饲粮双低菜粕水平对黄羽肉鸡生长性能、血液指标及肉品质的影响

(畜禽育种国家重点实验室，农业部动物营养与饲料(华南)重点开放实验室，广东省动物育种与营养公共实验室，广东省畜禽育种与营养研究重点实验室，广东省农业科学院动物科学研究所1，广州 510640) (广东省农业科学院2，广州 510640)

本试验旨在研究饲粮双低菜粕水平对1～63日龄黄羽肉鸡生产性能、血液生化及肉品质的影响。试验选用1日龄快长型黄羽肉公鸡1 200只，随机分为5组，每组6个重复，每个重复40只鸡。处理I-V小鸡阶段双低菜粕添加水平为0%、2.5%、5%、7.5%、10%；中鸡阶段为0%、3%、6%、9%、12%；大鸡阶段为0%、7%、10.5%、14%、17.5%，试验期为63 d。结果表明：与对照组相比，双低菜粕添加量为10%时可显著降低1～21日龄试鸡日增重，并提高饲料增重比(P<0.05)，各阶段双低菜粕添加量为5%、6%和10.5%时可显著降低63日龄试鸡体重(P<0.05)，当添加量达到10%、12%和17.5%时可显著提高1～63日龄试鸡饲料增重比(P<0.05)；各阶段饲粮双低菜粕添加量达到10%、12%和17.5%时显著降低了63日龄试鸡血浆游离T3和游离T4含量(P<0.05)，但各组间63日龄试鸡血浆谷草转氨酶、肌酸激酶、乳酸脱氢酶活性和肝脏谷胱甘肽硫转移酶活性均未见明显变化(P>0.05)，肝脏切片分析未见明显病变；各阶段添加10%、12%和17.5%的双低菜粕可显著降低63日龄试鸡屠宰后45 min的胸肉L*值，并提高a*值(P<0.05)，但对63日龄试鸡胸肉的感官风味及屠宰后96 h的pH、L*、a*、b*则无显著影响(P>0.05)。试验结果提示，在快长型黄羽肉鸡饲粮小鸡阶段、中鸡阶段和大鸡阶段分别添加2.5%、3%和7%的双低菜粕(硫代葡萄糖甙含量为7.01 μmol/g)未影响黄羽肉鸡的生长、甲状腺激素水平、机体抗氧化功能及肉品质。

双低油菜具有低芥酸、低硫代葡萄糖苷(Gls)的优点。根据联合国粮农组织(FAO)标准，双低油菜要求榨出油中芥酸质量分数小于5%，制油后的饼粕中硫甙含量小于40 μmol/g，农业部标准为小于45 μmol/g[1]。而自20世纪70年代末我国开始油菜 “双低”化育种以来，截止2010年我国油菜的双低率达到了90%以上，基本实现油菜生产由高产到优质高产，抗营养因子得到显著降低，RSM由原来的肥料变革成高价值的高蛋白饲料，利用价值显著提升[2]。此外，每亩加拿大菜籽产油是大豆的3倍多，美国更多地方也开始种植加拿大菜籽用于制作生物柴油，产生大量双低菜粕。因此，在目前蛋白质饲料资源紧缺及豆粕价格不断上涨的大环境下，研究菜粕等非常规饲料原料适宜添加量对优质鸡产业发展具有重要意义。Ciska等[3]报道，菜粕因含有Gls、芥子碱和单宁等抗营养因子，用量过多会造成动物生长抑制、心脏脂肪蓄积及甲状腺肿大。但随着双低菜粕的不断育种改进，有报道指出在肉仔鸡或产蛋鸡中使用20%的加拿大双低菜粕无任何负面影响[4]，并且在高海拔地区添加0.4%的精氨酸可以明显缓解由46%的加拿大双低菜粕导致的肉仔鸡高血压、腹水症及生长抑制[5]。Mikulski等[6]研究表明，添加18%的菜粕(Gls为4.43 μmol/g)对21周龄的火鸡出栏重无影响，但添加12%以上的菜粕会改变胸肌脂肪酸组成，并可能通过改变甲状腺激素的分泌而影响肉品质。目前黄羽肉鸡在中国肉鸡市场占有量逐年攀升，但黄羽肉鸡饲料大多仍以玉米-豆粕型饲料为主，饲料成本较高，而菜粕使用不合理会影响畜禽生长及产品品质、毒素残留，危害食品安全。此外研究菜粕对其抗氧化、组织病理及肉质风味方面研究仍很少报道。本试验通过研究全阶段添加不同比例的双低菜粕对1～63日龄黄羽肉鸡生长性能、抗氧化指标、组织病理及肉品质风味的影响，以确定1～63日龄黄羽肉鸡双低菜粕适宜添加量，旨在为菜粕在黄羽肉鸡饲料中的合理应用提供参考。

