上皮性卵巢肿瘤血清中RASSF1A基因异常甲基化检测及临床评价

刘金钰，杨雪，李艳艳，高春英.吉林省肿瘤医院妇瘤一科，吉林长春　30000；.吉林大学中日联谊医院妇瘤一科，吉林长春　30000

上皮性卵巢肿瘤血清中RASSF1A基因异常甲基化检测及临床评价

刘金钰1，杨雪2，李艳艳1，高春英1
1.吉林省肿瘤医院妇瘤一科，吉林长春130000；2.吉林大学中日联谊医院妇瘤一科，吉林长春130000

目的探究上皮性卵巢肿瘤血清中RASSF1A基因异常甲基化检测与临床意义。方法选择2014年2月—2016年2月于该院接受治疗的88例卵巢肿瘤患者，其中上皮性卵巢癌44例为观察组，良性肿瘤患者44例为对照组，再检测对比两组RASSF1A基因异常甲基化。结果观察组血清RASSF1A基因异常甲基化比率为56.8%显著高于对照组，差异有统计学意义，P＜0.05；WHO病理II级、III级患者血清中RASSF1A基因异常甲基化比率为60.0%、81.8%均显著高于I级患者，差异有统计学意义，P＜0.05；FIGO分级III～IV级患者血清中RASSF1A基因异常甲基化比率为80.0%显著高于I～II级患者，差异有统计学意义，P＜0.05。结论在临床上诊断上皮性卵巢肿瘤可对RASSF1A基因异常甲基化进行检测，可为临床治疗与预后提供新思路，具有重要临床参考价值。

上皮性卵巢肿瘤；血清；RASSF1A基因；甲基化；检测

［Abstract］Objective To explore the RASSF1A gene in epithelial ovarian cancer serum abnormal methylation detection and clinical significance.Methods From February 2014 to February 2016 in our hospital treated 88 cases of patients with ovarian tumors，including epithelial ovarian cancer in 44 cases of observation group，and 44 patients with benign tumor as the control group，to detect abnormal compared two groups of RASSF1A gene methylation.Results Observation group serum abnormal methylation rate of RASSF1A gene is 56.8%higher than that of control group，with statistical difference，P＜0.05；WHO pathological class II，III grade patients serum abnormal methylation rate of RASSF1A gene is 60.0%，81.8%were significantly higher than that of patients with grade I，statistically difference，P＜0.05；FIGO class III～IV in serum in patients with abnormal methylation rate of RASSF1A gene is 80.0%higher than that of grade I～II patients，statistically difference，P＜0.05.Conclusion In clinical diagnosis of epithelial ovarian tumor of RASSF1A gene abnormal methylation detection，can provide new ideas for clinical treatment and prognosis，has the important clinical reference value.

［Key words］Epithelial ovarian tumor；Serum；RASSF1A gene；Methylation；Test

在卵巢癌中上皮性卵巢癌是较为常见组织类型。上皮性卵巢癌约为卵巢良性肿瘤50%，约为卵巢原发性恶性肿瘤85%，且是女性生殖系统恶性肿瘤中死亡率最高的，严重影响了女性健康［1］。近些年研究显示，在多数肿瘤发展期间RASSF1A基因发挥着重要作用［2］。该研究选择2014年2月—2016年2月于该院接受治上皮性卵巢癌44例，良性肿瘤患者44例，检测对比以上两组RASSF1A基因异常甲基化，并给予临床评价，以便于上皮性卵巢肿瘤早期诊断。现报道如下。

1　资料与方法

1.1一般资料

在2014年2月—2016年2月该院收治的88例卵巢肿瘤患者中，44例为上皮性卵巢癌为观察组，44例为良性卵巢肿瘤为对照组，且均经病理学确诊。其中观察组年龄为37～69岁，平均年龄为（51.4±10.2）岁，WHO病理分级：18例I级，15例II级，11例III级，经FIGO分期：29例I～II期，15例III～IV期。对照组年龄为38～68岁，平均年龄为（51.6±14.8）岁。两组在一般资料上差异无统计学意义，P＞0.05。

1.2方法

1.2.1采集样本 两组均于术前1 d空腹采集3～5 mL的外周静脉血，于室温中保存1 h，后经4 000 r/min 20 min离心，然后收集上层血清，在-80℃下保存。

