一例猪圆环病毒2型和大肠杆菌混合感染的诊断

杜海燕，韩俊伟（.河南新乡市动物疫病预防控制中心，河南 新乡 453000；.河南新乡市动物卫生监督所，河南 新乡 453000）

一例猪圆环病毒2型和大肠杆菌混合感染的诊断

杜海燕1，韩俊伟2
（1.河南新乡市动物疫病预防控制中心，河南 新乡 453000；2.河南新乡市动物卫生监督所，河南 新乡 453000）

猪圆环病毒病是由猪圆环病毒2型（PCV2）为主要病原引起仔猪多系统衰竭综合症，以体质下降、呼吸困难、腹泻、消瘦等为主要特征，可导致猪群产生严重免疫抑制，从而继发多种病原继发感染，是当前中国猪群感染最普遍的传染病之一。对某养猪户送检仔猪进行实验室诊断，结合临床症状确诊为猪圆环病毒2型继发大肠杆菌混合感染。

猪圆环病毒2型；大肠杆菌；混合感染

1　发病情况

该养殖户共饲养生猪300余头，品种为大约克，2016年1月份，猪群相继发病，先后死亡60头断奶仔猪，死亡率达到20%（60/300）。目前仍有12头猪在发病，病猪体温升高到40.5～40.7 ℃，精神萎顿，眼睑水肿，喜睡，耳部、胸腹部、臀部及四肢等均有暗红色或紫红色出血斑；咳嗽、打喷嚏；部分仔猪腹泻，呼吸困难，后驱无力，濒死前卧地不起，表现发抖等症状。猪群曾接种猪瘟和口蹄疫疫苗。

2　解剖病变

剖检发现皮下有出血，全身淋巴结肿大，切面呈大理石样病变；肠系膜出血，胃肠胀气；肝脏肿大质脆；脾脏有少量出血点，边缘呈齿状丘疹；肾脏肿大有针尖样出血点。肺有出血点且局部肉变；心脏内膜少许出血。

3　实验室诊断

3.1细菌学诊断

3.1.1细菌分离培养

剖检时分别用接种环无菌条件下取两头死亡猪的肝、脾、肾及淋巴结接种于鲜血琼脂培养基，置于37 ℃培养箱中培养24 h，观察在血液琼脂培养基上长出乳白色、圆形、边缘整齐、凸起、半透明、β溶血菌落，经染色镜检为革兰氏阴性杆菌；后接种于麦康凯培养基上，37 ℃培养箱中培养，观察在麦康凯培养基上长出粉红色菌落，经生化试验初步鉴定为大肠杆菌。

3.1.2药敏试验结果

取上述血液琼脂培养基上所长细菌的纯培养物，选择常用的抗菌素进行药物敏感试验，结果见表1：

药敏试验结果

由药敏试验结果可知，在与其他几种抗菌药物比较后，发现分离出的大肠杆菌对大多数药物有耐药性，头孢噻呋钠对该致病菌抑制效果较为敏感，舒坦西林和重泻一针灵等药物相对也敏感，可以选择头孢噻呋钠、舒坦西林和重泻一针进行相应治疗。

3.2PCV2病原核酸检测

3.2.1DNA提取 分别取病猪的淋巴结、脾脏组织研磨，反复冻融3次，8 000 rpm离心10 min，取上清液采用离心柱提取法提取病料DNA样本。

3.2.2PCR扩增 针对PCV2的特异性基因，合成一对引物：P1：AAGGGCTGGGTTATG GTATG/P2：CGCTGGAGAAGGAAAAATGG，预期扩增特异性核苷酸片段大小为353 bp，PCR反应体系：DNA模板5 μg，PCR Buffer 5 μl，MgCl23 μl，Taq酶1 μl，上下游引物各1 μl；PCR反应程序：94 ℃预变性5 min，94 ℃ 30 s，58 ℃ 1 min，72 ℃ 1 min，30个循环后，72 ℃延伸7 min。扩增产物经1%琼脂糖凝胶电泳检测，结果见图1。

图1　DL2000分子质量标准；-：阴性对照；

由图1可知，从送检样本的淋巴结和脾脏提取DNA，经PCR扩增后，检出猪圆环病毒2型病毒352 bp特异性核酸片段，说明送检猪感染猪圆环病毒2型，并且推断猪群存在猪圆环病毒2型的感染。

4　防治建议

根据该养殖场猪群发病情况、剖检变化、实验室细菌学及分子生物学诊断可以确定该猪场发病主要是由猪圆环病毒2型和大肠杆菌病混合感染。猪圆环病毒2型在猪群中普遍存在，因侵害免疫系统使机体的免疫抑制，进而导致其他病原的继发感染，促使死亡率升高。为防止病情进一步蔓延，应隔离病猪，将病死猪深埋无害化处理。猪群发病常常是由多种病原共同作用造成发病率和死亡率升高，本次发病为猪圆环病毒感染使机体抵抗力下降，另外加上冬季寒潮不断侵袭，保暖措施不当造成仔猪应激反应，大肠杆菌趁机侵入机体，使病情更为严重。

建议对猪群进行紧急免疫接种，定期进行免疫效果监测，确保免疫效果。对于猪群出现圆环病毒2型感染目前没有治疗效果确切的药物，可行的方法是服用抗生素减少细菌继发感染，药敏实验发现大肠杆菌对大多数药物的耐药性较强，仅对重泻一针灵、头孢噻呋钠和舒坦西林中度敏感，可以联合或轮换选用敏感性药物进行治疗，防止滥用药造成耐药菌株的产生。加强仔猪的饲养管理，搞好环境卫生，强化预防消毒，定期对免疫抗体监测，改善猪舍饲养条件，减少猪群应激，采用全进全出饲养制度，引进猪只后做好隔离观察，对养殖场显得尤为重要。

（编辑：晏兵兵）

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杜海燕（1983-），女，河南获嘉人，助理兽医师，主要从事动物疫病诊断与防治工作。