山东地区肉鸡源大肠杆菌对安普霉素的敏感性试验

葛爱民　崔晓娜　李汝春

（山东畜牧兽医职业学院　山东 潍坊　261061）

山东地区肉鸡源大肠杆菌对安普霉素的敏感性试验

葛爱民崔晓娜李汝春

（山东畜牧兽医职业学院山东 潍坊261061）

本研究对山东地区分离的77株肉鸡源致病性大肠杆菌应用安普霉素进行药敏试验，以指导养殖场正确合理地使用安普霉素来防治肉鸡疾病。试验结果表明，山东省六个地区肉鸡源大肠杆菌分离株对安普霉素的敏感性有较大差异，总体耐药率高。因此，可增加大肠杆菌敏感药物的轮换使用以及配伍应用，做好致病性大肠杆菌的细菌耐药性的监测，合理制定用药方案。

安普霉素肉鸡大肠杆菌药敏试验

肉鸡大肠杆菌病是由某些致病性大肠杆菌引起的不同类型疾病的总称，主要引起肉鸡的心包炎、肝周炎、气囊炎、腹膜炎、输卵管炎、败血症等［1］。本病传染性强，发病率高，给肉鸡生产带来较大经济损失，因此肉鸡大肠杆菌病的有效防治已成为集约化肉鸡养殖场的难题之一。由于大肠杆菌为条件性致病菌，多继发于病毒感染、支原体感染、应激等，且易对抗菌药物产生耐药性，所以很多养殖场在临床用药选择上面临较多困难，进行致病性大肠杆菌分离株的药敏试验不可避免。

硫酸安普霉素为动物专用氨基糖苷类抗生素，对大肠杆菌病有较好的治疗效果，目前很多肉鸡养殖场一个饲养周期甚至用到2～3遍，很容易出现耐药现象。本试验从山东不同地区肉鸡养殖场分离致病性大肠杆菌，做安普霉素的敏感性试验，为养殖场提供用药参考。

1　材料与方法

1.1材料

1.1.1病料采自山东多地肉鸡养殖场疑似大肠杆菌病的肝、脾等脏器。

1.1.2试剂普通营养琼脂、麦康凯琼脂购自上海医药试剂公司，按常规方法自制平板；葡萄糖、蔗糖、乳糖、甘露醇等微量生化发酵管，购自杭州天和微生物试剂有限公司。

1.1.3安普霉素药敏纸片安普霉素药敏纸片及大肠杆菌（ATCC25922），均购自杭州天和微生物试剂有限公司。

1.2方法

1.2.1细菌分离无菌操作取病料划线接种于麦康凯培养基上，37℃培养l8～24h。挑取单个菌落，于普通琼脂平板上进行纯培养，37℃培养18～24h。挑取单个菌落，进行革兰氏染色、镜检。

1.2.2生化试验挑取待检菌株单菌落接种葡萄糖、蔗糖、乳糖、甘露醇等微量生化发酵管进行生化项目测定，反应条件按说明书进行。

1.2.3药敏试验在普通营养琼脂平板表面均匀涂抹培养的待检大肠杆菌，再将安普霉素药敏纸片贴于培养基表面。将贴好纸片的培养皿放于37℃恒温箱培养16～24h后，用游标卡尺测量各药敏纸片的抑菌圈直径，并记录结果。

2　结果

2.1细菌分离

在麦康凯培养基上形成中等大小的红色菌落，挑取单个菌落，划线接种于普通琼脂平板上纯培养后，菌落呈光滑、湿润、半透明、灰白色、圆形微凸起。革兰氏染色后，镜下均可见大量散在的红色、中等大小、两端钝圆的无芽孢直杆菌，初步判定为大肠杆菌。

2.2生化试验

分离菌株都发酵葡萄糖、麦芽糖、甘露醇、阿拉伯糖，大多数菌株可迅速发酵木糖、乳糖。所有菌株不产生H2S，不分解尿素，不利用枸橼酸盐，不液化明胶。VP试验呈阴性，M-R试验和吲哚试验均呈阳性。多地分离菌株均符合大肠杆菌的生化特性，共77株，判定为大肠杆菌。

