乙型肝炎表面抗体与年龄的相关研究及影响因素

于淼琛，王 贞，朱 鸿，刘 辉

(1.大连医科大学附属第一医院检验科，辽宁大连 116011；2.大连医科大学，辽宁大连 116011)



·论 著·

乙型肝炎表面抗体与年龄的相关研究及影响因素

于淼琛1，王 贞1，朱 鸿1，刘 辉2△

(1.大连医科大学附属第一医院检验科，辽宁大连 116011；2.大连医科大学，辽宁大连 116011)

目的 研究乙型肝炎(后简称乙肝)表面抗体(HBsAb)随年龄增长而降低的原因。方法 测定HBsAb，按照一定比例稀释标本直至HBsAb<10 U/L；测定巨细胞病毒IgG(CMV-IgG)，按照一定比例稀释标本直至抗CMV-IgG<14 U/mL。比较分析抗体活性的变化。结果 “2和(或)3抗体”阳性组中，青年组HBsAb活性水平高于中年组，差异有统计学意义(P<0.05)；中年组CMV-IgG活性高于青年组，差异有统计学意义(P<0.05)。青年组中“2和(或)3抗体”阳性组HBsAb活性水平高于单抗体阳性组，差异有统计学意义(P<0.05)；中年组中“2和(或)3抗体”阳性组HBsAb活性水平高于单抗体阳性组，差异有统计学意义(P<0.05)。结论 HBsAb随年龄增长而降低，可能与乙肝病毒感染进程中抗体反应模式不同有关。

乙型肝炎表面抗体； 抗体活性； 年龄组； 影响因素

乙型肝炎(后简称乙肝)是由乙肝病毒(HBV)感染引起，以肝脏损害为主的传染病。全球约20亿人曾感染HBV，其中3.5亿人为慢性HBV感染，每年约有100万人死于HBV感染所致的肝衰竭、肝硬化和原发性肝细胞癌(HCC)[1]。HBV感染是全球严重的公共卫生问题之一。

接种乙肝疫苗是预防乙肝的最有效方法,其对预防和治疗乙肝有巨大作用[2]。但是，疫苗并不对所有人群有效，且随着接种时间的延长,免疫人群的保护性抗体水平逐年下降[3]。研究发现，随着年龄增长，人体内的免疫应答可随着免疫原排出、病原体反复刺激、神经内分泌因素作用及免疫细胞凋亡而逐渐被削弱[4-5]，且无论初次免疫后乙肝表面抗原(HBsAg)水平如何,保护性抗体的下降速率差异无统计学意义。本研究将结合临床试验，探讨HBV阳性率、抗体水平与年龄的关系，影响HBsAg水平的相关原因，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 统计2010年1月1日至2013年9月23日大连医科大学附属第一医院所有非乙肝患者中乙肝表面抗体(HBsAb)阳性(HBsAb>10 U/L)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)正常(男15～40 U/L，女15～35 U/L)，丙氨酸氨基转移酶(ALT)正常(男9～50 U/L，女7～40 U/L)的标本信息75 065例，按年龄统计HBsAb阳性率，男女比例为1∶1。

选取2012年5月至2014年3月大连医科大学附属第一医院非肝炎患者中，ALT、AST均正常、HBsAb阳性、HBsAg阴性、乙肝E抗原(HBeAg)阴性。根据年龄及HBeAb、乙肝核心抗体(HBcAb)阴性、阳性分为4组。单抗体阳性青年组：HBeAb、HBcAb阴性，年龄为24～26岁，男51例，女68例。单抗体阳性中年组：HBeAb、HBcAb阴性，年龄为45～50岁，男50例，女50例。“2和(或)3抗体”阳性青年组：HBeAb和(或)HBcAb阳性，年龄为24～26岁，男100例，女104例。“2和(或)3抗体”阳性中年组：HBeAb和(或)HBcAb阳性，患者年龄为45～50岁，男101例，女100例。

选取大连医科大学附属第一医院所有检测HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb患者1 600例，24～26岁400例，男200例，女200例；45～50岁400例，男200例，女200例。检出12种表现模式[6]，按HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb结果分组：组1为阴性、阳性、阴性、阴性、阴性，组2为阴性、阳性、阴性、阳性、阳性，组3为阳性、阴性、阳性、阴性、阳性,组4为阳性、阴性、阴性、阳性、阳性，组5为阴性、阴性、阴性、阴性、阴性，组6为阴性、阳性、阴性、阴性、阳性，组7为阴性、阳性、阴性、阳性、阴性，组8为阴性、阴性、阴性、阴性、阳性，组9为阴性、阴性、阴性、阳性、阴性，组10为阴性、阴性、阴性、阳性、阳性，组11为HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb结果任意一(或几)项阳性，组12为(组11～组1)。

每例研究对象需要空腹抽静脉血3 mL，标本需静置2 h左右，让血清充分析出，离心后分离上层血清2例，1例检测HBsAb，1例检测巨细胞病毒IgG(CMV-IgG),(-20)℃冰箱密封保存，备用。试验前室温充分复融，通过离心(15 000 r/min离心10 min)沉淀加以澄清，保证不含有任何颗粒或残存纤维蛋白。