1 材料与方法

1.1 试验设计及饲粮

选用1日龄快长型岭南黄羽肉公鸡1 200只，随机分为5个处理，每处理6重复，每重复40只鸡。试验期为63 d。试验采用单因子随机分组试验设计，处理I～处理V小鸡阶段双低菜粕添加水平为0%、2.5%、5%、7.5%、10%；中鸡阶段为0%、3%、6%、9%、12%；大鸡阶段为0、7%、10.5%、14%、17.5%；试验用的双低菜粕为国产加拿大双低菜粕，购自广州市希望饲料科技有限公司，其中Gls、噁唑烷硫酮(OZT)、异硫氰酸酯(ITC)的实测值分别为7.01 μmol/g，0.21 mg/g和0.29 mg/g。氨基酸水平以可消化氨基酸为标准，各营养素水平保持一致。试验饲粮参照我国鸡饲养标准(2004)和广东省农业科学院动物科学研究所黄羽肉鸡营养需要试验结果配制，见表1。

1.2 试验动物与管理

试验在广东省农业科学院动物科学研究所动物营养室试验场进行，试验前对鸡舍进行全面冲洗、消毒。试鸡地面平养，自由采食与饮水，其他按常规操作规程进行。试验过程中，一旦出现死鸡，立即称死鸡重和剩料量，以消除死鸡对最后试验结果的影响，记录死鸡数量，同时立即查明原因，采取适当措施。

1.3 样品的采集与制备

试鸡到63日龄时，每重复选接近平均体重试鸡2只，称活重后，每只翅静脉采血10 mL进行抗凝处理，3 000 r/min离心15 min，制备血浆，分装于Ep管中，-20 ℃冻存，待测血液生化指标。采血后试鸡颈部放血致死，取肝脏样1份，迅速置于液氮冻存，待测肝脏谷胱甘肽硫转移酶(GSTs)活性。另取1份，切成2～3 mm厚放入10%甲醛溶液中浸泡固定，用于组织病理切片分析。

注：1)1～21日龄通过预混料向每千克饲粮中提供: VA 15 000 IU、VD33 300 IU、VE 20 IU、VK36 mg、VB11.8 mg、VB29 mg、VB63.5 mg、VB120.01 mg、氯化胆碱500 mg、烟酸60 mg、泛酸16 mg、叶酸0.55 mg、生物素0.15 mg、Fe 80 mg、Cu 8 mg、Mn 80 mg、Zn 60 mg、I 0.35 mg、Se 0.3 mg；22～42日龄通过预混料向每kg饲粮中提供: VA 15 000 IU、VD33 300 IU、VE 20 IU、VK36.0 mg、VB13.0 mg、VB29.0 mg、VB66.0 mg、VB120.03 mg、氯化胆碱1 000 mg、烟酸60 mg、泛酸18 mg、叶酸0.75 mg、生物素0.10 mg、Fe 80 mg、Cu 12 mg、Mn 100 mg、Zn 75 mg、I 0.35 mg、Se 0.15 mg；43～63日龄通过预混料向每kg饲粮中提供: VA 10 000 IU、VD31 000 IU、VE 20 IU、VK34 mg、VB11.8 mg、VB28 mg、VB63.5 mg、VB120.01 mg、氯化胆碱500 mg、烟酸44 mg、泛酸10 mg、叶酸0.55 mg、生物素0.15 mg、Fe 80 mg、Cu 8 mg、Mn 80 mg、Zn 60 mg、I 0.35 mg、Se 0.15 mg。