1.2.2提取DNA按提取试剂盒说明将样本中基因组DNA提取出，每次约得到100 μL基因组DNA。经2.5%琼脂糖凝胶电泳、紫外分光光度法对DNA浓度、纯度进行检测，并在-20℃冰箱内保存。根据DNA甲基化试剂盒说明行DNA变性与亚硫酸氢盐转化，每次均可获得10 μL修饰后基因组DNA，并在-20℃冰箱内保存。

1.2.3检测RASSF1A基因异常甲基化 采用PCR扩增甲基化引物、非甲基化引物。反应中选择20 μL体系，反应条件：94℃4 min预变性，94℃30 s变性，60℃45 s退火，72℃1 min延伸，经35次循环；72℃1 min再延伸。在2.5%琼脂糖凝胶电泳中置入酶切产物检测，电泳时间35 min，电压为110 V，后行紫外凝胶成像系统分析。

1.3临床观察指标

DNA异常甲基化：于RASSF1A基因异常甲基化引物下可扩增产物；不存在DNA异常甲基化：于非RASSF1A基因异常甲基化引物下可扩增产物。

1.4统计方法

采用SPSS 17.0统计学软件行数据分析，且计数资料用百分率（%）表示，经χ2检验，P＜0.05表明差异具有统计学意义。

2　结果

2.1两组血清RASSF1A基因异常甲基化情况对比

观察组血清RASSF1A基因异常甲基化比率为56.8%显著高于对照组，差异有统计学意义，P＜0.05。见表1。

表1　两组血清RASSF1A基因异常甲基化情况对比

2.2观察组不同病理分级与临床分期血清中RASSF1A基因异常甲基化情况对比

WHO病理II级、III级患者血清中RASSF1A基因异常甲基化比率为60.0%、81.8%均显著高于I级患者，差异有统计学意义，P＜0.05；FIGO分级III～IV级患者血清中RASSF1A基因异常甲基化比率为80.0%显著高于I～II级患者，差异有统计学意义，P＜0.05。

表2　观察组不同病理分级与临床分期血清中RASSF1A基因异常甲基化情况对比

3　讨论

RASSF1A基因是在肺癌中发现的新型候选抑癌基因，该研究显示，RASSF1A基因是位于3p21.3区域中，在全部小细胞肺癌细胞系内其mRNA表达均体现为降低或缺失，可有效减缓癌细胞发展，促进细胞成熟、分化与凋亡［3］。DNA甲基化为最早发现的DNA表现遗传修饰途径［4］。针对基因组DNA，其正常甲基化能够有效维持细胞、组织器官正常功能，但异常甲基化会导致细胞内排序状态紊乱，促进肿瘤的发生与发展［6-8］。

该研究中，44例上皮性卵巢癌为观察组，44例良性肿瘤患者为对照组，通过检测对比两组RASSF1A基因异常甲基化，结果显示，观察组血清RASSF1A基因异常甲基化比率为56.8%显著高于对照组，差异有统计学意义，P＜0.05；WHO病理II级、III级患者血清中RASSF1A基因异常甲基化比率为60.0%、81.8%均显著高于I级患者，差异有统计学意义，P＜0.05；FIGO分级III～IV级患者血清中RASSF1A基因异常甲基化比率为80.0%显著高于I～II级患者，差异具有统计学意义，P＜0.05。表明RASSF1A基因异常甲基化检测能够为上皮性卵巢肿瘤诊治及预后提供重要临床辅助作用。此外，大量研究显示，DNA甲基化能够DNA构象、DNA稳定性、染色质结构以及DNA及蛋白质间相互作用发生变化，进而对基因表达进行控制［9-10］。与本研究结果一致。

综上所述，在临床上诊断上皮性卵巢肿瘤可对RASSF1A基因异常甲基化进行检测，可为临床治疗与预后提供新思路，具有重要临床参考价值。

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Epithelial Ovarian Cancer in Serum RASSF1A Gene Abnormal Methylation Detection and Clinical Evaluation

LIU Jin-yu1，YANG Xue2，LI Yan-yan1，GAO Chun-ying1
1.Department of gynecologic oncology，Jilin Provincial Cancer Hospital，Changchun，Jilin Province，130000 China；2.China Japan Union Hospital of Jilin University，Changchun，Jilin Province，130000 China

R737.31

A

2096-1782（2016）08-0007-03

10.19368/j.cnki.2096-1782.2016.08.007

刘金钰（1981.8-），女，吉林舒兰人，硕士，主治医师，研究方向：妇科肿瘤。

高春英（1962.8-），女，吉林长春人，本科，主任医师，研究方向：妇科肿瘤，E-mail：369417735@qq.com。

2016-05-05）