健脾安肠丸对D-IBS大鼠模型血浆VIP、P物质水平的影响

宋亚璐,张梦宇,杨莹,王欣,荀丽英,孙明江

(山东中医药大学，a.药学院，b.实验中心，c.药理教研室，山东 济南　250355)



◇药学研究◇

健脾安肠丸对D-IBS大鼠模型血浆VIP、P物质水平的影响

宋亚璐a,张梦宇a,杨莹b,王欣c,荀丽英c,孙明江c

(山东中医药大学，a.药学院，b.实验中心，c.药理教研室，山东 济南250355)

目的研究健脾安肠丸对腹泻型肠易激综合征模型大鼠血管活性肠肽VIP、P物质水平的影响。方法采用束缚-大黄灌胃致大鼠肝郁脾虚模型，观察健脾安肠丸对血浆VIP、P物质水平的影响。结果(1)与正常组相比，模型组VIP、SP水平显著升高(P<0.05或P<0.01)；(2)与模型组相比，大中小剂量组VIP、SP水平显著降低(P<0.05或P<0.01)。结论健脾安肠丸能够显著降低D-IBS大鼠模型血浆SP、VIP水平，显著改腹泻的症状。

健脾安肠丸；肠易激综合征；肝郁脾虚模型；脑肠轴；水通道蛋白

肠易激综合征(irritable bowel syndrome ,IBS)是一种临床上常见的功能性胃肠疾病，可分为腹泻型D-IBS、便秘型C-IBS、混合型M-IBS及未分化型U-IBS[1]，是一种多因素引起的胃肠功能性紊乱疾病。中医理论认为肠易激综合征的发病机制在于脾虚湿盛，肝失疏泄，而基于这一理论配伍的健脾安肠丸是由党参、白术、葛根、薏苡仁、白芍、木香、防风、乌梅、陈皮、芡实等组成的，具有疏肝理气，健脾利湿，能够显著改善D-IBS患者腹痛、腹泻等各种临床不适症状的作用。笔者为探究健脾安肠丸对腹泻型肠易激综合征的治疗作用，进行了以下实验。

1　材料与方法

1.1药物健脾安肠丸自制，用法用量：每日3次，每次10 g。由济南市中医院提供，健脾安肠丸加水溶解配制成0.268 kg·L-1备用。阳性药物匹维溴铵片，规格：50 mg×15片/盒，批号：635374，用法用量：每日3次，每次50 mg，Abbott Healthcare SAS(法国)，研钵研成粉末加水配制成浓度为0.1339%溶液备用。大黄：山东嘉泰中药饮片有限公司，批号：131002。(计算公式:X大鼠日灌胃量=6.25×0.25×成人日服药量/70，成人平均体质量按70 kg，大鼠平均体重0.25 kg计算)

1.2仪器Multiskan Mk3型酶标仪(赛默飞世尔(上海)仪器有限公司)；JA500N电子天平(上海精密科学仪器有限公司)；紫外可见光分光光度计(尤尼柯(上海)仪器有限公司)；低速离心机(北京医用离心机厂产品)。

1.3动物Wistar大鼠，SPF级，雌性，72只，体重200～300 g，购自山东鲁抗医药股份有限公司，实验动物生产许可证号：SCXK(鲁)20130001。

1.4试剂本实验所用两个试剂盒均采用酶联免疫分析，双抗体夹心法测定。所用试剂盒为VIP、P物质ELISA试剂盒，购自上海百蕊生物科技有限公司。

1.5方法

1.5.1分组

72只雌性大鼠按体质量分为正常对照组12只、模型组15只、阳性组15只、健脾安肠丸大剂量组10只(5.36 g·kg-1相当于临床等效量2倍)、中剂量组10只(2.68 g·kg-1,相当于临床等效量1倍)、小剂量组10只(1.34 g·kg-1，相当于临床等效量1/2倍)。

1.5.2造模

大鼠常规饲养3 d，参考唐洪梅等[2]的造模方法采取束缚+大黄灌胃造模。评价指标参考杜立东等[3]的文献，选择大鼠一般状况、体重、稀便、血浆SP、VIP含量等。大黄煎煮液的配置：根据大鼠的数量和造模的时间需要取800 g大黄加水1 000 mL浸泡3 h，煎煮8 min，滤去药渣，定容至1 000 mL。给予除正常组外各组大黄灌胃0.5 mL·100 g-1，每天下午两点使用束缚箱准时进行束缚，时间为1 h，连续10 d。正常对照组给予生理盐水灌胃0.5 mL·100 g-1。