1.4 检测指标与方法

试鸡血浆中MDA含量采用硫代巴比妥酸(TBA)比色法，血浆还原型谷胱甘肽(GSH)含量采用二硫代二硝基甲酸比色法，肌酸激酶(CK)活性采用钼酸铵比色法，乳酸脱氢酶(LDH)活性采用二硝基苯肼比色法，血浆谷草转氨酶(GOT)活性采用赖氏法；肝脏GSTs活性采用比色法，在冰浴条件下匀浆，4 000 r/min离心10 min，取上清液，考马斯亮蓝法测定组织中总蛋白含量。指标均在紫外可见光分光光度仪(北京瑞利分析仪器公司，UV-1601)上用南京建成生物工程研究所提供的相应试剂盒测定；血浆游离三碘甲腺原氨酸(fT3)和游离四碘甲腺原氨酸(fT4)采用放射免疫测定法采用GC-2016γ放射免疫技术仪测定，试剂盒购自北京北方生物技术研究所，测定方法均按其说明书进行。

每个重复鸡随机挑选接近重复栏平均重的试鸡2只进行称重屠宰，取肝脏、肾脏、甲状腺、脾脏、心脏和肌胃，准确称重，并计算器官指数。将固定好的肝脏组织样品，石蜡包埋，常规采用苏木精-伊红染色法，制作好的切片于反置显微镜下观察组织的病理变化，并拍照。

胸肌pH值、滴水损失、剪切力及肉色(L*、a*、b*)分别采用pH计(HI-8424型，HANNA，意大利)、压力仪(YYW-2型，南京土壤仪器厂，南京)、嫩度仪(INSTRON-4411型，INSTRON，美国)、色差仪(CR-410型，美能达公司，日本)参照Jiang等[7]提出的鸡肉品质测定步骤进行测定。感官风味参照席鹏彬等[8]提出的鸡肉品质测定步骤进行测定，评分分为八级。

1.5 统计分析

试验数据采用SAS V8.1软件中的one-way ANOVA进行方差分析，并采用Duncan氏法进行多重比较。结果以平均值标准误表示，统计显著性水平为P<0.05。

2 试验结果

2.1 饲粮双低菜粕水平对1～63日龄黄羽肉鸡生长性能的影响

由表2可见，与对照组相比，在1～21日龄阶段，双低菜粕添加量为10%时可显著降低试鸡日增重，并提高饲料增重比(P<0.05)；各阶段双低菜粕添加量为5%、6%和10.5%时可显著降低63日龄试鸡体重和1～63日龄的日增重，体重降低3.69%(P<0.05)，当添加量达到10%、12%和17.5%时可显著提高1～63日龄试鸡饲料增重比，体重下降达4.69%(P<0.05)。

注：同行数据肩标小写字母不同表示差异显著(P<0.05)，—无方差分析。试验1组为对照组，试验2组1～21、22～42和43～63日龄双低菜粕水平分别为2.5%、 3%和7%；试验3组1～21、22～42和43～63日龄双低菜粕水平分别为5%、 6%和10.5%；试验4组1～21、22～42和43～63日龄双低菜粕水平分别为7.5%、9%和14%；试验5组1～21、22～42和43～63日龄双低菜粕水平分别为10%、12%和17.5%，下同。

2.2 饲粮双低菜粕水平对63日龄黄羽肉鸡血液和肝脏生化指标的影响

由表3可知，与对照组相比，各阶段饲粮双低菜粕添加量达到10%、12%和17.5%时显著降低了63日龄血浆fT3和fT4含量(P<0.05)；添加双低菜粕对63日龄试鸡血浆GOT、CK、LDH活性和肝脏GSTs活性均无显著影响(P>0.05)。