1.2 仪器与试剂 HBsAb采用瑞士罗氏公司生产的Cobas e 601全自动电化学发光免疫分析仪检测；HBsAg采用美国雅培公司生产的ARCHITECT i2000SR化学发光免疫分析仪检测；CMV-IgG检测仪器为意大利索灵公司生产的LIAISON化学发光免疫分析系统；ALT、AST由日本日立7600-110/7600-020全自动生化分析仪检测。所有试剂均为配套专用商品试剂盒。

1.3 方法 以前研究中，免疫指标的检测如HBsAb和CMV-IgG结果仅报告某一水平值，并不能完全准确反映其真实水平，精密性难以保证，阻碍实验室规范标准化。本研究尝试将阳性高值结果进行倍比稀释，发现其测定结果与稀释倍数lg值之间并非直线关系，而是呈曲线性。笔者认为计算曲线下面积来表示检测指标结果更加准确，能代表其实际水平。由于曲线的面积计算复杂，本研究将使用梯形面积计算法，以简化结果[7-9]。如乙肝表面抗体原始测得水平值均标记为H1，稀释倍数为1∶2、1∶4、1∶8、1∶16、1∶32、1∶64、1∶128、1∶256、1∶512、1∶1 024、1∶2 048，测得水平值分别标记为H2、H3、H4、H5、 H6、H7、H8、H9、H10、H11、H12，HBsAb活性公式为S=(H1+H2)×(lg2-lg1)+(H2+H3)×(lg4-lg2)+(H3+H4)×(lg8-lg4)+(H4+H5)×(lg16-lg8)+(H5+H6)×(lg32-lg16)+(H6+H7)×(lg64-lg32)+(H7+H8)×(lg128-lg64)+(H8+H9)×(lg256-lg128)+(H9+H10)×(lg512-lg256)+(H10+H11)×(lg1 024-lg512)+(H11+H12)×(lg2 048-lg1 024)。CMV-IgG的抗体原始测得的水平值均标记为C1，稀释倍数为1∶2、1∶4、1∶8、1∶16、1∶32、1∶64、1∶128，测得水平值分别标记为C2,C3,C4,C5,C6,C7,C8，则CMV-IgG活性公式为S=(C1+C2)×(lg2-lg1)+(C2+C3)×(lg4-lg2)+(C3+C4)×(lg8-lg4)+(C4+C5)×(lg16-lg8)+(C5+C6)×(lg32-lg16)+(C6+C7)×(lg64-lg32)+(C7+C8)×(lg128-lg64)。

1.4 统计学处理 所有数据均采用SPSS19.0统计软件进行统计分析，组间比较采用F检验、t检验，以P<0.05表示差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 HBsAb水平随年龄变化曲线 年龄与HBsAb阳性率变化的分布曲线表明，HBsAb阳性率与年龄变化曲线存在2个波峰、2个波谷。2个波峰位于出生时和24～26岁左右，2个波谷位于10～12岁和45～50岁。本次研究选取24～26岁波峰区，45～50岁波谷区2组。见图1。

2.2 HBsAb水平在不同组比较

2.2.1 2个年龄组HBsAb水平比较 单抗体阳性青年组和中年组HBsAb水平比较，青年组HBsAb水平高于老年组，差异有统计学意义(P<0.05)；“2和(或)3抗体”阳性青年组和中年组HBsAb水平比较，青年组HBsAb水平高于老年组，差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。

2.2.2 相同年龄组单抗体阳性组“2和(或)3抗体”阳性组HBsAb水平比较 青年组单抗体阳性组和“2和(或)3抗体”阳性组HBsAb水平比较，“2和(或)3抗体”阳性组HBsAb水平高于单抗体阳性组，差异有统计学意义(P<0.05)；中年组单抗体阳性组和“2和(或)3抗体”阳性组HBsAb水平比较，“2和(或)3抗体”阳性组HBsAb水平高于单抗体阳性组，差异有统计学意义(P<0.05)。见表2。

图1 HBsAb阳性率与年龄变化曲线

2.3 HBsAb阳性中CMV-IgG精密测定结果比较 “2和(或)3抗体”阳性青年组和中年组CMV-IgG活性水平比较，青年组CMV-IgG活性水平低于中年组，差异有统计学意义(P<0.05)。见表3。

表1 不同年龄组HBsAb结果

表2 相同年龄组HBsAb检测结果

表3 HBsAb阳性的2个年龄组CMV-IgG检测结果

2.4 模式统计分析乙肝感染 统计1 600例患者血样，24～26岁400例，男200例，女200例；45～50岁400例，男200例，女200例。检出12种表现模式[10-12]。见图2。