2.3药敏试验

根据2000年5月实施的《纸片法抗菌药物敏感试验标准》判定，判定敏感（S）、中介（I）和耐药（R）。77株山东不同地区肉鸡源大肠杆菌对安普霉素的药敏试验结果见表1。

表1　77株肉鸡源大肠杆菌对安普霉素的药敏试验结果

结果显示，山东地区总共分离的77株大肠杆菌对安普霉素的敏感菌株不多，其中，潍坊地区21株中只有14.3%的敏感，临沂地区15株中没有敏感菌株，滨州和日照地区也较少，分别只占分离菌株数的16.7%和8.3%，同时以上地区耐药率都达到50%以上，临沂地区更是达到了86.7%；青岛和威海地区分离菌株中敏感菌株分别到达了55.6%和75%。以上说明，不同地区分离到的大肠杆菌菌株对安普霉素的敏感性还是有较大差别。

3　讨论

（1）安普霉素为动物专用的抗生素，对大肠杆菌、沙门氏菌等引起的感染有较好的疗效，但随着其在临床上的应用，已经出现了耐安普霉素菌株［2］。（2）大肠杆菌的耐药性是影响肉鸡大肠杆菌病治疗效果的重要因素，每年因耐药问题造成的经济损失非常大。由于该菌为条件致病菌，与各种抗菌药物接触的机会多，再加上肉鸡养殖场滥用抗菌药物问题突出，耐药性产生相对容易，且易产生多重耐药。因此，鸡源大肠杆菌耐药性问题一直是很多学者研究的重点。2012年王彩先等［3］试验发现鸡源大肠杆菌对安普霉素的耐药率达70.9%。（3）本次药敏试验结果表明，山东省6个地区肉鸡源致病性大肠杆菌对安普霉素都产生了一定的耐药性，其中临沂地区耐药率达到了86.7%，潍坊地区耐药率达到了66.7%，滨州地区耐药率达到了66.6%，基本反映目前生产一线安普霉素使用现状，有些养殖场一批肉鸡可以用到两三遍，同时存在超量用药情况，耐药菌株出现非常正常［4］。（4）2009年邹玲［5］试验发现胶东地区130株肉鸡源大肠杆菌对安普霉素的敏感率达到了64.6%，耐药率为15.4%，本次试验青岛和威海地区分离菌株中敏感菌株分别到达了55.6%和75%，耐药率分别为22.2%和25%，说明胶东地区相比其他地区几年来用安普霉素防治肉鸡大肠杆菌病相对效果好一些。

本次试验只是做了山东省六个地区分离的77株肉鸡源大肠杆菌对安普霉素的敏感性试验，并没有做大肠杆菌敏感药物的筛选及安普霉素与其他药物配伍使用的效果检验，建议增加防治大肠杆菌药物的轮换使用以及配合其他敏感药物使用，尽可能做好肉鸡养殖场致病性大肠杆菌的细菌耐药性的监测［6］，合理制定用药方案。

［1］ 于萍， 于静. 肉鸡大肠杆菌病的诊治［J］. 畜禽业， 2012， 12∶ 71-72.

［2］ 高允乐， 张秀英， 底佳芳等. 鸡源耐安普霉素大肠杆菌耐药表型研究［J］. 中国兽药杂志， 2005， 39（9）∶ 9-11.

［3］ 王彩先， 詹丽娥， 陆冰洋等. 鸡大肠杆菌的耐药性试验［J］. 中国动物保健， 2012， 9∶ 24-26.

［4］ 侯志华. 肉鸡致病性大肠杆菌的分离鉴定及药敏试验［J］. 畜禽业，2013， 12∶ 20-21.

［5］ 邹玲. 胶东地区肉鸡大肠杆菌药敏试验［J］. 畜禽业， 2009， 06∶ 74.

［6］ 徐士新. 我国对抗菌药物耐药性应采取的措施［J］. 中国兽药杂志，2001， 35（6）∶ 39-41.

S859.79+6

A

1007-1733（2016）10-0005-02

2016-07-06）

山东省潍坊市科学技术发展计划（2014GX074）。