表3 饲粮双低菜粕水平对63日龄黄羽肉鸡血液及肝脏生化指标的影响

2.3 饲粮双低菜粕水平对63日龄黄羽肉鸡器官指数的影响

由表4可见，添加双低菜粕对63日龄黄羽肉鸡肾脏指数、肝脏指数、甲状腺指数、心脏指数和肌胃腺胃指数均无显著影响(P>0.05)。

2.4 饲粮双低菜粕水平及对63日龄黄羽肉鸡肝脏的影响

图1显示对照组与双低菜粕组试鸡肝小叶结构完整，无明显坏死、淤血、未见肝细胞脂肪变性和纤维组织增生。但在10%、12%和17.5%的双低菜粕组试鸡肝窦间隙变宽，中央静脉周围可见少量灶状淋巴细胞浸润。

2.5 饲粮双低菜粕水平对63日龄黄羽肉鸡胸肌肉品质的影响

由表5可见，与对照组相比，各阶段添加10%、12%和17.5%的双低菜粕可显著提高63日龄试鸡45 min的胸肉并a*值(P<0.05)；添加双低菜粕对63日龄试鸡胸肉的嫩度、45 min的pH、L*值、b*值和96 h的pH、L*、a*、b*值均无显著影响(P>0.05)。

2.6 饲粮双低菜粕水平对63日龄黄羽肉鸡感官品尝评分的影响

由表6可知，添加双低菜粕对63日龄试鸡胸肉的感官品尝得分无显著影响(P>0.05)。

表6 饲粮双低菜粕水平对63日龄黄羽肉鸡胸感官品尝评分的影响

3 讨论

3.1 饲粮双低菜粕水平对黄羽肉鸡生长性能的影响

菜粕对畜禽的不利影响与所含的Gls在饲粮中的浓度有关。Gls本身无毒无生物活性，但产生的次生毒素对机体有很大毒害作用，可降低采食量，高剂量甚至引起死亡。此外，在饲粮中使用菜粕另一主要问题是可消化必需氨基酸不平衡。本试验结果表明，饲粮添加10%的双低菜粕(Gls为7.01 μmol/g)能显著降低1～21日龄黄羽肉鸡日增重，提高料重比；各阶段双低菜粕添加水平为5%、6%和10.5%时可显著降低显著降低1～63日龄黄羽肉鸡日增重，添加量达到10%、12%和17.5%时饲料增重比显著提高。Mawson等[9]报道，鸡饲粮中Gls含量在2～4 μmol/g时对生长无影响；当Gls增加到6～10 μmol/g时则生长受到抑制；当超过10 μmol/g时生长严重受阻。Min等[10]试验表明，以可消化氨基酸为基础在饲粮添加25%的加拿大双低菜粕对0～14和15～28日龄科比500肉仔鸡生长性能无负面影响。杨伟春[11]研究发现在6～20日龄小鸭饲粮中添加菜粕(Gls含量为25.1 μmol/g)达到15%时，可显著降低小鸭的日增重，提高料重比。这与本试验结果相符，说明菜粕添加水平过高不利于机体的生长发育，黄羽肉鸡相对肉仔鸡消化生理上的差异可能对菜粕利用偏低，添加水平不宜过高，以及不同的加工工艺及等级品种可能导致利用差异。

