金盏菊叶柄组织培养技术初探

张艳利

河南省滑县职业教育中心

金盏菊叶柄组织培养技术初探

张艳利

河南省滑县职业教育中心

以金盏菊生长期间叶柄的茎为组培材料，结果表明：愈伤组织诱导最佳培养基为：B3MS+6-BA0.5+NAA0.1；用1‰的升汞溶液消毒时间5分钟污染率为2%，说明5分钟消毒时间为污染率最佳的消毒时长。

组织培养金盏菊培养基

金盏菊（Calendula of ficinalis L.）别名金盏花、生长菊，为菊科金盏菊属。多年生草本花卉，常作二年生花卉栽培。整个植株高度约40～60厘米，整株有被毛。叶片全缘，基生叶互生，椭圆状或倒卵形。有叶柄，上部叶抱茎生长。花单生与上部，头状花序，花径大约4～12厘米，花两性，外围舌状花两轮或多轮平展，里面筒状花多层，舌状花是其主要的观赏部位。花色有金黄色和橘黄色两种，花期2～6月份。果实7～8份成熟，瘦果弯曲呈船形，果实成熟后呈褐色带刺。常见的园艺品种有重瓣和卷瓣，目前国外还育出了单瓣、重瓣的种间杂交种，还有一些10～20厘米矮生种。金盏菊原产于南欧，现全世界各国都普遍栽培。金盏菊适应性很强，对土壤要求不严，尤其是幼苗在石灰性土壤上生长良好，适宜的pH值为6.5～8。喜光照，耐寒冷，忌夏季的酷暑高温，炎热的夏季自动停止生长。金盏菊植株矮化，花朵密集，花色鲜艳，开花早，花期长，常作花坛、花境、花台、花柱材料。也可栽培于广场、公园、车站、学校等公共场所。金盏菊对二氧化硫、氟化物、硫化氢、氯化物等有害气体。金盏菊已在我国大范围种植应用，为今后园林的绿化提供更好服务。

一、材料与方法

1.试验材料

本研究所需的材料由河南农业职业学院花卉实验室提供，取生长期金盏菊的叶柄段为外植体。

2.试验处理

金盏菊的叶柄段诱导培养基为：（1）B1 MS+6-BA0.5毫克/升 （单位同下）+GA30.5；（2）B2MS+6-BA0.5+GA31；（3）B3MS+6-BA0.5+NAA0.1；（4）B4MS+6-BA1+GA30.5；（5）B7MS+6-BA1+GA31；（6）B5MS+6-BA1+NAA0.1；本实验共设计了6组不同配比的培养基类型，每组配比试验重复3次。本实验采用固体培养基共1200毫升，用圆口塑料瓶进行分装，每瓶分别装入25～30毫升的培养基，一共装40瓶。每瓶培养基接种5个3～5毫米的叶柄茎段，做3次重复，消毒液用1‰的升汞消毒时间为4分钟、5分钟分钟、6分钟。

3.试验方法

试验材料用自来水下冲洗12小时，后用洗洁精再次清洗再次，最后用蒸馏水在冲洗干净。后放在接种台上用75%的酒精灭菌3秒左右，再用蒸馏水冲洗干净，然后用1‰的升汞溶液灭菌4分钟、5分钟、6分钟，最后用蒸馏水无菌水冲洗干净。叶柄用消毒后的吸水纸吸干多余水分，分别放在准备好的培养皿中进行分切，切成2～4毫米左右的小段待用。把切好的叶柄材料接种在不同配比的培养基上，进行愈伤组织的培养。做好观察，筛选出金盏菊愈伤组织发育好的最佳初代培养基类型。

本实验采用材料的消毒时间分别为4分钟、5分钟、6分钟，外植体消毒液都是用1‰的升汞消毒，接种12d后观察金盏菊叶柄的死亡指数，污染率及萌芽数，以便筛选出适合的金盏菊消毒的最好时间，为以后的实验做准备。

二、结果与分析

1.不同配比的培养基对愈伤组织的影响

生长期的金盏菊叶片的叶柄段分别接种在不同配比浓度的MS培养基上，在培养室温为25～27℃内，光照15小时/天进行培养，培养7天开始观察愈伤组织，愈伤组织开始生长发黄，20天后可以明显观察出不同配比浓度的MS培养基上，愈伤组织的变化情况。B3培养基上的愈伤组织的情况明显好于其它培养基上愈伤组织。B2和B4培养基上愈伤组织形成的较少，颜色嫰黄、质脆；B1和B5培养基上的愈伤组织黄褐、质软；B6培养基的愈伤组织嫰黄、较硬实；B3培养基的黄色、硬实。从表1可以明显看出B3培养基最适合金盏菊叶柄愈伤组织的形成。

2.不同消毒时间对愈伤组织的影响

不同的消毒时间对愈伤组织的污染也不同，从表2可以看出，用1‰的升汞溶液消毒时间5分钟污染率为2%，愈伤组织形成的也最多。金盏菊叶柄茎段为外植体为组培材料在消毒处理时间上，以5分钟消毒最佳，（详细数据见表2）。

表2　　消毒时间的不同对芽的影响

三、结论与讨论

综合各组设计不同配比的培养基实验结果表明，在生长期金盏菊叶柄茎段的组织培养中，B3MS+ 6-BA0.5+NAA0.1为最佳愈伤组织培养基。以叶柄段为外植体材料用1‰的升汞溶液消毒处理结果显示，消毒时间长为5分钟是最佳消毒时间。消毒时间长4分钟和消毒时间长6分钟的污染率都明显高于5分钟的。由于培养基配比设计有限，只能筛选出适合叶柄段愈伤组织形成的最佳培养基，愈伤组织养诱导生根培养基需进一步的实验研究。

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［2］冯润东，李春辉等．孔雀草组培繁殖技术研究［J］．安徽农业科学，2012（07）.

［3］张嘉宝，李建华等．金盏菊叶片组织培养再生植株［J］．新乡师范学院学报，1984.

［4］苏福才，钱国珍等．万寿菊茎段组织培养［J］．内蒙古农牧学院学报，1999.

［5］谢林，邓郡仙等．彩叶草的组织培养快繁技术研究［J］．安徽农业科学，2010（20）.