1.5.3给药

造模成功后开始用药，正常对照组及模型组给以生理盐水灌胃0.5 mL·100 g-1；大剂量组给药0.268 kg·L-1×5 mL，中剂量组给药0.268 kg·L-1×2.5 mL，小剂量组给药0.134 kg·L-1×2.5 mL；阳性组给以浓度0.133 9%匹维溴铵溶液2.5 mL。每天早晨八点灌胃，连续灌服两周。

1.5.4VIP、P物质的测定

样本采集：末次给药1 h后，1%戊巴比妥钠麻醉，无动眼反射后固定，腹主静脉取血5 mL，置于用肝素润洗的EP管中，混匀后离心，取上清液；试剂盒检测：大鼠血管活性肠肽(VIP)或P物质(SP)酶联免疫分析步骤：标准品的稀释→加样→温育→配液→洗涤→加酶→温育→洗涤→显色→终止→测定。

1.5.5观察指标

大、中、小剂量组和模型组自给药当日起，每日统计大鼠稀便数、粪便总数，并计算稀便占总粪便数的百分率。

2　结果

2.1健脾安肠丸对肝郁脾虚模型大鼠一般状况的影响大鼠在建模后，逐渐出现脱毛、皮毛无光泽、嗜睡、大便稀溏的现象，由表1可知，造模结束后模型组稀便率达99.00%，大中小剂量组也均在90.00%以上，说明达到了预期造模效果。治疗末，健脾安肠丸各组大鼠稀便明显减少，稀便率正常组0.94%、模型组95.33%、阳性组59.17%。与造模后比较，治疗末大中小剂量组稀便率降低，且差异有统计学意义(P<0.01)，说明健脾安肠丸对减轻大鼠腹泻有显著疗效。由表2可见，造模结束后，即治疗初，与造模前相比，除正常组外各组大鼠体重平均值均显著降低(P<0.05)；与治疗初相比，治疗末大中小剂量组大鼠体重平均值均显著增加(P<0.05)。

表1　造模后及治疗末各组大鼠稀便率/%

注：与造模后比较，aP<0.01。

表2　造模前、治疗初、治疗末各组大鼠体重平均值±s)

注：与造模前比较，aP<0.05，与治疗初比较，bP<0.05。

2.2健脾安肠丸对肝郁脾虚模型大鼠血浆VIP、SP水平的影响与正常对照组相比，模型组VIP、SP水平显著升高，差异有统计学意义(P<0.05或0.01)，说明通过束缚+灌服大黄的方法导致了大鼠血浆VIP、SP水平的升高，可作为造模成功的证据；与模型组相比，大中小剂量组VIP、SP水平显著降低，且差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)，以上结果均表明使用健脾安肠丸后，两种物质的水平均得到了改善。见表3、表4。

表3　大鼠血浆VIP、SP水平比较

注：与正常组比较，aP<0.05；与模型组比较，bP<0.05，cP<0.01。

3　讨论

D-IBS的主要临床症状是腹泻、腹部疼痛或不适，目前其发病机制不完全清楚，其主要生理病理变化包括内脏感觉异常敏感和胃肠动力障碍[4]。我们体内存在的脑肠轴将中枢神经系统与肠神经系统、神经-内分泌免疫系统连接起来，形成双向交通通路，在调节胃肠运动功能、内脏敏感性、脑肠肽分泌、机体对应激的反应性、中枢认知功能等方面发挥着重要的作用[5]。而具体发挥调控作用的物质基础则是各种胃肠激素和神经递质，熊观瀛等[6]认为胃肠肽类激类可分为兴奋性和抑制性两类，兴奋性递质主要是乙酰胆碱和P物质；抑制性递质主要有一氧化氮、血管活性肠肽、降钙素基因相关肽等。

