2细胞的主要功能是辅助体液免疫应答，并在过敏性疾病和感染性疾病中发挥重要作用。CTL细胞通过分泌穿孔素、颗粒酶、淋巴毒素以及通过FasL途径导致靶细胞的裂解和凋亡。T淋巴细胞是细胞免疫中最主要的免疫细胞，几乎参与了所有的特异性免疫反应。既是直接抵御抗原和肿瘤细胞的效应细胞，又是体液免疫与细胞免疫反应之间的调节者［4］。其各亚群之间的动态平衡，对于维持与调节机体的免疫系统功能状态尤为重要。

正常情况下，CD3+细胞、CD4+T细胞和CD8+T细胞的数量处于一个动态平衡并且相互调节的状态。CD4+/CD8+的值反映了机体的免疫平衡状态，CD4+/CD8+明显降低、说明机体处于免疫抑制状态［5-6］。本文研究显示，ICU患者外周血CD3+、CD4+T淋巴细胞数量、CD4+%、CD4+/CD8+明显低于健康对照组，CD8+%明显高于健康对照组，说明患者的免疫功能明显低下，细胞免疫功能处于明显抑制状态。其机制可能为：当机体遭受严重创（烧）伤、恶性肿瘤、急性中毒、休克、感染后所致脓毒症等，T淋巴细胞对特异性抗原刺激无增殖性反应，大量的T淋巴细胞发生凋亡。凋亡清除了大量活化的T淋巴细胞，使诱导T淋巴细胞克隆无反应，患者淋巴细胞数量明显减少，患者机体的特异性免疫功能处于抑制状态，而非特异性免疫功能则呈高度活跃状态；另一方面，一些严重的病因使得CD4+T淋巴细胞分化异常，CD4+/CD8+比值失衡，Th1细胞/Th2细胞平衡状态发生漂移，其分泌的细胞因子也随即发生改变，结果导致了机体免疫功能的障碍［7］。这样一来，ICU的患者就很容易丧失对迟发型过敏反应的能力、清除病原体无力、容易引起医源性感染和罹患恶性肿瘤以及病情迁延不愈，甚至恶化。本研究中，观察组CD8+T淋巴细胞绝对数量较对照组明显降低，而CD8+的百分比明显升高，是因为观察组中总T淋巴细胞绝对数量明显降低所致，并无矛盾之处。另外，本研究还显示，危重症组较重症组患者外周血CD3+、CD4+、CD8+淋巴细胞数量、CD4+百分比、CD4+/CD8+明显降低，CD8+的百分比明显升高，说明危重症组比重症组免疫功能障碍更严重，从而说明患者病情越严重，机体的免疫功能抑制越严重［8］，患者的预后更差。当然，由于条件所限，未能同时进行如淋巴细胞亚群中B细胞、NK细胞以及免疫球蛋白，补体等的检测是本研究的不足之处，如能进行，将会对ICU患者的免疫功能监测更客观和全面。

综上所述，ICU患者存在免疫功能障碍，尽早和动态对其外周血T淋巴细胞亚群进行检测，对于ICU患者病情的判断、指导综合治疗具有重要的临床意义。

［1]邱海波，周韶霞.多器官功能障碍综合征现代治疗［M］.北京:人民军医出版社，2001:8-11.

［2]陈永斌，张敏珍，杨国辉.细胞免疫功能测定在危重症患者中的临床意义［J/CD］.中国危重症医学杂志:电子版，2010，3（6）:384-388.

［3]曹相原.重症医学教程［M］.北京:人民卫生出版社，2014:55-83.

［4]金伯泉.医学免疫学［M］.5版.北京:人民卫生出版社，2008:101-107.

［5]陈红芳，王香梅，罗建勤，等.脑出血体液免疫变化及其临床意义［J］.中国危重病急救医学，2005，17（3）:177-179.

［6]路静.外周血T细胞亚群检测在恶性肿瘤中的价值［J］.中国现代药物应用，2014，8（20）:35-36.

［7]张庆红，姚咏明.进一步重视创（烧）伤脓毒症的免疫监控［J］.中华急诊医学杂志，2014，23（2）:125-128.

［8]戴凌燕，章义利，程碧环.T淋巴细胞亚群变化与脓毒症发病的关系［J］.中华全科医学，2014，12（5）:715-716.

Detection and Clinical Significance of T Lymphocyte Subsets in Peripheral Blood in Severe Patients

JIA Zheng-you
（Department of Laboratory， Chuxiong People's Hospital， Chuxiong 675000， China）

R446

B

1671-8194（2016）18-0008-03

E-mail： yncxjzy@126.com