图2 不同年龄组模式分析结果比较

3 讨 论

临床资料统计中发现，HBsAb阳性率随着年龄增长有减低趋势。出生时，HBsAb阳性率最高，随着年龄的增长，HBsAb阳性率降低。10岁以后缓慢增高，24～26岁达到1次高峰。之后再次降低，45～50岁达到1个低谷。

从免疫学的角度看，随着年龄的增长，中年人的免疫水平逐渐减低[13]，通过试验发现，单抗体阳性组中，青年组和中年组HBsAb活性水平比较，青年组HBsAb活性水平高于老年组，差异无统计学意义(P>0.05)；“2和(或)3抗体”阳性组中，青年组和中年组HBsAb活性水平比较，青年组HBsAb活性水平高于老年组，差异有统计学意义(P<0.05)。“2和(或)3抗体”阳性组中，青年组和中年组CMV-IgG活性比较，中年组CMV-IgG活性高于青年组，差异有统计学意义(P<0.05)。由此表明，免疫水平并非单纯随年龄增长而降低。

在大多数国家，婴儿出生后即接种乙肝疫苗，使其HBsAb保持较高水平[14]。研究发现，绝大多数疫苗接种后，能诱发使疫苗接种者保持至少15年免疫效果。随着年龄的增长，乙肝疫苗的保护作用逐渐减低，由接种疫苗产生的HBsAb活性逐渐降低。

通过模式分析发现，组1的HBsAb为疫苗来源，组12的HBsAb为非疫苗来源。组12的青年组为33.0%，中年组为52.5%，说明乙肝疫苗对机体有一定保护作用。但是青年组存在33.0%的人群与乙肝感染有关，中年组有52.5%的人群感染乙肝，说明乙肝疫苗的保护有限。组2为HBsAb、HBeAb、HBcAb阳性，组6为HBsAb、HBcAb阳性，组7为HBsAb、HBeAb阳性，组8为HBcAb阳性，这4组说明感染乙肝后的抗体水平，中年组阳性率高于青年组，且两者差异有统计学意义，说明中年人发生乙肝感染与年轻人乙肝感染预后模式有差异。青年组单抗体阳性组和“2和(或)3抗体”阳性组HBsAb活水平性比较，“2和(或)3抗体”阳性组HBsAb活性水平高于单抗体阳性组，差异有统计学意义(P<0.05)；中年组单抗体阳性组和“2和(或)3抗体”阳性组HBsAb活性水平比较，“2和(或)3抗体”阳性组HBsAb活性水平高于单抗体阳性组，差异有统计学意义(P<0.05)。根据2个年龄组HBsAb活性和CMV-IgG活性的试验结果及模式分析结果，提示中年人与年轻人天然抗体模式不同。因此，中年人对HbsAg的反应不同于年轻人，发现乙肝感染后，针对乙肝的抗体也有区别。

HBsAb随着年龄增长，呈一定下降趋势。可能与HBV感染进程中抗体反应模式不同有关。本次试验采用精密测定方法，能比以往传统方法更精确地反映患者体内抗体活性水平，更适用于不同患者体内乙肝抗体定量相等时抗体的强弱情况分析，其在疾病诊断中的价值正在逐渐被认可。总之，随着年龄的增长，疫苗保护作用在逐渐下降，而中年人与青年人发生HBV感染时的反应模式不同，其产生抗体也不尽相同。

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The research on relationship between level of hepatitis B surface antibody and age

YUMiaochen1,WANGZhen1,ZHUHong1,LIUHui2△

(1.DepartmentofClinicalLaboratory,theFirstAffiliatedHospitalofDalianMedicalUniversity,Dalian,Liaoning116011,China;2.DepartmentofClinicalImmunology,DalianMedicalUniversity,Dalian,Liaoning116011,China)

Objective To study the relationship between Hepatitis B surface antibody(HBsAb) and the age.Methods The level of HBsAb was detected until the level was diluted lower than 10 IU/L according to the certain ratio and.And the level of cytomegalovirus antibody(CMV-IgG) were detected until the level was diluted lower than 14 U/mL according to the certain ratio.The antibody activity were analyzed statistically.Results In the 2 and/or 3 positive-antibodies group,the antibody activity level of youth group was significantly higher than that of middle-aged group(P<0.05).The CMV-IgG activity level of middle-aged group was significantly higher than that of youth group(P<0.05).In the youth group,the antibody activity of 2 and/or 3 positive-antibodies group was significantly higher than that of single antibody positive group(P<0.05).In the middle-aged group,the antibody activity of 2 and/or 3 positive-antibodies group was significantly higher than that of single positive-antibody group(P<0.05).Conclusion The level of HBsAb has decreased with the growth of the age.The possible reason may be that antibody response pattern is different in the process of hepatitis B virus infection.

hepatitis B surface antibody; antibody activity; age group; influence factor

于淼琛，女，主管技师，主要从事临床免疫方面的研究。

△通讯作者，E-mail：liuhui60@sina.com。

10.3969/j.issn.1673-4130.2016.21.020

A

1673-4130(2016)21-3004-03

2016-05-10

2016-06-30)