本实验健脾安肠丸组方中薏苡仁，味甘、淡，归脾胃经，可健脾渗湿止泻，为君药；葛根，味甘、辛，亦可归脾胃经，有升阳止泻之效，为臣药，可增强君药薏苡仁健脾渗湿止泻之功；党参，味甘、平，可健脾益气。党参中多糖含量高达10%～20 %，是党参药材健脾益胃的活性有效部位，动物功效试验表明，党参多糖具有促进消化功能，即增进动物食欲和进食量，提高胃蛋白酶活力及胃蛋白酶排出量，促进小肠蠕动[7]。木香，亦具有健脾行气之效，现代医学研究表明，木香提取物中的生物碱对组胺引起的豚鼠肠平滑肌和气管平滑肌具有显著解痉作用；白术，味苦、甘，归脾、胃经，补气健脾，可治疗脾虚泄泻之症；白芍，味苦、酸、甘，归肝、脾经，可养血平肝；防风，味辛、甘，归肝、脾经，具有盛湿止泻的作用；乌梅，味酸、涩，归肝、脾、肺、大肠经，涩肠止泻，可治疗泄泻；陈皮，味辛、苦，归脾、肺经，理气健脾，燥湿止泻；芡实，味甘、涩，归脾、肾经，健脾止泻，全方诸药合用，共奏健脾利湿止泻，疏肝理气之效，可治疗脾虚湿盛、肝失疏泄之泄泻。

近几年研究表明，P物质具有增加胃肠蠕动，强烈促进消化道平滑肌收缩，加强结肠的集团推进运动，刺激小肠、结肠黏膜分泌水和电解质的作用[8]，在炎性疼痛时还可增强炎性刺激传入的外周作用，加重痛觉感受，由此推断IBS腹痛的症状可能是与之密切相关的；血管活性肠肽VIP则属于肠神经系统中具有代表性的一种神经肽，是重要的肽类神经递质之一，作为神经肽递质的信号分子，参与机体多种功能的信息传递和生理调控，在肝脏、胆道、胰腺、胃肠道等均有分布，与消化系疾病有着密切的关系，其含量及受体敏感性一旦发生变化，会导致多系统疾病的发生，尤其引起消化系统疾病分泌功能的紊乱[9]。Fahrenkrug[10]认为其具有舒张血管、抗炎、免疫调节、促进激素分泌和舒张平滑肌等重要的生理功能。此外，实验表明VIP还能够影响结肠上皮AQPs的表达[11-12]，而结肠组织细胞膜上存在多种水通道蛋白AQPs，是参与转运肠腔内水液的主要蛋白。

综上所述，健脾安肠丸能够显著降低腹泻型肠易激综合征大鼠模型SP、VIP水平，减少大鼠稀便排泄，提示健脾安肠丸可能是干预了水通道蛋白的表达，从而促进了肠腔内水液的转运，进而改善了腹泻症状。但本实验也有不足之处，鉴于实验条件有限并未对腹痛作相关指标检测，有待于进一步研究和完善。

[1]Thompson WG，Longstreth GF，Assman D，et al.Funtional bowel disorders [J].Gastroenterology，2006，130(34)：1480-1483.

[2]唐洪梅，廖小红，房财富，等.肝郁脾虚型大鼠肠易激综合征模型的建立及评价[J].中国实验方剂学杂志，2012，18(6)：138-139.

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Effect of Jianpi Anchang pill on the level of VIP and substance P in D-IBS rats

SONG Yalua，ZHANG Mengyua，YANG Yingb，et al

(a.SchoolofPharmacy,b.ExperimentalCenter,ShandongUniversityofTraditionalChineseMedicine,Jinan250355,China)

ObjectiveTo study the effect of Jianpi Anchang pill to the level of VIP and substance P in D-IBS rats.MethodsUsing Rhei Radix et Rhizome and bound box to establish the model that stagnation of liver qi and spleen deficiency in rats,so to obsereve the effect of Jianpi Anchang pill to the level of VIP and substance P in D-IBS rats plasma.ResultsComparing with control group，model group was markedly rised (P<0.05orP<0.01).Comparing with model groups， big,middle and small dose groups were significantly decreased (P<0.05orP<0.01).ConclusionVIP and SP level in D-IBS rats plasma can be decreased by Jianpi Anchang pill,and this prescription can markedly improve the symptoms of diarrhea.

Jianpi Anchang pill;irritable bowel syndrome;stagnation of liver qi and spleen deficiency;Brain-Gut Axis;Aquaporin

宋亚璐，男，硕士研究生

孙明江，男，教授，硕士生导师，研究方向：中药(复方)活性成分作用机制、药理毒理研究及新药研发，E-mail：13869180658@163.com

10.3969/j.issn.1009-6469.2016.09.003

2016-04-07，

2016-07-11)