3.2 饲粮双低菜粕水平对黄羽肉鸡生化指标的影响

Gls的降解产物OZT和ITC可以引起甲状腺代谢功能缺陷和甲状腺肿大，OZT的这种作用不能通过补碘来加以拮抗[12]，并且高浓度的ITC对黏膜有强烈的刺激作用，易造起消化道黏膜损伤和局部坏死出血[13]。此外，Gls的降解产物中析出CN-毒性最剧烈，可致靶器官肝、肾功能受损。毒素还可引起体内活性氧增加发生脂质过氧化，使机体细胞内氧化和抗氧化平衡体系失调。Pearson等[14]报道，给产蛋鸡或肉仔鸡饲喂50%的高Gls菜粕饲粮，试鸡出现甲状腺肥大，肝脏增生，并导致血清种肝脏相关的GOT、LDH和碱性磷酸酶活性明显升高。高玉鹏等[15]用国产双低菜籽饼(Gls含量为7.55 μmol/g)作为育成期(8～20周龄)罗曼蛋鸡蛋白质饲料，菜籽饼用量为15%时生长发育正常，甲状腺不肿大，血清T3和T4浓度、肝脏和血浆GOT、GPT活性无不良影响，但添加量达到20%时，甲状腺肿大、肝脏出血、血清T3下降及TG上升。Mikulski等[6]在火鸡饲粮添加低Gls的菜粕显著降低了血清fT3水平，但fT4水平无明显变化。蒋玉琴等[16]在18日龄三黄鸡饲粮中添加18%的脱毒菜粕(Gls含量为36.6 μmol/g)饲养30 d，试鸡的甲状腺和肝脏切片也均未发现异常。占秀安等[17]研究表明，添加13%双低菜粕对肥育猪血清抗氧化指标有降低趋势，但未造成显著影响。张明明等[18]发现随着菜粕水平的增加，吉福罗非鱼SOD活性呈下降趋势，添加量达到60%时SOD活性显著低于对照组。而本试验中各阶段双低菜粕添加水平达到10%、12%和17.5%时试鸡血浆GSH和MDA含量与玉米豆粕型饲粮组相比也无明显变化，但显著降低了血浆fT3和fT4含量。因此，说明添加双低菜粕(Gls含量为7.01 μmol/g)并未对试鸡产生明显的氧化应激，但双低菜粕中的Gls代谢物会抑制甲状腺内活化碘与甲状腺结合以及干扰甲状腺球蛋白分解而抑制甲状腺素是否而影响甲状腺功能。CK广泛存在于骨骼肌、心肌和脑组织中，参与ATP的合成代谢，心肌损伤坏死或应激时血清CK水平增高。LDH是糖酵解的关键酶之一，细胞发生病变时，LDH活性通常会升高。GSTs是广泛分布于哺乳动物、植物、鸟类、昆虫、寄生虫及微生物体内的一组多功能同工酶，其主要功能是催化某些内源性或外来有害的亲电子基团与GSH的巯基偶联，增加其疏水性使其易于穿越细胞膜，分解后排出体外，从而达到解毒的目的[19]。本试验中各组间试鸡血浆CK、LDH和肝脏GSTs活性以及肝脏、肾脏、甲状腺、心脏和肌胃腺胃指数均未发生明显变化，而且组织切片分析表明肝小叶结构完整，无明显坏死、淤血、未见肝细胞脂肪变性和纤维组织增生，但在10%、12%和17.5%的双低菜粕组发现肝窦间隙变宽，中央静脉周围可见少量灶状淋巴细胞浸润。因此，进一步说明黄羽肉鸡各阶段双低菜粕添加水平达到10%、12%和17.5%时未对黄羽肉鸡机体组织造成明显破坏。

3.3 饲粮双低菜粕水平对黄羽肉鸡肉品质的影响

菜粕含有大量的非聚合酚类化合物，酚类化合物具有酸、苦、涩、辛辣等不良味道，而酯化酚酸约占全部酚类化合物含量的80%，而芥子酸占全部酯化酚酸含量的70.9%～96.7%。芥子酸酯化及芥子碱可以使褐色蛋鸡因三甲胺残留产生具有鱼腥味或胺味的鸡蛋[20]。有研究报道，饲粮添加20%的低Gls的菜粕对肉仔鸡胴体、胸肌率及肉品质也无负面影响[6,21,22]。Ward等[23]研究表明，在FMO3基因突变型的褐色蛋鸡中使用12%以上的加拿大菜粕便可使鸡蛋产生鱼腥味。Mikulski等[6]研究表明，饲粮添加12%的低Gls的菜粕，12周龄火鸡胸肌中的豆蔻酸和棕榈酸含量呈线性降低，油酸、亚油酸和亚麻酸含量呈线性升高；添加量达到18%时会显著提高试鸡胸肉黄度和滴水损失，并降低剪切力；添加菜粕对试鸡胸肉24 h的pH值和TBA值则无明显影响。张桂洁[24]报道在肉鸭饲粮中添加16%的加拿大双低菜粕对肉鸭宰后45 min的胸肌pH值、滴水损失、L*、a*和b*值无显著影响。本试验中，各阶段添加10%、12%和17.5%的双低菜粕可显著提高63日龄试鸡屠宰后45 min的胸肉a*值；添加双低菜粕对63日龄试鸡胸肉的嫩度、屠宰后45 min的pH、L*值、b*值和屠宰后96 h的pH、L*、a*、b*值和感官品尝评分均无显著影响。因此，添加双低菜粕对黄羽肉鸡胸肉肉品质也无明显影响。

4 结论

在本试验条件下，快长型黄羽肉鸡1～21、22～42和43～63日龄阶段分别添加2.5%、3%和7%的双低菜粕(Gls含量为7.01 μmol/g)不影响黄羽肉鸡的生长、甲状腺激素分泌、机体抗氧化功能及肉品质。

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Effect of Dietary Double-Low Rapeseed Meal Level on Production Performance, Blood Indexes and Meat Quality of Yellow-Feathered Broilers

(Key Laboratory of Animal Nutrition and Feed Science (South China) of Ministry of Agriculture State Key Laboratory of Livestock and Poultry Breeding Guangdong Public Laboratory of Animal Breeding and Nutrition Guangdong Key Laboratory of Animal Breeding and Nutrition Institute of Animal Science, Guangdong Academy of Agricultural Science1, Guangzhou 510640)(Guangdong Academy of Agricultural Science2, Guangzhou 510640)

The experiment was designed to study the effects of dietary double-low rapeseed meal on production performance, blood biochemistry and meat quality in yellow-feathered broilers aged from 1 to 63 days. The experience selected 1,200 fast-growth yellow-feathered cock at the age of 1 days which were randomly assigned to 5 groups, each consisiting of 6 replicates of 40 cocks. The basal diet (Ⅰ) was a typical corn-soybean ration while the experimental diets (Ⅱ to Ⅴ) substituted DL-RSM for soybean meal. The level of substitution in starter (1～21 d), grower (22～42 d) and finisher(43～63 d) diets was: Ⅱ, 2.5%, 3% then 7%; Ⅲ, 5%, 6% then 10.5%;

Ⅳ, 7.5%, 9% then 14%; Ⅴ, 10%, 12% then 17.5%. A sample of birds from each replicate was blood sampled and killed at the end (63 d) for carcass and biochemical analysis. Compared to the control diet (Ⅰ), diet V decreased average daily gain (ADG) and increased feed to gain ratio (F:G) between 1 to 21 d(<0.05); diets Ⅲ to V decreased body weight (BW) at 63 d (<0.05), and diet V increased F: G (<0.05). Diet V decreased fT3 and fT4 content in plasma at 63 d (<0.05). There was no differences from diet in plasma activities of glutamic-oxaloacetic transaminase, creatine kinase, lactate dehydrogenase or hepatic glutathione S-transferases activity (>0.05). Pathological changes in liver were not obviously detected. Increased double-low rapeseed meal content of the diet caused favorable changes in selected functional properties of the meat, including decrease in L* value and increase in a* value in broilers fed diets V (<0.05). There was no differences in breast meat sensory flavor, pH, L*, a* and b* values 96 h after slaughter among treatments (>0.05). In conclusion, Diet Ⅱ (2.5%, 3.0% then 7.0% double-low rapeseed meal) in Lingnan yellow-feathered broiler diets had no negative effects on growth performance, thyroid hormone secretion, antioxidant capacity and meat quality.

double-low rapeseed meal, yellow-feathered broiler, growth performance, biochemical indices, meat quality

国家肉鸡产业技术体系项目(CARS-42)，“十二五”国家科技支撑计划(2014BAD13B02)，广东省重点实验室建设支撑项目(2012A061100005)，广东省直科研机构创新能力建设项目(2012B060600005)